一种高效的前列腺特异性膜抗原配体PSMA-617的固相制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高效的前列腺特异性膜抗原配体PSMA‑617的固相制备方法。本发明专利技术采用Fmoc保护的氨基酸固相多肽合成方法，以羟基树脂为起点，依次合成PSMA‑617序列。本发明专利技术方法，避免了现有技术使用的高危试剂三光气，避免了使用Pd(Ph3P)4，提高了合成安全性，终产物纯度>98.5％，具有成本低、废液少、效率高、纯化易、安全高的特点，有利于实现规模化、产业化生产。

An efficient solid-phase preparation of prostate-specific membrane antigen ligand PSMA-617

The present invention discloses an efficient solid phase preparation method of prostate specific membrane antigen ligand PSMA 617. The invention adopts Fmoc protected amino acid solid-phase polypeptide synthesis method, starting from hydroxyl resin, and sequentially synthesizes PSMA 617 sequence. The method of the invention avoids the high-risk reagent triphosgene used in the existing technology, avoids the use of Pd (Ph3P) 4, improves the synthesis safety, and the purity of the final product is more than 98.5%. The method has the characteristics of low cost, less waste liquid, high efficiency, easy purification and high safety, and is conducive to the realization of large-scale and industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种高效的前列腺特异性膜抗原配体PSMA-617的固相制备方法
本专利技术涉及多肽合成领域，具体地说，涉及一种高效的前列腺特异性膜抗原配体PSMA-617的固相制备方法。
技术介绍
前列腺特异性膜抗原(prostatespecificmembraneantigen，PSMA)是位于前列腺上皮细胞表面的II型跨膜糖蛋白，在绝大多数前列腺癌细胞中表达明显上调。已有研究表明，核素等物质标记的PSMA单克隆抗体和配体在前列腺癌的分子影像学诊断及靶向治疗方面显示出一定的临床应用前景。为了改进前列腺癌的诊断及治疗方法，近年来研究人员开发出一系列PSMA靶向性小分子物质，可以特异性作用于前列腺癌细胞，其中包括PSMA-617，即2-[3-(1-Carboxy-5-{3-naphthalen-2-yl-2-[(4-{[2-(4,7,10-tris-carboxymethyl-1,4,7,10-tetraaza-cyclododec-1-yl)-acetylamino]-methyl}-cyclohexanecarbonyl)-amino]-propionylamino}-pentyl)-ureido]-pentanedioicacid。PSMA-617的序列为：其中，DOTA为1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四羧酸，Amc为氨甲基环己烷羧酸，2Nal是2-萘基丙氨酸，Lys是赖氨酸，Glu是谷氨酸。分子式为：C49H71N9O16，分子量1042.1。PSMA-617的合成一般选用PS树脂，但是由于DOTA位阻很大，导致产率不高，而DOTA的价格昂贵，这就使得合成成本很高。在氨基酸侧链保护的选择上，一般使用Lys(Alloc)，如文献BioconjugateChem.2012,23:688，在脱除Alloc时采用Pd(Ph3P)4/吗啉/DCM，Pd(Ph3P)4的价格比较昂贵，会增加规模化生产的成本。同时现有PSMA-617的合成方法多采用三光气，即固体光气进行合成，如专利CN105636924A。众所周知，三光气是高毒性气体光气的不同形态，遇碱或加热能够产生三分子光气，是二级有机毒品。而光气吸入中毒会产生中毒性肺水肿，浓度高时，会引起死亡。所以操作时具有很大的危险性，要尽可能的做好防护措施，不适宜大规模，产业化生产。因此本领域技术人员仍然期待以高产品收率、高安全方式、低生产成本获得具有良好品质产品的方法，这对于大规模、产业化生产是非常必要和重要的。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有合成方法产品收率低、安全性差、生产成本高昂，不适宜大规模、产业化生产的缺点，提供一种PSMA-617的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：所述前列腺特异性膜抗原配体PSMA-617的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。一种制备PSMA-617的方法，首先在固相载体上偶联Fmoc-Lys(Mtt)-OH；脱去Fmoc，偶联谷氨酸二叔丁酯盐酸盐；然后脱去Mtt，按照SPPS逐个偶联剩下的氨基酸；裂解得到粗肽；最后纯化换盐得到产物。上述制备PSMA-617的方法，优选包括以下步骤：(1)固相载体上偶联接头氨基酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH；(2)脱去氨基保护基，与谷氨酸二叔丁酯盐酸盐偶联；(3)脱去Lys侧链保护基Mtt，顺次偶联2-萘基丙氨酸、氨甲基环己烷羧酸和1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四羧酸；(4)将合成好的肽固相载体裂解得到粗肽；(5)纯化换盐得到纯品。步骤(1)中，氨基酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH偶联在固相载体上；其中，所述的固相载体为羟基树脂，优选为PEGA树脂；所使用的偶联剂为DIC与DMAP按摩尔比20:1的组合，待偶联的Fmoc-Lys(Mtt)-OH与DIC的摩尔比是1:1。步骤(2)中，所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为20％的哌啶的DMF溶液，或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液；优选体积百分含量为20％哌啶的DMF溶液。所使用的偶联剂为CDI与DIEA按摩尔比1:1的组合，或者HBTU、HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合，或者PyBOP、HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合；优选CDI与DIEA按摩尔比1:1的组合；待偶联的谷氨酸二叔丁酯盐酸盐与DIEA的摩尔比是1:1。步骤(3)中，所使用的氨基脱保护试剂为TFA、Tis与H2O按摩尔比1:5:94的组合；步骤(3)中，具体的固相合成方法，为本领域技术人员的常规技术手段。所使用的偶联剂为HBTU、HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合，或者HBTU、HOAt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合，或者DIC与HOBt按摩尔比1:1的组合，或者EDC与HOBt按摩尔比1:1的组合，或者PyBOP、HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合。优选HBTU、HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合。待偶联的氨基酸与HOBt的摩尔比是1:1。偶联反应的溶剂为DMF、DCM、NMP、THF、TFE和DMSO中的任意一种或几种的组合，优选DMF。步骤(4)中，肽树脂裂解的裂解液为TFA、Tis与H2O按体积比95:2.5:2.5的混合溶液，或者TFA、EDT、TIS、PhOH与H2O按体积比80:5:5:5:5的混合溶液，或者TFA、EDT、TIS与H2O按体积比92.5:2.5:2.5:2.5的混合溶液，优选TFA、Tis与H2O按体积比95:2.5:2.5的混合溶液。步骤(5)中，纯化为反相高效液相色谱纯化换盐；即色谱柱为C18柱；流动相为体积百分比0.25％醋酸的水溶液和乙腈。本专利技术中所使用的物料缩写的含义见表1。表1：本专利技术所使用的物料缩写含义有益效果：PSMA-617的合成一般选用PS树脂，但是由于DOTA位阻很大，导致产率不高，而DOTA的价格昂贵，这就使得合成成本很高。在氨基酸侧链保护的选择上，一般使用Lys(Alloc)，在脱除Alloc时采用Pd(Ph3P)4/吗啉/DCM，Pd(Ph3P)4的价格比较昂贵，会增加规模化生产的成本。我们使用PEGA树脂，提高产率，减少了DOTA的投料比，有效的降低了成本。同时，Lys侧链保护采用Mtt，只需要常规的弱酸性条件脱除，不使用Pd(Ph3P)4催化氢化，也极大的降低了成本。最重要的是避免了高毒性的试剂三光气的使用，极大的提高了制备过程的安全性。本专利技术的制备方法具有成本低、废液少、效率高、纯化易、安全高的特点，有利于实现规模化、产业化生产。附图说明图1为色谱图。图2为质谱图。具体实施方式根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。实施例：1.树脂制备1.1制备HMPA-PEGA树脂称取5gPEGA-AM树脂(100～200mesh，0.58mmol/g)加入多肽合成器，DCM溶胀树脂。然后将HMP-Linker(3eq)，HoBt(6eq)，DIC(4eq)，加入树脂反应3h，DMF洗涤，得到HMPA-PEGA树脂。1.2制备Fmoc-Lys(Mtt)-O-PEGA树脂将HMPA-PEGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效的前列腺特异性膜抗原配体PSMA‑617的固相制备方法，所述前列腺特异性膜抗原配体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，其特征在于，首先在固相载体上偶联Fmoc‑Lys(Mtt)‑OH；脱去Fmoc，偶联谷氨酸二叔丁酯盐酸盐；然后脱去Mtt，按照SPPS逐个偶联剩下的氨基酸；裂解得到粗肽；最后纯化换盐得到产物。

【技术特征摘要】
1.一种高效的前列腺特异性膜抗原配体PSMA-617的固相制备方法，所述前列腺特异性膜抗原配体的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，其特征在于，首先在固相载体上偶联Fmoc-Lys(Mtt)-OH；脱去Fmoc，偶联谷氨酸二叔丁酯盐酸盐；然后脱去Mtt，按照SPPS逐个偶联剩下的氨基酸；裂解得到粗肽；最后纯化换盐得到产物。2.根据权利要求1所述的制备PSMA-617的方法，其特征在于，它包括以下步骤：(1)固相载体上偶联接头氨基酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH；(2)脱去氨基保护基，与谷氨酸二叔丁酯盐酸盐偶联；(3)脱去Lys侧链保护基Mtt，顺次偶联2-萘基丙氨酸、氨甲基环己烷羧酸和1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四羧酸；(4)将合成好的肽固相载体裂解得到粗肽；(5)纯化换盐得到纯品。3.根据权利要求1或2所述的制备PSMA-617的方法，其特征在于，步骤(1)中，氨基酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH偶联在固相载体上；其中，所述的固相载体为羟基树脂；所使用的偶联剂为DIC与DMAP按摩尔比20:1的组合，待偶联的氨基酸与DIC的摩尔比是1:1。4.根据权利要求3所述的制备PSMA-617的方法，其特征在于，所述的固相载体为PEGA树脂。5.根据权利要求2所述的制备PSMA-617的方法，其特征在于，步骤(2)中，所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为20％的哌啶的DMF溶液，或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液。...

【专利技术属性】
技术研发人员：常民，彭雅丽，李墅，薛宏祥，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62