GM-CSF和IL-4轭合物、组合物以及与其相关的方法技术

本申请涉及GM‑CSF和IL‑4轭合物、组合物以及与其相关的方法。在某些实施例中，本披露涉及包括GM‑CSF和IL‑4的轭合物以及与其相关的用途，例如增强免疫系统。典型地，GM‑CSF和IL‑4通过一种连接物连接。例如，本申请提供了一种轭合物，所述轭合物包含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM‑CSF)多肽和白介素4(IL‑4)多肽，其中所述GM‑CSF多肽和所述IL‑4多肽通过由选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、丙氨酸和脯氨酸的氨基酸组成的肽接头连接。在某些实施例中，本披露涉及编码这些多肽轭合物的分离的核酸、包括编码多肽轭合物的核酸的载体以及包括这些载体的蛋白质表达系统，如包括这样的核酸的感染性病毒颗粒和宿主细胞。

GM-CSF and IL-4 conjugates, compositions and related methods

This application relates to GM CSF and IL 4 conjugates, compositions and related methods. In some embodiments, this disclosure relates to conjugates including GM CSF and IL 4 and related uses, such as enhancing the immune system. Typically, GM CSF and IL 4 are connected by a connector. For example, the present application provides a conjugate comprising a granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM CSF) polypeptide and an interleukin 4 (IL 4) polypeptide, wherein the GM CSF polypeptide and the IL 4 polypeptide are linked by a peptide junction composed of amino acids selected from glycine, serine, threonine, aspartic amide, alanine and proline. In some embodiments, the present disclosure relates to separated nucleic acids encoding these polypeptide conjugates, carriers encoding nucleic acids encoding polypeptide conjugates, and protein expression systems including these carriers, such as infectious virus particles and host cells including such nucleic acids.

【技术实现步骤摘要】
GM-CSF和IL-4轭合物、组合物以及与其相关的方法本申请是申请日为2013年10月23日，申请号为201380066094.6，专利技术名称为“GM-CSF和IL-4轭合物、组合物以及与其相关的方法”的申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求于2012年10月23日提交的美国临时申请号61/717,129的优先权，将其通过引用以其全文结合在此。背景癌症被认为是由于免疫系统未恰当地除去不受控制的增殖癌细胞的结果而发生。刺激免疫系统识别并消除癌性细胞已经成为用于治疗性治疗的有希望的策略。(阿地白介素)包含被认为促进免疫系统对抗癌细胞的重组人白介素2(IL-2)并且被指定用于治疗成人的转移性肾细胞癌(转移性RCC)。在推荐的剂量下，严重的不良事件通常伴随这一疗法。因此，需要鉴定改进的方法。细胞因子粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)通过增强经由树突细胞(DC)进行的抗原呈递和共刺激来增强适应性免疫系统。归因于其免疫刺激作用，GM-CSF已经用于增加抗癌的宿主免疫系统并且对于化疗后患者而言，用于提升白细胞计数。ProvengeTM是一种FDA批准的自体细胞癌症免疫疗法治疗剂。经由白细胞去除术收获受试者的周围血液白细胞。将这些富集的单核细胞用前列腺酸性磷酸酶(PAP)孵育，该磷酸酶被轭合至粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(PAP-GM-CSF)。GM-CSF被认为将靶抗原引导至DC前体上的受体，这些DC前体然后将其细胞表面上的PAP在足以活化T细胞的背景下呈递给表达PAP的细胞。向受试者给予活化的PAP呈递DC，以引发阻碍癌症生长的免疫应答。这一策略需要从受试者分离并扩增细胞，并且典型地，治疗不能完全清除受试者的癌症或肿瘤。因此，需要鉴定改进的方法。白介素4(IL-4)是一种γ-链细胞因子。它通过B淋巴细胞而作为活化并引发抗体类别转换的信号并且将天然辅助性T淋巴细胞转化为活化的T淋巴细胞并且然后扩增其群体。美国专利6,838,081报道了通过给予IL-4和GM-CSF的组合而增强从前体细胞形成抗原呈递细胞。还参见美国专利申请2004/0072299和Hikino(引野)等人，ANTICANCERRESEARCH(抗癌研究)24:1609-1616(2004)。GIFT融合因子(fusokine)是来源于GM-CSF和常见γ-链白介素融合转基因的融合蛋白并且可以抑制或增强宿主免疫应答。Stagg(斯塔格)等人，MolecularTherapy(分子疗法)，2004，9，S133-S133披露了一种GM-CSF/IL-2融合物(GIFT2)。还参见Penafuete(佩纳弗艾特)等人，CancerRes.(癌症研究)2009，69(23):9020-8；Rafei(拉菲)等人，NatMed.(自然医学)2009，15(9):1038-45；Williams(威廉姆斯)和Park(帕克)，Cancer(癌症)，1991，67(增刊10):2705-7；WO2005/0053579；WO2005/026820；WO2008/0014612；以及美国专利号7,323,549；7,217,421；6,617,135；以及5,108,910。概述在某些实施例中，本披露涉及包括GM-CSF的多肽和IL-4多肽的轭合物。典型地，该GM-CSF和IL-4经由连接物(例如，多肽)而连接。在某些实施例中，本披露涉及编码这些多肽轭合物的分离的核酸、包括编码多肽轭合物的核酸的载体以及包括这些载体的蛋白表达系统，例如包括此类核酸的感染性病毒颗粒和宿主细胞。在某些实施例中，本披露涉及以下药物组合物，这些药物组合物包括在此披露的轭合物和载体以及一种药学上可接受的赋形剂。在某些实施例中，本披露涉及以下疫苗，这些疫苗包括在此披露的轭合物和载体以及一种抗原以及任选地一种佐剂。典型地，该抗原被包含在减毒活病毒、被杀死的病毒、病毒样颗粒、病毒体、癌性细胞、具有表面抗原的脂质双层结构中，并且该抗原典型地是病毒蛋白或糖蛋白、细菌或细菌性抗原或肿瘤相关抗原。在某些实施例中，该抗原轭合至树突细胞标志物。在某些实施例中，本披露考虑了一种将在此的轭合物与B细胞在使得活化的正常B细胞可以产生趋化因子CCL3或升高水平的INF-γ的条件下相混合的方法。在某些实施例中，这些B细胞是慢性淋巴样白血病B细胞。在某些实施例中，该混合是在体外或在体内。在某些实施例中，将体外活化的B细胞以有效治疗或预防癌症的量给予给受试者，例如这些B细胞最初获得自其中的受试者。在某些实施例中，本披露涉及治疗或预防病毒、细菌或寄生虫感染的方法，这些方法包括给予有效量的、任选地与一种抗原以及任选地一种佐剂组合的药物组合物，该药物组合物包括在此披露的轭合物或载体。在某些实施例中，该受试者处于病毒感染的风险之中或展现出病毒感染的症状或诊断患有病毒感染，该病毒感染是例如慢性病毒感染。在某些实施例中，本披露涉及治疗或预防病毒感染的方法，这些方法包括向对其有需要的受试者给予有效量的疫苗，该疫苗包括在此披露的轭合物。在某些实施例中，该受试者被诊断患有甲型流感病毒(包括亚型H1N1)，乙型流感病毒，丙型流感病毒，轮状病毒A，轮状病毒B，轮状病毒C，轮状病毒D，轮状病毒E，SARS冠状病毒，人类腺病毒类型(HAdV-1至55)，人乳头瘤病毒(HPV)类型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58及59，细小病毒B19，触染性软疣病毒，JC病毒(JCV)，BK病毒，默克尔(Merkel)细胞多瘤病毒，甲型柯萨奇病毒，诺如病毒，风疹病毒，淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)，黄热病毒，麻疹病毒，腮腺炎病毒，呼吸道合胞病毒，牛瘟病毒，加利福尼亚脑炎病毒，汉坦病毒，狂犬病病毒，埃博拉病毒，马尔堡病毒，单纯性疱疹病毒-1(HSV-1)，单纯性疱疹病毒-2(HSV-2)，水痘带状疱疹病毒(VZV)，EB病毒(Epstein-Barrvirus)(EBV)，巨细胞病毒(CMV)，疱疹淋巴细胞病毒，玫瑰疹病毒(roseolovirus)，或卡波氏肉瘤相关疱疹病毒，甲型肝炎病毒，乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒，丁型肝炎病毒，戊型肝炎病毒或人类免疫缺陷病毒(HIV)。在某些实施例中，本披露涉及给予与另一种抗病毒剂组合的、在此披露的轭合物或载体，该抗病毒剂是例如阿巴卡韦、阿昔洛韦、阿昔洛韦、阿德福韦、金刚胺、安普那韦、安普利近、阿比朵尔、阿扎那韦、立普妥(atripla)、波普瑞韦、西多福韦、双汰芝、达芦那韦、地拉韦啶、去羟肌苷、二十二醇、依度尿苷(edoxudine)、依非韦伦、恩曲他滨、恩夫韦地、恩替卡韦、泛昔洛韦、福米韦生、福沙那韦、膦甲酸钠、膦乙酸钠、更昔洛韦、伊巴他滨、伊姆诺韦(imunovir)、碘苷、咪喹莫特、茚地那韦、肌苷、III型干扰素、II型干扰素、I型干扰素、拉米夫定、洛匹那韦、洛韦胺、马拉韦罗、吗啉胍、美替沙腙、奈非那韦(nelfmavir)、奈韦拉平、奈沙韦(nexavir)、奥司他韦、聚乙二醇干扰素α-2a、喷昔洛韦、帕拉米韦、普利康那利(pleconaril)、鬼臼毒素、雷特格韦、利巴韦林、金刚乙胺、利托那韦、嘧啶、沙奎那韦、司他夫定、替诺福韦、替诺福韦酯、替拉那韦、三本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种轭合物，所述轭合物包含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM‑CSF)多肽和白介素4(IL‑4)多肽，其中所述GM‑CSF多肽和所述IL‑4多肽通过由选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、丙氨酸和脯氨酸的氨基酸组成的肽接头连接。

【技术特征摘要】
2012.10.23 US 61/717,1291.一种轭合物，所述轭合物包含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)多肽和白介素4(IL-4)多肽，其中所述GM-CSF多肽和所述IL-4多肽通过由选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、丙氨酸和脯氨酸的氨基酸组成的肽接头连接。2.如权利要求1所述的轭合物，其中所述GM-CSF多肽相对于所述IL-4多肽更接近所述轭合物的N-末端定位。3.如权利要求1所述的轭合物，其中所述GM-CSF多肽包含SEQIDNO:6的氨基酸序列且所述IL-4多肽包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的轭合物，其中所述GM-CSF多肽和所述IL-4多肽通过由选自甘氨酸和丝氨酸的氨基酸组成的肽接头连接。5.如权利要求1所述的轭合物，其中所述肽接头包含丝氨酸的重复或甘氨酸的重复。6.如权利要求1所述的轭合物，其中所述肽接头为1至5个氨基酸。7.如权利要求1所述的轭合物，其中所述肽接头为5至50个氨基酸。8.如权利要求1所述的轭合物，其中所述肽接头包含GGGGS(SEQIDNO:5)。9.如权利要求1所述的轭合物，其中所述轭合物与SEQIDNO:8至少70％一致。10.如权利要求1所述的轭合物，其中所述轭合物与SEQIDNO:8至少80％一致。11.如权利要求1所述的轭合物，其中所述轭合物与SEQIDNO:8至少90％一致。...

【专利技术属性】
技术研发人员：雅克·加利波，九生·邓，
申请(专利权)人：爱默蕾大学，亚特兰大儿童医疗保健公司，
类型：发明
国别省市：美国,US