一种基于核酸剪切酶I免标记灵敏检测河豚毒素TTX的方法技术

本发明专利技术属生物检测技术领域，为解决现有测定河豚毒素的方法存在的操作复杂繁琐、测定时间长、反应灵敏度低、选择性差、成本高昂等问题，提供一种基于核酸剪切酶I免标记灵敏检测河豚毒素TTX的方法。在磷酸缓冲液中加入核酸适配体，以小檗碱为荧光探针，加入靶物质TTX引起核酸适配体构型的变化使体系荧光信号发生变化，加入核酸剪切酶I，使体系的背景信号减小，放大体系的荧光信号，在激发波长为365 nm，发射波长为530 nm下检测荧光强度。灵敏度显著提高；检测TTX含量的线性范围较宽0.03nM～6000nM，检测限为0.015nM，且仅需一台普通的荧光仪即可完成，检测成本较低。

【技术实现步骤摘要】
一种基于核酸剪切酶I免标记灵敏检测河豚毒素TTX的方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种基于核酸剪切酶I免标记灵敏检测河豚毒素TTX的方法。以小檗碱为荧光探针，利用加入靶物质TTX引起核酸适配体构型的变化从而使体系的荧光信号发生变化，核酸剪切酶I使体系的背景信号明显减小，放大了体系的荧光信号，建立了一种快速灵敏检测TTX的方法。该方法操作简便、成本低廉、选择性好、灵敏度高、准确度高、线性范围宽。
技术介绍
河豚毒素（英文：Tetrodotoxin，缩写：TTX）是鲀鱼类（俗称河豚鱼）及其它生物体内含有的一种生物碱。其分子式为C11H17O8N3，分子量为319。是一种强力的神经毒素，目前并没有有效的解毒剂，它会和神经细胞的细胞膜上的快速钠离子通道结合，令神经中的动作电位受阻截。它的名字来自鲀形目，为此目下的鱼类大多带有这种毒素，包括河鲀、二齿鲀、翻车鲀及鳞鲀等。河鲀毒素化学性质和热性质均很稳定，盐腌或日晒等一般烹调手段均不能将其破坏，只有在高温加热30min以上或在碱性条件下才能被分解。中毒潜伏期很短，发病急，如果抢救不及时，中毒后最快的10min内死亡，最迟4-6h死亡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于核酸剪切酶I免标记灵敏检测河豚毒素TTX的方法，其特征在于：在磷酸缓冲液中加入核酸适配体和小檗碱，以小檗碱为荧光探针，加入靶物质TTX引起核酸适配体构型发生变化，使体系的荧光信号改变，然后加入核酸剪切酶I，核酸剪切酶I使体系的背景信号减小，放大体系的荧光信号，在激发波长为365 nm，发射波长为530 nm下检测荧光强度。

【技术特征摘要】
1.一种基于核酸剪切酶I免标记灵敏检测河豚毒素TTX的方法，其特征在于：在磷酸缓冲液中加入核酸适配体和小檗碱，以小檗碱为荧光探针，加入靶物质TTX引起核酸适配体构型发生变化，使体系的荧光信号改变，然后加入核酸剪切酶I，核酸剪切酶I使体系的背景信号减小，放大体系的荧光信号，在激发波长为365nm，发射波长为530nm下检测荧光强度。2.根据权利要求1所述的一种基于核酸剪切酶I免标记灵敏检测河豚毒素TTX的方法，其特征在于：所述核酸适配体为：TTX-aptamer：5’-tttttaaagtgtgcccacggagccgacagg-3’。3.根据权利要求1或2所述的一种基于核酸剪切酶I免标记灵敏检测河豚毒素TTX的方法，其特征在于：具体检测方法为：（1）建立标准曲线：在pH=7.5，含2.0～6.0mMNa+，2.0～4.0mMMg2+的1mM磷酸盐缓冲溶液中，加入浓度为0.1～0.5μM的核酸适配体3μL和若干浓度梯度的靶物质TTX，加入浓度为20～40μM的小檗碱溶液10μL为荧光探针，定容至1ml；常温静置5～10min后加入浓度为30～40U的核酸剪切酶Ⅰ，40℃～43℃孵育5-10min后测定体系的荧光强度F，同样方法做荧光核酸适配体传感体系不加靶物质TTX的空白溶液记为F0；以TTX的浓度C为横坐标，(F-F0)/F0为纵坐标，建立标准曲线...

【专利技术属性】
技术研发人员：兰艺凤，卫艳丽，宋秀丽，董川，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西,14