一种大麦小孢子的培养方法技术

一种大麦小孢子的培养方法，选取幼穗并预处理，取幼穗上的小花，消毒后无菌水冲洗，接种至提取液中，于1‑10℃处理1‑2d；将接种后的小花进行旋切，过滤，离心，收集小孢子；将收集到的小孢子用提取液于24‑26℃、黑暗中放置1‑3d，用麦芽糖纯化；纯化后的小孢子用诱导培养基洗涤、悬浮，调节小孢子密度，接种于培养皿中，封口，24‑26℃，暗培养15‑24d。通过对离体小花进行低温处理，提高大麦小孢子培养中的愈伤产量和成绿苗量，再生能力大大提高，解决供体材料数量少的问题，操作简单易行，节约成本。

A Method of Cultivating Barley Microspore

A method for cultivating barley microspore is to select young spikelets and pretreat them, wash them with sterile water after disinfection, inoculate them into extract solution, and treat them at 1 10 C for 1 2 days. The inoculated florets are rotated, filtered, centrifuged, and microspores are collected. The collected microspores are placed in the dark at 24 26 C for 1 3 days and purified with maltose. Microspore was washed and suspended in induction medium to regulate microspore density. The microspore was inoculated in a Petri dish and sealed at 24 26 C for 15 24 days. Through low temperature treatment of isolated florets, the callus yield and green seedling yield in barley microspore culture were increased, the regeneration ability was greatly improved, the problem of fewer donor materials was solved, the operation was simple and easy, and the cost was saved.

【技术实现步骤摘要】
一种大麦小孢子的培养方法
本专利技术属于农业生物
，具体涉及一种大麦小孢子的培养方法。
技术介绍
植物小孢子(Microspore)是单倍体性细胞，其由花粉母细胞经减数分裂后形成的四分体产生，在离体胁迫条件下，可以由原有的配子体发育途径转向孢子体发育途径，经胚胎发育，形成完整植株。由于单倍体植株经染色体加倍后，成为双单倍体植株(DHs)，等位基因不会在以后的世代中由于分离而丢失，可以避免杂种后代的严重分离，从而加速性状重组过程，缩短育种年限，使各种性状得以表现出来，因而可以在配子体水平上进行优良基因的筛选，极大地提高选择效率。但是，只有在供试材料的小孢子培养值达到较高水平时，才能使这一技术与育种、转化等技术结合，可以快速获得纯合的、所有性状都稳定的二倍体植株。小孢子培养的成功与否，在很大程度上依赖于基因型、培养基、培养方式以及培养条件等，因而，许多研究者为了提高小孢子培养和再生植株的频率在这些方面做了大量研究，在烟草、油菜、玉米、辣椒等多种作物中都已建立起成熟的游离小孢子培养体系。现有技术中，以人工气候室种植的大麦为供体植株，建立了大麦小孢子再生体系，但是，由于人工气候室的面积本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大麦小孢子的培养方法，包括以下步骤：1)选取幼穗并预处理选取中部小孢子发育处于单核早期到中期的幼穗，保留上部两片叶子基部1.0‑1.5cm，除去叶片，用薄膜包裹保湿，于4‑6℃预处理14‑21d；2)处理小花取幼穗上的小花，消毒、冲洗，接种至提取液中，于1‑10℃静置1‑2d；所述提取液含有甘露醇55‑65g·L‑1，CaCl2 1‑1.2g·L‑1、N‑吗啡乙烷磺酸0.9‑1.0g·L‑1和秋水仙碱10‑20mg·L‑1，pH 5.6‑6.0；3)收集、纯化小孢子将接种后的小花进行旋切，过滤，离心，收集小孢子；将收集到的小孢子用提取液于24‑26℃、黑暗中放置1‑3d，用麦芽糖溶液纯...

【技术特征摘要】
1.一种大麦小孢子的培养方法，包括以下步骤：1)选取幼穗并预处理选取中部小孢子发育处于单核早期到中期的幼穗，保留上部两片叶子基部1.0-1.5cm，除去叶片，用薄膜包裹保湿，于4-6℃预处理14-21d；2)处理小花取幼穗上的小花，消毒、冲洗，接种至提取液中，于1-10℃静置1-2d；所述提取液含有甘露醇55-65g·L-1，CaCl21-1.2g·L-1、N-吗啡乙烷磺酸0.9-1.0g·L-1和秋水仙碱10-20mg·L-1，pH5.6-6.0；3)收集、纯化小孢子将接种后的小花进行旋切，过滤，离心，收集小孢子；将收集到的小孢子用提取液于24-26℃、黑暗中放置1-3d，用麦芽糖溶液纯化；4)培养小孢子纯化后的小孢子用诱导培养基洗涤、悬浮，调节小孢子密度至每毫升1.0×103-1.0×106个，接种于诱导培养基中，24-26℃，暗培养15-24天；之后再进行分化培养、诱导培养和壮苗培养，得到大麦幼苗。2.根据权利要求1所述大麦小孢子的培养方法，其特征在于，所述诱导培养基以N6培养基为基本培养基，其中，铁盐加倍，KNO31410-142...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭桂梅，陈志伟，何婷，陆瑞菊，刘成洪，黄剑华，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海,31