一种羊踯躅提取物的抗炎活性检测方法和应用技术

本发明专利技术涉及羊踯躅提取物的抗炎活性检测方法和应用，包括建立羊踯躅提取物的制备方法，构建羊踯躅提取物抗炎活性细胞检测模型，建立羊踯躅提取物抑制炎症细胞中炎症因子及相关基因表达的分析方法。本发明专利技术结果显示，羊踯躅叶片甲醇提取物有较强的抗炎活性，能够明显抑制由脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子‑α(TNF‑α)和白介素1β(IL‑1β)等炎症因子的分泌及其基因的表达，也显著抑制炎症相关通路中两个关键酶基因iNOS和COX‑2的表达。

【技术实现步骤摘要】
一种羊踯躅提取物的抗炎活性检测方法和应用
本专利技术涉及羊踯躅提取物，尤其涉及羊踯躅提取物的抗炎活性检测方法和将羊踯躅提取物用于抗炎的方法。
技术介绍
炎症是指机体受到物理损伤、细菌感染和其他有害刺激所引起的一种以防御反应为主的复杂的生理和病理反应，是机体的一种防御机制，主要表现为红、热、肿、痛甚至功能障碍等临床症状。风湿性关节炎(RA)、慢性支气管炎、慢性胃炎、炎症性肠病、动脉粥样硬化、老年痴呆和神经退行性疾病等多种疾病都伴随着炎症反应，所以能否有效的控制炎症的发展在疾病的治疗中起到了重要的作用。现有的抗炎药物主要分为载体抗炎药物和非甾体抗炎药物。非甾体抗炎药物主要以缓解为主治标不治本，抗炎效果不明显。甾体抗炎药物虽然疗效确切但常伴随着明显的不良反应。中草药在我国的应用已有数千年历史，是我国的宝贵财富，千百年来为华夏子孙的繁衍提供了健康保障。中药不但资源丰富，疗效显著，而且还具有副作用小，多成分多靶点的优点，因此从中药中研发新型抗炎药物逐步成为研究的热点，是众多国内外科学家和药企的攻关课题。炎症是一个复杂的生理和病理过程，涉及到多种细胞的参与和细胞因子的释放，其中，巨噬细胞起着重要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测羊踯躅提取物抗炎活性的方法，包括以下步骤：(1)将新鲜的羊踯躅叶片清洗干净，冷冻干燥后粉碎，得到羊踯躅叶片粉末；用甲醇溶液回流提取羊踯躅叶片粉末，得到羊踯躅叶的甲醇提取液；将羊踯躅叶的甲醇提取液过滤，再将滤液用旋转蒸发仪在45～50℃条件下浓缩成膏状，然后将浸膏冷冻干燥成粉末，用二甲亚砜将粉末溶解，得到羊踯躅提取物；(2)羊踯躅提取物的用药浓度评估：将处于对数生长期的RAW264.7细胞接种于孔板中孵育12小时，再用不同浓度的羊踯躅提取物处理并再培养24小时；然后检测羊踯躅提取物对RAW264.7细胞的细胞毒性作用，从而得出不同浓度的羊踯躅提取物对RAW264.7细胞的毒性；(3)...

【技术特征摘要】
1.一种检测羊踯躅提取物抗炎活性的方法，包括以下步骤：(1)将新鲜的羊踯躅叶片清洗干净，冷冻干燥后粉碎，得到羊踯躅叶片粉末；用甲醇溶液回流提取羊踯躅叶片粉末，得到羊踯躅叶的甲醇提取液；将羊踯躅叶的甲醇提取液过滤，再将滤液用旋转蒸发仪在45～50℃条件下浓缩成膏状，然后将浸膏冷冻干燥成粉末，用二甲亚砜将粉末溶解，得到羊踯躅提取物；(2)羊踯躅提取物的用药浓度评估：将处于对数生长期的RAW264.7细胞接种于孔板中孵育12小时，再用不同浓度的羊踯躅提取物处理并再培养24小时；然后检测羊踯躅提取物对RAW264.7细胞的细胞毒性作用，从而得出不同浓度的羊踯躅提取物对RAW264.7细胞的毒性；(3)羊踯躅提取物抗炎活性的细胞检测模型构建及一氧化氮浓度测定：将处于对数生长期的RAW264.7细胞接种于孔板中，培养12小时后去上清；加入含有脂多糖的DMEM培养基刺激RAW264.7细胞建立炎症模型；2小时后加入不同浓度的羊踯躅提取物，孵育24小时，检测培养液中一氧化氮的浓度，从而得出羊踯躅提取物对一氧化氮的抑制率；(4)羊踯躅提取物抑制炎症因子的分析：将处于对数生长期的RAW264.7细胞接种于孔板中孵育12小时；加入脂多糖与RAW264.7细胞共培养，2小时后加入不同浓度的羊踯躅提取物共培养24小时；测定细胞培养液中肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β的浓度，从而得出羊踯躅提取物抑制RAW264.7细胞分泌的炎症因子活性；(5)羊踯躅提取物抑制炎症相关基因表达的分析：将处于对数生长期的RAW264.7细胞接种于孔板中孵育过夜；并用脂多糖预处理细胞2小时，然后用不同浓度的羊踯躅提取物处理细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗向东，张金，戴亮芳，刘见，董丽敏，谢建坤，
申请(专利权)人：江西师范大学，
类型：发明
国别省市：江西,36