一种布鲁氏菌抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种布鲁氏菌抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括布鲁氏菌OMP16蛋白单克隆抗体、山羊抗小鼠IgG偶联的受体微珠、带有His标签的布鲁氏菌OMP16蛋白抗原和镍螯合的供体磁珠。采用基因工程技术制备了布鲁氏菌OMP16外膜蛋白，采用PEG1500细胞融合技术制备了布鲁氏菌OMP16蛋白单克隆抗体，将纯化后的重组OMP16蛋白作为抗原和制备的单克隆抗体间的相互作用，通过样品中抗体与单克隆抗体竞争性结合重组OMP16蛋白，建立竞争性布鲁氏菌抗体AlphaLISA的检测方法。该检测方法检测时间短，特异性好，灵敏度高，不需洗涤，操作简便，检测成本低。

A Brucella Antibody Competitive AlphaLISA Kit and Its Detection Method

The invention discloses a Brucella antibody competitive AlphaLISA detection kit and a detection method thereof. The kit comprises a monoclonal antibody against Brucella OMP16 protein, a goat anti-mouse IgG-coupled receptor microsphere, a Brucella OMP16 protein antigen with His label and a nickel-chelated donor magnetic bead. The outer membrane protein of Brucella OMP16 was prepared by genetic engineering technology, and the monoclonal antibody of Brucella OMP16 was prepared by PEG1500 cell fusion technology. The purified recombinant OMP16 protein was used as the interaction between the antigen and the prepared monoclonal antibody. The recombinant OMP16 protein was competitively bound with the monoclonal antibody in the sample to establish the competitive Brucella antibody Alph. Detection method of aLISA. The method has the advantages of short detection time, good specificity, high sensitivity, no washing, simple operation and low detection cost.

【技术实现步骤摘要】
一种布鲁氏菌抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及兽医学、免疫学及生物制品学领域，特别的涉及一种布鲁氏菌抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病，是由布鲁氏菌引起的一种目前世界上流行最广，危害最大的人兽共患病之一。它以流产、发热、关节损伤为特征，威胁着人和60余种哺乳动物的生命健康。《中华人民共和国动物防疫法》、《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》、《重庆市动物防疫条例》、《重庆市中长期动物疫病防治规划(2012-2020)》都规定了应对布病进行及时控制。因此，早期、快速、准确地诊断该病是防控和净化该病的关键。目前，现有的布病实验室诊断技术标准有：虎红平板凝集实验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、竞争酶联免疫吸附试验(CELISA)和荧光偏振试验(FPA)等。其中，RBT敏感性较高，常用于初筛方法，但其特异性较低；SAT特异性较高，常用于确诊方法，但其敏感性较低，且容易受人为因素影响，耗时较长；CFT特异性高于S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种布鲁氏菌抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于，包括布鲁氏菌OMP16蛋白单克隆抗体、山羊抗小鼠IgG偶联的受体微珠、带有His标签的布鲁氏菌OMP16蛋白抗原和镍螯合的供体磁珠；所述受体微珠具有发光功能，所述供体磁珠具有感光功能；所述布鲁氏菌OMP16蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种布鲁氏菌抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于，包括布鲁氏菌OMP16蛋白单克隆抗体、山羊抗小鼠IgG偶联的受体微珠、带有His标签的布鲁氏菌OMP16蛋白抗原和镍螯合的供体磁珠；所述受体微珠具有发光功能，所述供体磁珠具有感光功能；所述布鲁氏菌OMP16蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述布鲁氏菌抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于，所述编码所述布鲁氏菌OMP16蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.一种应用权利要求1～2任一项所述布鲁氏菌抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1)将山羊抗小鼠IgG偶联的受体微珠和镍螯合的供体磁珠分别用1×AlphaLISA稀释剂将浓度稀释至100μg/ml；2)在反应板上分别设置阴性对照组和待检测样品组，向所述待检测样品组中每个孔加入5μL带有His标签的布鲁氏菌OMP16蛋白抗原、5μL布鲁氏菌OMP16蛋白单克隆抗体和5μL待测样品；向所述阴性对照组中每个孔加入5μL带有His标签的布鲁氏菌OMP16蛋白抗原、5μL布鲁氏菌OMP16蛋白单克隆抗体和5μL去离子水；然后将所述反应板置于微量震荡器上震荡30～60s，混匀后置...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴胜昔，曾政，黄恒，李俊萱，黄诚，李志，徐缘，李令臣，鲁友铭，侯力嘉，曹芸，董春霞，
申请(专利权)人：重庆理工大学，重庆市动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：重庆,50