The invention relates to the field of vaccines, and discloses a protein vaccination and its potency detection method. The protein vaccine contains a virus recombinant protein D8L expressed by yeast with purity of removing endotoxin > 90%. The preparation method is as follows: the recombinant protein D8L expressed by yeast with purity > 90% is treated by removing endotoxin to obtain endotoxin content.
【技术实现步骤摘要】
一种蛋白牛痘疫苗及其效力检测方法
本专利技术涉及疫苗领域，尤其涉及一种蛋白牛痘疫苗及其效力检测方法。
技术介绍
牛痘病毒属于痘病毒家族正痘病毒属的成员，痘病毒包括天花病毒，猴痘病毒，牛痘病毒和鼠痘病毒等。牛痘病毒有一个复杂庞大，高达200Kb的双链DNA基因组，,能编码病毒胞浆复制所需的大多数基因。牛痘病毒是痘病毒家族中研究得最多的，活体的牛痘病毒疫苗在上世纪70年代末就被用于免疫天花病毒。时至今日，虽然天花已经灭绝，然而牛痘疫苗接种率的下降，使恐怖分子有机会重新制造天花病毒，危害公共安全。广泛接种疫苗被认为是防范这一威胁的有效手段。然而，目前以活体牛痘苗为主的疫苗常伴有较高频率的严重副作用，尤其对于患有湿疹和免疫缺陷的病人。因此，迫切需要开发新的更加安全的疫苗，一方面是控制实质的天花感染，另一方面也是防止活体牛痘病毒制备的天花疫苗引起的潜在危害。传统的牛痘病毒疫苗主要是采用活体的牛痘病毒制备而成，相比之下，一种更安全的替代方法是使用高度纯化的重组蛋白疫苗。但是，许多重组蛋白激活宿主免疫应答的能力较弱，因此蛋白疫苗需要与佐剂共同使用来增强抗原的免疫原性。一般认为，...
【技术保护点】
1.一种蛋白牛痘疫苗，其特征在于：含有酵母表达且去除内毒素的纯度＞90%的病毒重组蛋白D8L。
【技术特征摘要】
1.一种蛋白牛痘疫苗，其特征在于：含有酵母表达且去除内毒素的纯度＞90%的病毒重组蛋白D8L。2.如权利要求1所述的一种蛋白牛痘疫苗，其特征在于制备方法包括以下步骤：1）离心柱处理：对离心柱中树脂在首次使用及每次使用后进行再生和平衡；2）蛋白样品准备：将酵母表达的纯度＞90%的病毒重组蛋白D8L溶于PBS中，得到蛋白溶液；3）上样：揭去离心柱的顶帽，塞紧底部塞子，在离心柱中加入蛋白溶液，套上新顶帽，将离心柱颠倒混匀数次，直至离心柱中的树脂完全悬浮在液体中；4）将离心柱在垂直混匀器中上下颠倒混匀；5）松开离心柱新顶帽，去除底部塞子，将离心柱放置于收集管中，离心处理，收集管中得到去除内毒素的病毒重组蛋白D8L溶液。3.如权利要求2所述的一种蛋白牛痘疫苗，其特征在于：步骤2）中，所述蛋白溶液的浓度为0.15-0.25mg/mL。4.如权利要求2所述的一种蛋白牛痘疫苗，其特征在于：步骤3）中，离心柱中加入400-600μL蛋白溶液。5.如权利要求2所述的一种蛋白牛痘疫苗，其特征在于：步骤4）中，将离心柱在0-6℃的垂直混匀器中上下颠倒混匀50-70min。6.如权利要求2所述的一种蛋白牛痘疫苗，其特征在于：步骤5）中，离心条件为400-600×g，40-80秒。7.如权利要求2所述的一种蛋白牛痘疫苗，其特征在于：步骤5）后，按步骤1）方法对离心柱中的树脂进行再生，然后储存于15-25wt%的乙醇溶液中，储存温度为2-8℃。8.如权利要求2或7所述的一种蛋白牛痘疫苗，其特征在于：步骤1）中，离心柱中树脂的再生和平衡的具体方法为：1.1）将离心柱恢复到室温；1.2）拧开离心柱底部开关，旋松顶部帽子，将离心柱放置于收集管中，离心处理，除去离心柱中的储存液，弃收集管中液体；1.3）揭去顶帽，塞上底部塞子，在离心柱中加入0.15-0.25NNaOH再生，套上新顶帽，将离心柱颠倒混匀数次，直至离心柱中的树脂完全悬浮在液体中，室温静止过夜；1.4）松开顶帽，去除底部塞子，将离心柱放置于收集管中，离心处理，弃去收集管中的液体；1.5）揭去顶帽，塞紧底部塞子，在离...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨文君，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：浙江康佰裕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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