一种高丛蓝莓花药培养获得单倍体植株的方法技术

本发明专利技术公开了一种高丛蓝莓花药培养获得单倍体植株的方法，属于生物技术和农业科学领域。本发明专利技术的技术路线包括以下步骤：（1）新鲜花蕾的选取；（2）无菌花药的获得与接种；（3）花药辐射处理；（4）花药诱导培养；（5）愈伤组织分化培养；（6）健苗生根培养。本发明专利技术首次通过花药离体培养得到了高丛蓝莓单倍体植株，为进一步开展蓝莓的单倍体育种和相关理论研究提供了技术基础和实验材料。

A method for obtaining haploid plants from anther culture of Blueberry

The invention discloses a method for obtaining haploid plants by anther culture of high bush blueberry, which belongs to the field of biotechnology and agricultural science. The technical route of the invention includes the following steps: (1) selection of fresh flower buds; (2) acquisition and inoculation of sterile anthers; (3) radiation treatment of anthers; (4) anther induction culture; (5) callus differentiation culture; (6) rooting culture of healthy seedlings. For the first time, the haploid plant of high bush blueberry is obtained by anther culture in vitro, which provides technical basis and experimental materials for further research on haploid breeding and related theory of blueberry.

【技术实现步骤摘要】
一种高丛蓝莓花药培养获得单倍体植株的方法
本专利技术涉及一种高丛蓝莓花药培养获得单倍体植株的方法，属于生物技术和农业科学领域。
技术介绍
蓝莓（VacciniumSpp）又名笃斯，为杜鹃花科越桔属多年生灌木，因果实呈蓝色，故称为蓝莓。野生蓝莓原产于北美洲，广泛分布于北半球，在我国主要分布在长白山区、大小兴安岭以及西南山区，长江流域有少量分布。现在市场上的蓝莓均为人工培育的栽培品种，其中以美国产的蓝莓品质最优。蓝莓果味酸甜，果实上有一层白色果粉，果肉细腻，甜酸适口，风味独特，营养丰富，被誉为“浆果之王”。研究表明，蓝莓具有很高的营养价值和保健功能。蓝莓鲜果富含蛋白质、不饱和脂肪酸、纤维素、维生素、微量元素和有机酸，能为人体提供丰富的营养元素。蓝莓果中还含有多种生物活性物质，例如花色素苷、类黄酮化合物等，其中花色素苷具有活化和促进视红素的再合成、抗炎症、提高免疫力、抗心血管疾病、抗氧化防衰老、抗癌等多种生理保健功能，因此，联合国粮农组织将蓝莓列为人类五大健康食品之一。此外蓝莓果实可以直接加工成果酱、果冻、果糕和饼馅等，蓝莓提取物可以作为天然色素、保健食品、高级化妆品的原料，因此蓝莓也被誉本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高丛蓝莓花药培养获得单倍体植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）新鲜花蕾的选取在蓝莓盛花期于晴天上午9:00‑11:00取材，采集健壮植株上的花蕾，用湿纱布包裹放入密封容器中带回实验室，筛选出小孢子处于单核中晚期的花蕾；（2）无菌花药的获得与接种将上述花蕾先用洗洁精清洗干净，在自来水下冲洗10‑20min；然后置于超净工作台上，用75%乙醇浸泡30s，再用0.1%升汞溶液消毒10‑15min，边消毒边摇晃；倒去升汞溶液后，用无菌水冲洗4‑5次；用解剖针剥将花药完整剥离取出，切去花丝，接种在诱导培养基上，每瓶培养基接种30‑40个花药；所述诱导培养基的配方为：K2SO4 740~8...

【技术特征摘要】
1.一种高丛蓝莓花药培养获得单倍体植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）新鲜花蕾的选取在蓝莓盛花期于晴天上午9:00-11:00取材，采集健壮植株上的花蕾，用湿纱布包裹放入密封容器中带回实验室，筛选出小孢子处于单核中晚期的花蕾；（2）无菌花药的获得与接种将上述花蕾先用洗洁精清洗干净，在自来水下冲洗10-20min；然后置于超净工作台上，用75%乙醇浸泡30s，再用0.1%升汞溶液消毒10-15min，边消毒边摇晃；倒去升汞溶液后，用无菌水冲洗4-5次；用解剖针剥将花药完整剥离取出，切去花丝，接种在诱导培养基上，每瓶培养基接种30-40个花药；所述诱导培养基的配方为：K2SO4740~880mg/L，NH4NO3533~595mg/L，MgSO4·7H2O406~438mg/L，KH2PO4104~122mg/L，Ca(H2PO4)2·H2O487~503mg/L，MnSO4·4H2O21~22mg/L，ZnSO4·7H2O5.2~5.8mg/L，H3BO36.3~6.5mg/L，Na2MoO4·2H2O0.21~0.23mg/L，CoCl2·6H2O0.023~0.025mg/L，CuSO4·5H2O0.18~0.22mg/L，Fe-Na2EDTA32.8~34.4mg/L，肌醇107~115mg/L，烟酸1.2~1.6mg/L，甘氨酸1.7~2.5mg/L，脯氨酸4.4~5.0mg/L，牛肉浸膏24~30mg/L，盐酸硫胺素0.7~0.9mg/L，盐酸吡哆醇0.4~0.6mg/L，泛酸1.1~1.3mg/L，2-氨基嘌呤0.37~0.41mg/L，丁酰肼0.03~0.05mg/L，水溶性碳纳米管53~63mg/L，四甲基戊二酸0.6~1.0mg/L，番茄汁26~32mL/L，芸苔素内酯0.1~0.3mg/L，海藻提取液42~50mL/L，蔗糖11~15g/L，葡萄糖7~11g/L，黄原胶3~5g/L，pH值为5.0~5.4；（3）花药辐射处理将上述花药先置于28-30℃黑暗条件下培养3d，再用60Co-γ射线进行照射，得到辐射处理后的花药；（4）花药诱导培养将辐射处理后的花药置于温度24-26℃、光照强度600-800Lx、光照时间5-7h/d的培养条件下培养35-45d，花药可形成愈伤组织；（5）愈伤组织分化培养当愈伤组织大小长至2-3mm时，及时转移至分化培养基上，培养14-21d后愈伤组织开始转绿，之后每20d左右继代1次，继代2次后愈伤组织分化出不定芽；培养条件控制为温度24-26℃，光照强度1000-1500Lx，光照时间10-12h/d；（6）健苗生根培养待步骤（5）中的不定芽长成1-2cm高的芽苗时，将芽苗剪切成单苗，竖接于生根培养液中，使其基部与培养液接触，培养24-33d可形成根系发育旺盛的完整植株；培养条件控制为温度23-27℃、光照强度2000-2500...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱振东，
申请(专利权)人：江苏高航农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32