The present invention discloses a screening method for high temperature resistant cellulose-degrading bacillus. The natural fermented pig manure sawdust pile is used as the bacterial source sample, and high temperature enrichment medium is added. After enrichment, Congo red selective plate is used for high temperature screening, and the strains with larger degradation diameter/colony diameter are selected for high temperature culture again. The filter paper is used as the cellulose degradation indicator, and when the indicator in the medium disintegrates* High-efficient cellulose-degrading bacteria can be obtained and purified finally. Through the above methods, Bacillus thermophilic cellulose-degrading bacteria with stable performance can be effectively screened. The invention also discloses an application method of cellulose-degrading Bacillus resistant to high temperature, which can be directly applied to pig manure fermentation bed after making the bacterium agent, and is convenient for industrialization and implementation, and has broad application prospects.*
【技术实现步骤摘要】
一种耐高温纤维素降解芽孢杆菌筛选方法及应用方法
本专利技术涉及农业生物
，尤其是涉及一种耐高温纤维素降解芽孢杆菌筛选方法及应用方法。
技术介绍
发酵床养猪技术是根据微生态原理和生物发酵理论，利用微生物对畜禽粪尿“原位降解”，达到生态环境“零污染”的新型养殖模式。该技术最先在日本出现并获得推广口，近年来在我国得到快速的推广和应用。发酵床养殖技术的关键是养床，其中对垫料的科学养护与管理显得尤其重要，管理良好的垫料有助于畜禽粪便的消化与分解，还能延长垫料的使用期来提高养殖效益。但是现在用于养猪发酵床中的菌剂施用于猪粪垫料上时，会受到土著菌的拮抗，不利于垫料的腐熟，另外，现有菌剂对高温耐受能力有限，若发酵大于60℃则会影响堆肥效果。现在很少有研究从猪粪发酵床生境的原生生物中筛选出高温纤维素降解菌株。以猪粪垫料为菌源筛选的该类菌因为来源于猪粪垫料的土著菌，在制成菌剂后施用于猪粪垫料上时，不会受到土著菌的拮抗，因而更有利于垫料的腐熟。综上，筛选猪粪土著的高效纤维素降解菌，尤其是芽抱杆菌对于纤维素资源化利用尤其重要。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的是为了提供一种耐高温...
【技术保护点】
1.一种耐高温纤维素降解芽孢杆菌筛选方法，其特征在于，具体步骤为：(1)将20wt％猪粪、40wt％木屑、60wt％谷壳混合后，在60℃温度、60％湿度、pH7.5的条件下发酵二个月，得发酵猪粪锯末；(2)以所得的发酵猪粪锯末为菌源样品，取10g发酵锯末置于100mL以CMC‑Na为唯一碳源的富集培养基中，50℃、150rpm恒温培养，得富集液；(3)取100μl富集液涂布于CMC‑刚果红培养基平板上，之后于50℃培养箱中倒置恒温培养，5天后观察，平板上出现透明水解圈，选取降解直径大的菌株直接接种于放有滤纸条的富集培养基内，待培养基内滤纸条崩解，即为降解能力较强的菌株；(4...
【技术特征摘要】
1.一种耐高温纤维素降解芽孢杆菌筛选方法，其特征在于，具体步骤为：(1)将20wt％猪粪、40wt％木屑、60wt％谷壳混合后，在60℃温度、60％湿度、pH7.5的条件下发酵二个月，得发酵猪粪锯末；(2)以所得的发酵猪粪锯末为菌源样品，取10g发酵锯末置于100mL以CMC-Na为唯一碳源的富集培养基中，50℃、150rpm恒温培养，得富集液；(3)取100μl富集液涂布于CMC-刚果红培养基平板上，之后于50℃培养箱中倒置恒温培养，5天后观察，平板上出现透明水解圈，选取降解直径大的菌株直接接种于放有滤纸条的富集培养基内，待培养基内滤纸条崩解，即为降解能力较强的菌株；(4)挑取少量菌株在LB固体培养基上划线直至获得单菌落，再将获得的单菌落在以CMC-Na为唯一碳源的富集培养基上连续培养6代，待菌落形态稳定后，即得纯培菌株，得到的菌株命名为枯草芽孢杆菌SM-5-1(BacillusSubtilisSM-5-1)，已于2018年7月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2018415。2.根据权利要求1所述的一种耐高温纤维素降解芽孢杆菌筛选方法，其特征在于，以富集培养基总质量为基准，富集培养基由98％Mandel营养液和2％的羧甲基纤维素组成，Mandel营养液中营养盐的组成为：2g/LNaNO3，1.5g/LK2HPO4，1.5g/LCaCl2，0.3g/LMgSO4，0.005g/LFeSO4.7H2O，0.0016g/LMnSO4....
【专利技术属性】
技术研发人员：汤江武，沈琦，孙宏，吴逸飞，李园成，姚晓红，王新，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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