The invention provides a method for preparing polyacrylamide modified gel and its application, belonging to the field of molecular biology. The denatured gel was polymerized by 40% methylene bis acrylamide and deionized formamide under the action of catalyst ammonium persulfate, accelerator four methyl ethylenediamine and denaturant urea. The samples used for denaturing gel electrophoresis were about 200 bp PCR amplification fragment, gel concentration 8%, gel degeneration range 32%, 56%, ammonium persulfate and TETRAMETHYLENEDIAMINE were 90 90 110 L, 18 18 25 L, electrophoresis conditions were 60 degrees, 60 V, 16h. The invention can improve the quality and stability of the gel, and ensure the reliability of the experimental accuracy, and has a very good separation effect on the PCR product of about 200 bp.
【技术实现步骤摘要】
一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用
本专利技术提供了一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用，属分子生物学领域。
技术介绍
聚丙烯酰胺变性凝胶主要用于变性凝胶电泳（DGGE），该项技术是根据引物扩增的PCR产物长度来确定聚丙烯酰胺凝胶的浓度，凝胶变性范围是从上到下由低变高呈线性梯度，在一定温度和电压下，PCR扩增出的DNA片段由点样孔向下运动，移动过程中遇到不同浓度变性剂，PCR产物长度一样但是碱基排列顺序不同且A、T之间由两个氢键连接，而C、G由三个氢键连接。若某DNA片段一点位为A、T，另一个DNA片段相同点位为C、G，当达到A、T断键所需条件时，A、T处断开但C、G依然稳定，这种现象被称为不同解链行为。解链程度不一样会致使电泳速率发生变化，当解链程度越大，迁移速率越低，若双链完全被打开时停留在凝胶的某一浓度处。正是不同序列PCR产物在聚丙烯酰氨凝胶中解链行为是不完全一样，在电泳移动过程中会停留在不同的位置，而被互相分开。目前DGGE实验中变性凝胶是由尿素、40%甲叉双丙烯酰胺、去离子甲酰胺、过硫酸铵、四甲基乙二胺配制的凝胶溶液在凝胶系统中浇制而成。凝胶制作...
【技术保护点】
1.一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用，其特征步骤为：（1）利用通用引物SP2（其正向链F357‑GC‑clamp为5'‑CGC CCG CCG CGC CCC GCG CCC GGC CCG CCG CCCCCG CCC CCC TAC GGG AGG CAG CAG‑3'和反向链R518为5'‑ATT ACC GCG GCT GCT GG‑3'）扩增细菌16S rDNA V3区；（2）由4.8 mL 100%凝胶母液和10.2 mL 0%凝胶母液配制32%变性胶溶液，由8.4 mL 100%凝胶母液和6.6 mL 0%凝胶母液配制56%变性胶溶液；（3）向变性胶溶液...
【技术特征摘要】
1.一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用，其特征步骤为：（1）利用通用引物SP2（其正向链F357-GC-clamp为5'-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCCCCTACGGGAGGCAGCAG-3'和反向链R518为5'-ATTACCGCGGCTGCTGG-3'）扩增细菌16SrDNAV3区；（2）由4.8mL100%凝胶母液和10.2mL0%凝胶母液配制32%变性胶溶液，由8.4mL100%凝胶母液和6.6mL0%凝胶...
【专利技术属性】
技术研发人员：汤瑶，王红，吴文韬，黄磊，黄笑帝，
申请(专利权)人：奥为天津环保科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12
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