多代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性鉴定方法及试剂技术

本发明专利技术涉及多代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性鉴定方法及试剂。本发明专利技术提供了对团头鲂选育系F9群体及其连续三代人工雌核发育团头鲂群体(G1，G2，G3)进行的基因组分析的方法和工具，以及提供了区分不同团头鲂育种群体的稳定的分子遗传标记。

Identification methods and reagents for genetic diversity of multigenerational meiotic gynogenetic blunt bream

The present invention relates to a genetic diversity identification method and reagent for multigenerational meiotic gynogenetic blunt bream. The present invention provides a method and tool for genome analysis of the Breeding Line F9 population and its three successive generations of artificial gynogenetic Breeding population (G1, G2, G3), and provides a stable molecular genetic marker for distinguishing different Breeding Populations of Breeding Breeding Breeding Breeding Breeding Breeding Breeding Breeds of Breeding Breeding Breeding Breeding Breeds of Breeding Bree

【技术实现步骤摘要】
多代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性鉴定方法及试剂
本专利技术属于鱼类养殖领域，更具体地，本专利技术涉及多代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性鉴定方法及试剂。
技术介绍
人工雌核发育是一种有效的产生纯系的手段，而且在鱼类染色体操作、遗传分析以及性别控制等方面具有潜在的应用价值。迄今为止，各国学者已先后在鲤科、鲑科、鲽科、鳅科和鲷科等近百种重要经济鱼类开展雌核发育研究并获得成功，在一些重要水生模式动物如青鳉和斑马鱼等也有成功先例。团头鲂“浦江1号”是养殖性能优良的草食性鱼类首例选育良种，为使该良种的优良性状基因进一步纯化、巩固和发展，自1999年以来，上海海洋大学水产种质资源研究室先后对团头鲂“浦江1号”选育系F5和F6进行了人工雌核发育(抑制第二次成熟分裂)的研究，成功地生产了一定数量的雌核发育鱼(G1)；随后，他们又通过抑制一次雌核发育鱼(G1)卵子的第二次成熟分裂成功地诱导出两次雌核发育鱼(G2)，在G2的基础上，用同样的方法诱导得到连续3次减数分裂雌核发育鱼(G3)。近几年的养殖实践证明，这些雌核发育团头鲂(G1、G2、G3)及其后代具有很好的生长优势，其生长速度超过了团头鲂选育系。但是，在实际的育种过程中，不同雌核发育世代团头鲂群体的遗传纯合度的具体指标如何，是否能达到遗传育种和遗传分析所需要的纯合度？此外，在雌核发育过程中可能由于经过辐射处理的异源精子的某些未失活遗传物质的影响、物理隔离的不完善等因素而影响雌核发育鱼群体的遗传纯合性。因此，在将培育的雌核发育群体应用于育种实践前，需要用各种技术在分子水平上对其基因组进行精确的遗传学分析，以确定雌核发育类型鱼类群体的遗传纯合度是否能达到遗传育种的要求。另外，由于雌核发育团头鲂在形态上和普通团头鲂完全一致，从外形上无法鉴别普通团头鲂与雌核发育团头鲂(G1、G2、G3)，这导致这几种鱼(团头鲂“浦江1号”、G1、G2、G3)在养殖生产和选育过程中极易混杂，为下一步的纯系选育工作埋下了隐患。鉴于此，找到合适的评估不同雌核发育团头鲂群体的遗传多样性和遗传纯合度的工具，开发出能够有效区分不同团头鲂群体(团头鲂“浦江1号”、G1、G2、G3)的特异性分子标记已成为迫切需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了多代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性鉴定方法及试剂。在本专利技术的第一方面，提供一种特异性鉴定团头鲂(Megalobramaamblycephala)连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的方法，所述方法包括：以特异性的引物作为分子标记，对待测鱼样品进行PCR扩增，根据扩增产物的DNA片段大小确定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼；其中，所述的特异性引物选自：SEQIDNO:3(S3)、SEQIDNO:19(S40)、SEQIDNO:24(S58)、SEQIDNO:32(71)、SEQIDNO:36(S75)。在本专利技术的另一方面，提供分子标记的应用，用于特异性鉴定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼，或用于制备特异性鉴定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的试剂盒；其中，所述的分子标记包括选自下组的引物或其组合：SEQIDNO:3、SEQIDNO:19、SEQIDNO:24、SEQIDNO:32、SEQIDNO:36。在另一优选例中，所述的方法或应用中，若以SEQIDNO:3为引物且扩增产物中存在136bp片段，则该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育鱼。在另一优选例中，所述的方法或应用中，若以SEQIDNO:3为引物且扩增产物中不存在797bp片段，则该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育鱼。在另一优选例中，所述的方法或应用中，若以SEQIDNO:19为引物且扩增产物中存在780bp片段，则预期该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育鱼；较佳地，可进一步通过SEQIDNO:3为引物的扩增来进一步确定。在另一优选例中，所述的方法或应用中，若以SEQIDNO:24为引物且扩增产物中不存在439bp片段，则预期该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育鱼；较佳地，可进一步通过SEQIDNO:3为引物的扩增来进一步确定。在另一优选例中，所述的方法或应用中，若以SEQIDNO:36为引物且扩增产物中不存在313bp片段，则预期该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育；较佳地，可进一步通过SEQIDNO:3为引物的扩增来进一步确定)。在另一优选例中，所述的方法或应用中，若以SEQIDNO:32为引物且扩增产物中不存在504bp片段，则预期该待测鱼为团头鲂连续2次减数分裂雌核发育鱼。在另一优选例中，所述的待测鱼为团头鲂“浦江1号”选育系F9，其连续1次减数分裂雌核发育鱼G1，连续2次减数分裂雌核发育鱼G2，连续3次减数分裂雌核发育鱼G3。在另一优选例中，所述的待测鱼样品为来自活鱼的组织样品，或为鱼类加工产物，如食品、保健品。在本专利技术的另一方面，提供用于特异性鉴定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的分子标记，包括选自下组的引物或其组合：SEQIDNO:3、SEQIDNO:19、SEQIDNO:24、SEQIDNO:32、SEQIDNO:36。在本专利技术的另一方面，提供一种用于特异性鉴定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的试剂盒，该试剂盒中包括：容器，以及分装于容器中的所述的分子标记。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂，PCR缓冲液，DNA聚合酶，和/或说明特异性鉴定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的方法的使用说明书。在本专利技术的另一方面，提供一种对团头鲂及其减数分裂雌核发育鱼进行遗传分析(包括群体内或群体间的遗传分析)的方法，所述方法包括：以特异性的引物组分别对待测鱼样品进行PCR扩增，获取扩增产物，对扩增产物进行群体内或群体间遗传变异分析，从而确定团头鲂及其减数分裂雌核发育鱼的遗传变异情况；其中，所述的特异性引物组包括SEQIDNO:1～SEQIDNO:39的引物。在另一优选例中，所述的遗传变异分析包括选自下组的参数：多态位点数、多态位点比例、Shannon信息指数、遗传相似系数、遗传距离、遗传分化指数。在另一优选例中，所述的遗传变异情况包括：遗传多样性水平，平均遗传相似情况，遗传纯度，遗传分化水平。在本专利技术的另一方面，提供用于对团头鲂及其减数分裂雌核发育鱼进行遗传分析的特异性引物组，包括SEQIDNO:1～SEQIDNO:39的引物。在本专利技术的另一方面，提供用于对团头鲂及其减数分裂雌核发育鱼进行遗传分析的特异性引物组的试剂盒，包括：容器，以及分装于容器中的所述的引物组。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂，PCR缓冲液，DNA聚合酶，和/或说明对团头鲂及其减数分裂雌核发育鱼进行遗传分析的方法的使用说明书。在本专利技术的另一方面，提供所述的引物组或所述的试剂盒的用途，用于对团头鲂及其减数分裂雌核发育鱼进行遗传分析。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、引物S3在4个群体中的扩增图谱(箭头示特异DNA片段)。其中，M：MarkerⅢ(200bp，500bp，800bp，1200bp，2000bp，3000bp，4500bp)。图2、引物S40在4个群体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性鉴定团头鲂(Megalobrama amblycephala)连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的方法，其特征在于，所述方法包括：以特异性的引物作为分子标记，对待测鱼样品进行PCR扩增，根据扩增产物的DNA片段大小确定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼；其中，所述的特异性引物选自：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:36。

【技术特征摘要】
1.一种特异性鉴定团头鲂(Megalobramaamblycephala)连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的方法，其特征在于，所述方法包括：以特异性的引物作为分子标记，对待测鱼样品进行PCR扩增，根据扩增产物的DNA片段大小确定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼；其中，所述的特异性引物选自：SEQIDNO:3、SEQIDNO:19、SEQIDNO:24、SEQIDNO:32、SEQIDNO:36。2.分子标记的应用，用于特异性鉴定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼，或用于制备特异性鉴定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的试剂盒；其中，所述的分子标记包括选自下组的引物或其组合：SEQIDNO:3、SEQIDNO:19、SEQIDNO:24、SEQIDNO:32、SEQIDNO:36。3.如权利要求1所述的方法或权利要求2所述的应用，其特征在于，若以SEQIDNO:3为引物且扩增产物中存在136bp片段，则该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育鱼；若以SEQIDNO:3为引物且扩增产物中不存在797bp片段，则该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育鱼；若以SEQIDNO:19为引物且扩增产物中存在780bp片段，则预期该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育鱼；若以SEQIDNO:24为引物且扩增产物中不存在439bp片段，则预期该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育鱼；若以SEQIDNO:36为引物且扩增产物中不存在313bp片段，则预期该待测鱼为团头鲂连续3次减数分裂雌核发育鱼；和/或若以SEQIDNO:32为引物且扩增产物中不...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐首杰，毕详，张飞明，张友良，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31