细胞培养容器制造技术

本发明专利技术提供一种细胞培养容器、其制造方法及使用了该细胞培养容器的细胞凝集块的制造方法，所述细胞培养容器的特征在于，在表面涂覆有下述共聚物，所述共聚物含有：包含下述式(a)表示的基团的重复单元、包含下述式(b)表示的基团的重复单元、和包含下述式(c)表示的基团的重复单元(式中，U

Cell culture container

The present invention provides a cell culture container, a manufacturing method thereof and a manufacturing method of cell agglutinators using the cell culture container. The cell culture container is characterized by coating the surface with the following copolymers, which contain repetitive units comprising the groups represented in formula (a), repetitive units comprising the groups represented in formula (b), and repetitive units comprising the groups represented in formula (b), and the following formula (a). C) Repetitive units of groups represented (in formula, U)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞培养容器
本专利技术涉及细胞培养容器、其制造方法及使用了该细胞培养容器的细胞凝集块(也称为细胞球(sphere))的制造方法。本专利技术尤其涉及特征在于在表面涂覆有具有抑制细胞附着的能力的共聚物的细胞培养容器及其制造方法。
技术介绍
近年来，用于使在动物、植物体内发挥不同作用的各种器官、组织、及细胞在机体外增殖或维持的技术逐渐发展。在机体外使这些器官、组织增殖或维持分别被称为器官培养、组织培养，在机体外使从器官、组织分离的细胞增殖、分化或维持被称为细胞培养。细胞培养是在培养基中使分离的细胞在机体外增殖、分化或维持的技术，对于详细分析机体内的各种器官、组织、细胞的功能及结构是不可缺少的。另外，利用该技术培养的细胞及/或组织已在化学物质、医药品等的药效及毒性评价、酶、细胞生长因子、抗体等有用物质的大量生产、修复由于疾病、缺损而丧失的器官、组织、细胞的再生医疗、植物的品种改良、基因重组作物的制成等各种领域中被利用。来源于动物的细胞根据其形状主要可分为悬浮细胞和贴壁细胞。悬浮细胞是生长·增殖不需要固着位置的细胞，贴壁细胞是生长·增殖需要固着位置的细胞，构成机体的大部分细胞是后者的贴壁细胞。作为贴壁细胞的培养方法，已知有单层培养、分散培养、包埋培养、微载体培养、及细胞凝集块(细胞球)培养等。尤其是，近年来，伴随着再生医疗领域的发展，作为在更接近机体内的环境中培养的方法，细胞球培养受到关注，报道了多种适于该培养的培养基组合物、培养基添加剂(例如，参见专利文献1及2)。另外，认为细胞球培养中，来自培养容器(基材)的刺激是影响培养结果的重要因素，人们需要在不存在来自培养容器的刺激的三维环境或完全的悬浮状态下培养细胞(尤其是细胞凝集块)(例如，参见专利文献3)。本申请的专利技术人关注了作为具有抑制各种生物材料附着的能力的涂覆材料而受到期待的具有磷酸酯基的聚合物，并反复进行了研究。结果，报道了：对于用包含特定的阴离子性基团和阳离子性基团的共聚物涂覆表面的至少一部分而得到的细胞培养容器而言，不仅可抑制细胞在容器表面(内部表面)的附着，而且涂层能牢固地固着于容器表面，因此，作为涂层向培养液中的溶出、放射线耐性得以改善的细胞培养容器是有用的(例如，参见专利文献4)。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第2014/017513号公报专利文献2：国际公开第2013/144372号公报专利文献3：日本特开2008-61609号公报专利文献4：国际公开第2014/0196652号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的目的在于提供细胞培养容器、其制造方法及使用了该细胞培养容器的细胞凝集块的制造方法。尤其是，本专利技术的目的在于提供特征在于在表面涂覆有具有抑制细胞附着的能力的共聚物的细胞培养容器、其制造方法及使用了该细胞培养容器的细胞凝集块的制造方法。以往，为了在三维环境中或完全的悬浮状态下培养细胞(尤其是细胞凝集块)，存在细胞附着于容器表面、以及细胞培养容器所带有的涂层向培养液中溶出这样的问题。另外，还存在通过细胞培养而生产·分泌的/培养基中包含的蛋白质附着于容器表面这样的问题。带有由亲水性化合物形成的涂层的细胞培养容器虽然能改善细胞向容器表面的附着，但仍然存在细胞培养容器所带有的涂层向培养液中溶出、蛋白质附着于容器表面等问题。用于解决课题的手段本申请的专利技术人继续关注于具有磷酸酯基的聚合物，并反复进行了深入研究。结果发现，对于用不仅包含特定的阴离子性基团和阳离子性基团、而且还包含特定的疏水性基团的共聚物涂覆表面的至少一部分而得到的细胞培养容器而言，不仅可抑制细胞以及蛋白质向容器表面的附着，而且涂层能牢固地固着于容器表面，因此，作为涂层向培养液中的溶出得以改善的细胞培养容器是有用的，从而完成了本专利技术。即，本专利技术如下所述：1.细胞培养容器，其特征在于，在表面涂覆有下述共聚物，所述共聚物含有：包含下述式(a)表示的基团的重复单元、包含下述式(b)表示的基团的重复单元、和包含下述式(c)表示的基团的重复单元；[化学式1][式中，Ua1、Ua2、Ub1、Ub2及Ub3各自独立地表示氢原子、或碳原子数为1～5的直链或支链烷基；Rc表示碳原子数为1～18的直链或支链烷基、碳原子数为3～10的脂环式烃基、碳原子数为6～10的芳基、碳原子数为7～15的芳烷基或碳原子数为7～15的芳基氧基烷基(此处，前述芳基部分可以被可经卤素原子取代的碳原子数为1～5的直链或支链烷基取代)；An-表示选自由卤化物离子、无机酸根离子、氢氧化物离子及异硫氰酸根离子组成的组中的阴离子]2.如上述1所述的细胞培养容器，其中，包含上述式(a)、(b)及(c)表示的基团的重复单元分别为由下述式(A)、(B)及(C)表示的单体衍生的重复单元；[化学式2][式中，Ta、Tb、Tc、Ua1、Ua2、Ub1、Ub2及Ub3各自独立地表示氢原子、或碳原子数为1～5的直链或支链烷基；Qa及Qb各自独立地表示单键、酯键或酰胺键，Qc表示单键、醚键或酯键；Ra及Rb各自独立地表示可以被卤素原子取代的碳原子数为1～10的直链或支链亚烷基，Rc表示碳原子数为1～18的直链或支链烷基、碳原子数为3～10的脂环式烃基、碳原子数为6～10的芳基、碳原子数为7～15的芳烷基或碳原子数为7～15的芳基氧基烷基(此处，前述芳基部分可以被可经卤素原子取代的碳原子数为1～5的直链或支链烷基取代)；An-表示选自由卤化物离子、无机酸根离子、氢氧化物离子及异硫氰酸根离子组成的组中的阴离子；m表示0～6的整数]3.如上述2所述的细胞培养容器，其中，m为1，Ra及Rb各自独立地表示亚乙基或亚丙基。4.如上述1～3中任一项所述的细胞培养容器，其中，上述共聚物还包含由下述式(D)或(E)表示的单体衍生的交联结构；[化学式3](式中，Td、Te及Ue各自独立地表示氢原子、或碳原子数为1～5的直链或支链烷基；Rd及Re各自独立地表示可以被卤素原子取代的碳原子数为1～10的直链或支链亚烷基；n表示1～6的整数)5.如上述4所述的细胞培养容器，其中，Td及Te各自独立地表示氢原子或甲基，Ue表示氢原子，Rd及Re各自独立地表示亚乙基或亚丙基。6.如上述1～5中任一项所述的细胞培养容器，其具有抑制蛋白质附着的能力。7.细胞培养容器的制造方法，其包括在容器表面的至少一部分涂覆下述共聚物的工序，所述共聚物含有：包含下述式(a)表示的基团的重复单元、包含下述式(b)表示的基团的重复单元、和包含下述式(c)表示的基团的重复单元；[化学式4][式中，Ua1、Ua2、Ub1、Ub2及Ub3各自独立地表示氢原子、或碳原子数为1～5的直链或支链烷基；Rc表示碳原子数为1～18的直链或支链烷基、碳原子数为3～10的脂环式烃基、碳原子数为6～10的芳基、碳原子数为7～15的芳烷基或碳原子数为7～15的芳基氧基烷基(此处，前述芳基部分可以被可经卤素原子取代的碳原子数为1～5的直链或支链烷基取代)；An-表示选自由卤化物离子、无机酸根离子、氢氧化物离子及异硫氰酸根离子组成的组中的阴离子]8.如上述7所述的制造方法，其中，包含上述式(a)、(b)及(c)表示的基团的重复单元分别为由下述式(A)、(B)及(C)表示的单体衍生的重复单元；[化学式5][式中，T本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.细胞培养容器，其特征在于，在表面涂覆有下述共聚物，所述共聚物含有：包含下述式(a)表示的基团的重复单元、包含下述式(b)表示的基团的重复单元、和包含下述式(c)表示的基团的重复单元；[化学式1]

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.27 JP 2016-1060411.细胞培养容器，其特征在于，在表面涂覆有下述共聚物，所述共聚物含有：包含下述式(a)表示的基团的重复单元、包含下述式(b)表示的基团的重复单元、和包含下述式(c)表示的基团的重复单元；[化学式1]-Rc(c)式中，Ua1、Ua2、Ub1、Ub2及Ub3各自独立地表示氢原子、或碳原子数为1～5的直链或支链烷基；Rc表示碳原子数为1～18的直链或支链烷基、碳原子数为3～10的脂环式烃基、碳原子数为6～10的芳基、碳原子数为7～15的芳烷基或碳原子数为7～15的芳基氧基烷基(此处，所述芳基部分可以被可经卤素原子取代的碳原子数为1～5的直链或支链烷基取代)；An-表示选自由卤化物离子、无机酸根离子、氢氧化物离子及异硫氰酸根离子组成的组中的阴离子。2.如权利要求1所述的细胞培养容器，其中，包含所述式(a)、(b)及(c)表示的基团的重复单元分别为由下述式(A)、(B)及(C)表示的单体衍生的重复单元；[化学式2]式中，Ta、Tb、Tc、Ua1、Ua2、Ub1、Ub2及Ub3各自独立地表示氢原子、或碳原子数为1～5的直链或支链烷基；Qa及Qb各自独立地表示单键、酯键或酰胺键，Qc表示单键、醚键或酯键；Ra及Rb各自独立地表示可以被卤素原子取代的碳原子数为1～10的直链或支链亚烷基，Rc表示碳原子数为1～18的直链或支链烷基、碳原子数为3～10的脂环式烃基、碳原子数为6～10的芳基、碳原子数为7～15的芳烷基或碳原子数为7～15的芳基氧基烷基(此处，所述芳基部分可以被可经卤素原子取代的碳原子数为1～5的直链或支链烷基取代)；An-表示选自由卤化物离子、无机酸根离子、氢氧化物离子及异硫氰酸根离子组成的组中的阴离子；m表示0～6的整数。3.如权利要求2所述的细胞培养容器，其中，m为1，Ra及Rb各自独立地表示亚乙基或亚丙基。4.如权利要求1～3中任一项所述的细胞培养容器，其中，所述共聚物还包含由下述式(D)或(E)表示的单体衍生的交联结构；[化学式3]式中，Td、Te及Ue各自独立地表示氢原子、或碳原子数为1～5的直链或支链烷基，Rd及Re各自独立地表示可以被卤素原子取代的碳原子数为1～10的直链或支链亚烷基；n表示1～6的整数。5.如权利要求4所述的细胞培养容器，其中，Td及Te各自独立地表示氢原子或甲基，Ue表示氢原子，Rd及Re各自独立地表示亚乙基或亚丙基。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：广井佳臣，安部菜月，西野泰斗，
申请(专利权)人：日产化学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP