细胞分泌分析的装置和方法制造方法及图纸

提供了用于鉴定包含表现出细胞外效应的效应细胞的细胞群的方法和装置。该方法包括在多个开放室中保留多个细胞群，每个细胞群任选地包含一种或多种效应细胞。每个开放室可以包括读出颗粒群，并且开放室存在于包括第一组件和任选的第二组件的装置的第一组件中。开放室的平均纵横比≥0.6，并且第一组件与第二组件形成可逆密封。该方法还包括在所述室内孵育多个细胞群或其子集以及一种或多种读出颗粒或其子集，分析细胞群中细胞外效应的存在，其中读出颗粒提供细胞外效应的直接或间接读出，以及基于分析步骤的结果确定多个细胞群中的一个或多个细胞群内的一种或多种细胞是否表现出细胞外效应。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞分泌分析的装置和方法相关申请的交叉引用本申请要求于2016年3月17日提交的美国临时专利申请连续号62/309,663的优先权，将其公开内容通过引用整体并入。专利技术背景细胞是生命的基本单位，并且没有两个细胞是相同的。实际上，已经显示看似相同的克隆细胞群在群体内的细胞之间显示出表型差异。从细菌细胞到部分分化的细胞(例如成体干细胞和祖细胞)到高度分化的哺乳动物细胞(例如免疫细胞，如抗体分泌细胞(ASC))的所有生命水平均存在细胞差异。细胞状态、功能和应答的差异可以来自多种机制，包括不同的历史、不同的分化状态、表观遗传变化、细胞周期效应、随机变化、基因组序列差异、基因表达、蛋白表达和不同的细胞相互作用效应等。因此，开发用于分析单细胞特性的敏感工具令人非常感兴趣。许多细胞类型分泌具有生物学功能的蛋白。例如，不同的免疫细胞分泌多种因子，包括通过细胞信号转导起作用的生长因子、促进免疫激活或抑制的细胞因子以及特异性识别病原体(包括病毒、细菌、细胞、蛋白、聚糖或其他外来激发)的抗体。抗体还可以识别作为抗癌应答或自身免疫病症的一部分的非外来抗原(自体抗原或自身抗原)。由此，测量细胞分泌的蛋白的量和/或细胞分泌的蛋白的特性(例如序列、结合伴侣)的能力令人非常感兴趣。理想的是，对个体细胞进行这样的测量，以使测量可以用于鉴定与相同环境或群体内的其他细胞相比任何给定细胞分泌的蛋白的特性的差异。例如，分析单一或少量ASC分泌的抗体可以提供在对大量群体进行相同分析时不可获得的关于个体细胞的信息(例如抗体结合特性、功能作用)。颌类脊椎动物的适应性免疫系统能够产生多种不同的抗体。这种多样性通过多种机制产生，包括可变区基因的组合重组，以在最终表达为独特的抗体的重链和轻链基因中产生遗传编码的多样性。在人中，这种基因重组发生在B细胞发育期间，并且可以在个体中产生数十亿种不同的抗体。激发之后，表达识别激发的抗体的B细胞被激活并扩增以产生无性繁殖的相关的B细胞。在该扩增期间，体细胞超变和选择导致群体中一些抗体的亲和力提高。该过程的结果是表达多种不同抗体的多种多样的B细胞。这些B细胞成熟为继续将抗体分泌到介质中的浆细胞或者成熟为表达膜结合抗体的记忆B细胞。为了鉴定具有改善的特性(例如亲和力、功能活性)的群体中的抗体，应将个体抗体以及因此ASC作为个体细胞进行研究。有效鉴定结合特定靶标的抗体和/或特定功能作用的能力对于产生用于研究、诊断和治疗开发的抗体令人非常感兴趣。具有最佳治疗特性的抗体，特别是靶向表面受体的抗体的发现仍然是药物开发中的严重瓶颈。在针对免疫的应答中，动物可以产生数百万种不同的单克隆抗体(mAb)。每种mAb由称为抗体分泌细胞(ASC)的单一细胞产生，并且每种ASC仅产生一种类型的mAb。因此，例如用于药物发现目的的抗体分析适用于单细胞分析。然而，当以常规分析形式的体积分析时，即使单独分析ASC而不是大量细胞群中，由于单一ASC仅产生少量抗体，抗体太稀，使其完全检测不到。单细胞分析方法提供了增加鉴定新抗体的速度、通量和效率的方法。单细胞抗体表征方法的常用主题是使用小体积限制来增加分析灵敏度。一旦鉴定出目标细胞，就将它们回收以用于后续分析，包括其抗体基因的测序和/或可用于后续实验的更大量抗体的表达。用于筛选和选择来自单一细胞的抗体的小型化形式的实例包括基于板的方法(Czerkinsky等人.(1983).JournalofImmunologicalMethods65(1-2),pp.109-121；Leslie等人.(1996).FasebJournal10(6),pp.346-346)、微流体装置(Koster等人.(2008).LabonaChip8(7),pp.1110-1115；Mazutis等人.(2013).NatureProtocols8(5),pp.870-891；Singhal等人.(2010).AnalyticalChemistry82(20),pp.8671-8679)、微型印刷(microprinting)(Loveet等人.(2006).NatureBiotechnology24(6),pp.703-707)和开放微孔阵列(Jin等人.(2011).NatureProtocols6(5),pp.668-676；Wrammert等人.(2008).Nature453(7195),pp.667-U10)。尽管存在用于单一ASC分析的技术，但是它们仍然受到低通量、灵敏度和可以进行的表征类型的困扰。本专利技术解决了本领域对于用于进行单一抗体分泌细胞分析的更稳健的装置、仪器和分析的需求。专利技术概述在一个方面，本专利技术涉及用于分析可归因于单一效应细胞的细胞外效应的平台。在一实施方案中，效应细胞是分泌生物因子例如抗体(ASC)的细胞。在一实施方案中，细胞外效应是细胞增殖、生长减少、细胞凋亡、裂解、分化、感染、结合(例如与细胞表面受体或表位结合)、形态学变化、信号级联的诱导或抑制、酶抑制、病毒抑制、细胞因子抑制或补体激活。在一实施方案中，平台是双组件微流体装置，其包括第一组件和第二组件，所述第一组件具有开放微室。在一个实施方案中，该装置是图4-8之一中描绘的装置。在一个方面，提供了用于鉴定包含显示细胞外效应的效应细胞的细胞群的方法。在该方面的一个实施方案中，在具有第一组件和第二组件的双组件微流体装置或者包括开放微室的单组件装置中分析一种或多个细胞群。该方法包括在位于微流体装置第一组件内的多个不同室中保留个体细胞群，各细胞群任选地包含一种或多种效应细胞，其中在单个室中保留个体细胞群。各室的纵横比(定义为高度比最小横向尺寸)≥约0.6，例如≥0.7，≥1或者≥1但≤约10。可选地，装置中各室的平均纵横比≥约0.6，例如≥0.7，≥1或者≥1但≤约10。多个开放室的一个或多个中的内容物还包含含有一种或多种读出颗粒的读出颗粒群。使微流体装置的第二组件与第一组件接触，以在两个组件之间产生可逆密封或可逆部分密封。第一组件和第二组件中的一个或两者的接触表面可以包括微尺度结构(如通道结构或室结构)，以使当进行这种密封时，装置第一组件的一个或多个开放室可以关闭或基本关闭。此外，当使第二组件与第一组件接触时，例如当通道结构存在于第二组件中时，两个或更多个开放室可以互连。该方法还包括在多个开放室中的一个或多个内孵育多个细胞群或其子集以及一种或多种读出颗粒或其子集；分析多个细胞群或其子集中细胞外效应的存在，其中读出颗粒群或其亚群提供细胞外效应的直接或间接读出；以及基于分析步骤的结果确定多个细胞群中的一种或多个细胞群的一种或多种效应细胞是否表现出细胞外效应。在一实施方案中，效应细胞是分泌生物因子(例如抗体)的细胞。只要在特定室内检测到细胞外效应的存在，就不必初始鉴定显示细胞外效应的具体效应细胞。也就是说，如果需要进一步表征以识别显示细胞外效应的特定细胞，则可以回收对所述效应进行测量的室中的一些或所有细胞。附图简述图1是用于单一效应细胞鉴定和选择的一个实施方案的过程流程图。单一细胞获自任何动物或培养细胞群，并任选地富集效应细胞群。将使用双组件微流体装置的高通量微流体分析用于对在一些情况下存在于异质细胞群中的单一效应细胞分泌的抗体进行功能筛选。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鉴定包含显示细胞外效应的效应细胞的细胞群的方法，其包括：在平均纵横比(室高度：最小横向尺寸)≥0.6的多个开放室中保留多个细胞群，其中所述多个开放室存在于包括第一组件和任选地第二组件的微流体装置的第一组件中，其中所述第一组件与所述任选地第二组件形成可逆密封，其中所述多个细胞群中的个体细胞群任选地包含一种或多种效应细胞，并保留在所述多个开放室的单个开放室中，其中所述多个开放室或其子集中的单个开放室还包括包含一种或多种读出颗粒的读出颗粒群，孵育所述开放室中的内容物，分析所述多个开放室或其子集中细胞外效应的存在，其中所述读出颗粒群或其亚群提供所述细胞外效应的直接或间接读出，以及基于分析步骤的结果确定个体细胞群中的一种或多种细胞是否表现出所述细胞外效应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.17 US 62/309,6631.鉴定包含显示细胞外效应的效应细胞的细胞群的方法，其包括：在平均纵横比(室高度：最小横向尺寸)≥0.6的多个开放室中保留多个细胞群，其中所述多个开放室存在于包括第一组件和任选地第二组件的微流体装置的第一组件中，其中所述第一组件与所述任选地第二组件形成可逆密封，其中所述多个细胞群中的个体细胞群任选地包含一种或多种效应细胞，并保留在所述多个开放室的单个开放室中，其中所述多个开放室或其子集中的单个开放室还包括包含一种或多种读出颗粒的读出颗粒群，孵育所述开放室中的内容物，分析所述多个开放室或其子集中细胞外效应的存在，其中所述读出颗粒群或其亚群提供所述细胞外效应的直接或间接读出，以及基于分析步骤的结果确定个体细胞群中的一种或多种细胞是否表现出所述细胞外效应。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述微流体装置包括所述第二组件，并且所述第二组件包括经多层软光刻(MSL)制造的多个层。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第二组件包括一个或多个流道。4.根据权利要求3所述的方法，其还包括经所述一个或多个流道将一种或多种试剂递送到所述开放室。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述一种或多种效应细胞包括抗体分泌细胞(ASC)。6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述一种或多种效应细胞包括浆细胞、B细胞、浆母细胞、通过记忆B细胞扩增产生的细胞、杂交瘤细胞、T细胞、CD8+T细胞和CD4+T细胞、工程化以产生抗体的重组细胞、工程化以表达T细胞受体的重组细胞或者它们的组合。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述个体细胞群包含平均约2至约250个细胞，约10至约100个细胞，约50至约100个细胞，约10至约50个细胞，约2至约50个细胞，或者约2至约10个细胞。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述读出颗粒群中的一种或多种包含一种或多种读出珠、一种或多种读出细胞或其组合。9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述读出颗粒群中的一种或多种包含蛋白或肽。10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述读出颗粒群中的一种或多种包含病毒颗粒、细胞因子、趋化因子、神经递质、生长因子、激素、膜提取物、脂质颗粒、稳定受体、受体胞外结构域、用膜提取物功能化的囊泡、用膜提取物功能化的珠、工程化以稳定为可溶蛋白的G蛋白偶联受体(GPCR)或者它们的组合。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中经所述第一组件中存在的微流体通道将所述多种读出颗粒群添加至所述开放室。12.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中经所述第二组件中存在的微流体通道将所述多种读出颗粒群添加到所述开放室中。13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述多种读出颗粒群或其子集包含在其表面表达ATP结合盒转运蛋白(ABC转运蛋白)的一种或多种读出细胞，和所述细胞外效应是所述ABC转运蛋白的拮抗作用、所述ABC转运蛋白的激动作用或者所述一种或多种效应细胞或所述一种或多种效应细胞分泌的分子与所述ABC转运蛋白的结合。14.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述多种读出颗粒群或其子集包含在其表面表达G蛋白偶联受体(GPCR)或溶解性GPCR的一种或多种读出细胞，和所述细胞外效应是所述GPCR的拮抗作用、所述GPCR的激动作用或者所述一种或多种效应细胞或所述一种或多种效应细胞分泌的分子与所述GPCR的结合。15.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述多种读出颗粒群或其子集包含在其表面表达酪氨酸激酶受体(RTK)的一种或多种读出细胞，和所述细胞外效应是所述RTK的拮抗作用、所述RTK的激动作用或者所述一种或多种效应细胞或所述一种或多种效应细胞分泌的分子与所述RTK的结合。16.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述多种读出颗粒群或其子集包含在其表面表达离子通道的一种或多种读出细胞，和所述细胞外效应是所述离子通道的拮抗作用、所述离子通道的激动作用或者所述一种或多种效应细胞或所述一种或多种效应细胞分泌的分子与所述离子通道的结合。17.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述多种读出颗粒群或其子集包含在其表面表达具有内在酶活性的受体的一种或多种读出细胞，和所述细胞外效应是所述具有内在酶活性的受体的拮抗作用、所述具有内在酶活性的受体的激动作用或者所述一种或多种效应细胞或所述一种或多种效应细胞分泌的分子与所述具有内在酶活性的受体结合。18.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述多种读出颗粒群或其子集包含表达细胞因子受体的一种或多种读出细胞，和所述细胞外效应是所述细胞因子受体的拮抗作用、所述细胞因子受体的激动作用或者所述一种或多种效应细胞或所述一种或多种效应细胞分泌的分子与所述细胞因子受体的结合。19.根据权利要求14所述的方法，其中所述GPCR是趋化因子受体、细胞因子受体、A类GPCR、B类GPCR、粘附GPCR、卷曲GPCR、乙酰胆碱受体、褪黑素受体、黑素皮质素受体、胃动素受体、溶血磷脂(LPA)受体、腺苷受体、肾上腺素能受体、血管紧张素受体、缓激肽受体、降钙素受体、钙敏感受体、大麻素受体、趋化因子受体、胆囊收缩素受体、补体成分(C5AR1)受体、促肾上腺皮质激素释放因子受体、多巴胺受体、内皮分化基因受体、内皮素受体、甲酰肽样受体、甘丙肽受体、胃泌素释放肽受体、受体饥饿素受体、抑胃多肽受体、胰高血糖素受体、促性腺激素释放激素受体、组胺受体、Kisspeptin(KiSS1)受体、白三烯受体、黑色素浓集激素受体、黑皮质素受体、褪黑素受体、胃动素受体、神经肽受体、烟酸、阿片受体、食欲素受体、孤儿受体、血小板活化因子受体、前动力蛋白受体、催乳素释放肽、前列腺素受体、蛋白酶激活受体、P2Y(嘌呤能)受体、松弛素受体、分泌素受体、血清素受体、生长抑素受体、速激肽受体、加压素受体、催产素受体、血管活性肠肽(VIP)受体或垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)受体、1型味觉受体、代谢型谷氨酸受体、钙敏感受体、脑特异性血管生成抑制因子受体(1、2或3)、钙粘蛋白受体或雌激素受体。20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述细胞因子受体是以下细胞因子之一的受体：(IL)-1α、IL-1β、IL-1RA、IL18、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL17、IL-18、IL-19、IL-20、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白血病抑制因子、抑癌蛋白M、干扰素(IFN)-α、IFN-β、IFN-γ、CD154、淋巴毒素β(LTB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF-β、转化生长因子(TGF)-β、促红细胞生成素、巨核细胞生长发育因子(MGDF)、Fms相关酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)、干细胞因子、集落刺激因子-1(CSF-1)、巨噬细胞刺激因子、4-1BB配体、增殖诱导配体(APRIL)、分化群70(CD70)、分化群153(CD153)、分化群178(CD178)、糖皮质激素诱导的TNF受体配体(GITRL)、CD258、OX40L、CD252、TALL-1、TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)、肿瘤坏死因子凋亡微弱诱导剂(TWEAK)或TNF相关激活诱导细胞因子(TRANCE)。21.根据权利要求15所述的方法，其中所述酪氨酸激酶受体(RTK)是ErbB-1、ErbB-2、ErbB-3、ErbB-4、胰岛素受体、血小板衍生生长因子α受体、血小板衍生的生长因子β受体、肥大/干细胞生长因子受体(SCFR)、集落刺激因子1受体、CD135、成纤维细胞生长因子受体-1(CD331)、成纤维细胞生长因子受体-2(CD332)、成纤维细胞生长因子受体-3(CD333)、成纤维细胞生长因子受体-4(CD334)、成纤维细胞生长因子受体-6、血管内皮生长因子(VEGF)1受体、VEGF2受体、VEGF3受体、肝细胞生长因子受体、原肌球蛋白受体激酶(Trk)A、TrkB、TrkC、肝配蛋白(EPH)受体A1、EPH受体A2、EPH受体A3、EPH受体A4、EPH受体A5、EPH受体A6、EPH受体A7、EPH受体A8、EPH受体A9、EPH受体A10、EPH受体B1、EPH受体B2、EPH受体B3、EPH受体B4、EPH受体B5、EPH受体B6、AXL、RTKIX类受体家族成员、间变性淋巴瘤激酶/白细胞酪氨酸激酶(ALK/LTK)受体家族成员、RTKXI类受体家族成员、神经营养性酪氨酸激酶受体相关1受体、盘状结构域受体、RTKXIV类受体家族的成员、RTKXV类受体家族的成员、RTKXVI类受体家族的成员或肌肉特异性激酶受体。22.根据权利要求16所述的方法，其中所述离子通道是GABAA受体、甘氨酸受体(GlyR)、血清素(5-羟色胺)受体、烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)、锌激活的离子通道、离子型谷氨酸受体、AMPA受体、钾盐镁矾受体、NMDA受体或ATP门控通道。23.根据权利要求17所述的方法，其中所述具有内在酶活性的受体是受体酪氨酸激酶(RTK)、受体丝氨酸-苏氨酸激酶、受体酪氨酸磷酸酶或受体鸟苷酸环化酶。24.根据权利要求18所述的方法，其中所述细胞因子受体是I型细胞因子受体、II型细胞因子受体、白细胞介素-1受体、肿瘤坏死因子受体、趋化因子受体、转化生长因子β受体。25.根据权利要求19所述的方法，其中所述GPCR是趋化因子受体。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述趋化因子受体是白细胞介素-8受体、1型C-C趋化因子受体、C-X-C趋化因子受体、CXC3趋化因子受体或XC趋化因子受体。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述趋化因子受体是白细胞介素-8受体、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CCR11、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CXCR7、XCR1(GPR5)或CX3CR1(重组人膜结合型趋化因子)。28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述读出颗粒群中的一种或多种包括同质或异质的读出颗粒群。29.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述读出颗粒群中的一种或多种包括同质的读出颗粒群。30.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述读出颗粒群中的一种或多种包含多种读出珠、多种读出细胞或其组合。31.根据权利要求28-30中任一项所述的方法，其中用抗原或表位将所述读出颗粒群中的一种或多种功能化。32.根据权利要求28-30中任一项所述的方法，其中用抗体结合部分将所述读出颗粒群中的一种或多种功能化。33.根据权利要求32的方法，其中所述抗体结合部分是蛋白A、蛋白A/G、蛋白G、结合免疫球蛋白的单克隆抗体、结合免疫球蛋白的单克隆抗体片段、结合免疫球蛋白的多克隆抗体、结合免疫球蛋白的多克隆抗体片段、或者它们的组合。34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中在所述读出颗粒群之前将所述多个细胞群装载到所述多个室中。35.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中在所述多个细胞群之前将所述读出颗粒群装载到所述室中。36.根据权利要求34或35所述的方法，其中经通过液柱产生的静水压力、通过分配仪器、或者通过上下移动顶部组件或底部组件以引起流体转移到微室中而将所述多个细胞群装载到所述开放室中。37.根据权利要求36所述的方法，其中经分配仪器将所述多个细胞群装载到所述开放室中。38.根据权利要求37所述的方法，其中所述分配仪器是移液管。39.根据权利要求1-11和14-38中任一项所述的方法，其中经通过液柱产生的静水压力、通过分配仪器、或者通过上下移动顶部组件或底部组件以引起流体转移到微室而将所述多种读出颗粒群或其子集装载到所述开放室中。40.根据权利要求39所述的方法，其中经分配仪器将所述多种读出颗粒群或其子集装载到所述开放室中。41.根据权利要求40所述的方法，其中所述分配仪器是移液管。42.根据权利要求1-41中任一项所述的方法，其中所述读出颗粒群或其亚群固定在所述多个室中的一个或多个的表面上。43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法，其还包括将一个或多个细胞群和一种或多种读出颗粒群与一种或多种辅助颗粒一起孵育。44.根据权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述细胞外效应是所述一种或多种效应细胞或其子集分泌的分子与所述读出颗粒群或其亚群之间的结合相互作用。45.根据权利要求43所述的方法，其中所述细胞外效应是所述一种或多种效应细胞或其子集分泌的分子与所述多种辅助颗粒中的一种或多种辅助颗粒之间的结合相互作用。46.根据权利要求43-45中任一项所述的方法，其中在孵育步骤期间所述一种或多种效应细胞分泌的分子与辅助颗粒结合。47.根据权利要求44或45所述的方法，其中所述结合相互作用是抗原-抗体结合特异性相互作用、抗原-抗体结合亲和力相互作用或抗原-抗体结合动力学相互作用，其中所述抗体是所述一种或多种效应细胞中的效应细胞分泌的分子。48.根据权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述细胞外效应是细胞凋亡的调节、细胞增殖的调节、读出颗粒的形态外观的变化、读出颗粒内蛋白定位的变化、读出颗粒的蛋白表达、辅助颗粒生物活性的中和、由所述效应细胞诱导的读出细胞的细胞裂解、由所述效应细胞诱导的读出细胞的细胞凋亡、读出细胞坏死、抗体内化、辅助颗粒的内化、效应细胞的酶中和、可溶性信号转导分子的中和、或者它们的组合。49.根据权利要求1-48中任一项所述的方法，其还包括将所述多个室的一个或多个中的一个或多个细胞群基本维持在单一平面内。50.根据权利要求49所述的方法，其还包括将所述读出颗粒群中的一种或多种维持在与所述一个或多个细胞群基本相同的平面内。51.根据权利要求1-50中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤还包括更换包含一个或多个细胞群的所述多个室的一个或多个中的介质。52.根据权利要求43所述的方法，其中所述一种或多种辅助颗粒包括蛋白、肽、生长因子、细胞因子、神经递质、脂质、磷脂、氨基酸、一元胺、糖蛋白、碳水化合物、激素、病毒颗粒、抗体、抗体片段、荧光底物、荧光团、或者它们的组合。53.根据权利要求1-52中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤为30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时、96小时、1周，至少约30分钟，至少约1小时，至少约2小时，至少约4小时，至少约6小时，至少约12小时，至少约24小时，至少约36小时，至少约48小时，至少约60小时，至少约72小时，至少约84小时，至少约96小时，或者至少约1周。54.根据权利要求1-53中任一项所述的方法，其中所述一种或多种效应细胞或其子集在所述孵育步骤期间分裂。55.根据权利要求28-30中任一项所述的方法，其中所述多种读出细胞或其子集在所述孵育步骤期间分裂。56.根据权利要求43所述的方法，其中所述一种或多种辅助颗粒包括一种或多种辅助细胞。57.根据权利要求56所述的方法，其中所述一种或多种辅助细胞或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：卡尔·拉尔斯·真吉斯·汉森，凯思琳·利辛戈，韦罗妮克·勒科特，
申请(专利权)人：不列颠哥伦比亚大学，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA