采用分光光度法测定糖醇螯合钙肥螯合率的方法技术

本发明专利技术公开了采用可见分光光度法快速检测糖醇螯合钙肥螯合率的方法，首先，在100r/min‑350r/min的振荡频率下，以丙酮为提取剂反复提取，将糖醇螯合钙肥中的糖醇螯合钙螯合态钙和游离态钙的分离，得到糖醇螯合钙和上清液；然后，以水杨酸‑硫酸溶液和NaOH为显色剂，在410nm波长下，采用可见分光光度法分别测定糖醇螯合钙和上清液中的硝酸根含量，最后通过公式计算鳌合率。其将对钙离子的测定转化为对硝酸根离子含量的测定，显色明显，测量准确，又可以和测定钙离子含量做出互相对比，分光光度法实验对设备和人员要求低，适合企业和普通实验室测定；并且只需计算硝酸根的含量即可测定螯合率，无需将其转化为钙离子含量，简化了计算过程。

【技术实现步骤摘要】
采用分光光度法测定糖醇螯合钙肥螯合率的方法
：本专利技术属于螯合物螯合率测定
，具体涉及糖醇螯合钙的螯合率测定方法，通过分光光度法测定硝酸根的含量，进而转化为螯合钙和游离钙的含量，计算螯合率。
技术介绍
：糖醇钙螯合物是由糖醇的羟基脱氢后与钙离子发生螯合反应生成的具有五元环或六元环等结构的物质，具有稳定性好、利用率高的优点，已广泛用在食品、医药、化工等领域。糖醇作为多羟基化合物，是光合作用的初产物，输送能力强，输送效果好。糖醇在植物体内可提高植物抗逆性，加强愈伤组织的分化和再生能力，其结构上的多齿性，使得螯合产物稳定，进入到植株体内容易降解释放出养分，促进植物的吸收利用。市场上很多机构和企业都在生产和销售糖醇螯合肥料，但没有确切的技术指标说明螯合肥料中螯合物的数量或质量，主要因为分析检测手段的不足。糖醇螯合物的螯合率是该类物质质量检测与机理分析的重要依据，但目前尚无糖醇螯合物螯合率检测的国家标准方法。目前已有的国家标准方法主要应用于氨基酸螯合物螯合率的检测，如凝胶过滤色谱法、有机溶剂萃取法；此外，已有授权专利也主要应用于氨基酸螯合物螯合率的检测，如：红外光谱法、紫外光谱法、修饰电极法、分光光度法与XRD联用法。迄今为止，尚未见“糖醇螯合钙螯合率检测”的相关报道。专利CN101368903A公开了一种测定氨基酸微量元素螯合物螯合率的检测方法，其中利用紫外-可见光光谱分析吸光度及波长进而测定氨基酸螯合物(Cu、Fe、Mn、Zn)的螯合率，因该方法所应用的氨基酸螯合物的金属离子都是自身有颜色特征的一类，而糖醇螯合钙中的钙离子溶液无色透明，这导致在分光光度计中无法测出吸光度，即使使用显色剂与钙离子进行显色反应，由于显色剂均与金属离子的作用能力较强，会破坏糖醇螯合钙的结构，因此无法直接进行糖醇螯合钙螯合率的测定。专利CN105004774A公开了一种修饰电极的制备方法与饲料添加剂赖氨酸铜中游离铜离子的测定应用的方法，该专利应用的关键在于修饰电极对赖氨酸铜不存在电化学响应，从而利用差分脉冲伏安法测定溶液中金属铜离子含量来计算赖氨酸铜的螯合率，而糖醇螯合钙是属于本身带电荷具有电化学信号的一种螯合物，游离态的钙离子也具有导电性，因此此方法无法在不分离糖醇螯合钙螯合态钙和游离态钙情况下准确测出螯合率。专利CN107286219A公开了一种分光光度法与XRD联用确定微量元素复合氨基酸/小肽螯合物合成配比及螯合率快速估测方法，该专利方法主要应用的前提是对螯合配比的测定，通过XRD图谱中出峰的多少估测螯合率，并且只能估测螯合程度较高的螯合原液，对于体系中游离态金属离子较多的体系不适合测定螯合率。糖醇螯合肥料螯合率的检测方法一直处于探讨的过程，寻找适合的螯合率检测方法对于糖醇螯合肥料的肥效和品质评价具有重要的意义。基于目前还没有关于糖醇螯合钙肥的螯合率检测方法，为了推动糖醇螯合肥料的深入研究，建立糖醇肥料产品的标准，制定一种有效的检测方法对糖醇螯合肥料的生产、推广、应用具有重要的现实意义。在测定糖醇螯合肥螯合率时，由于糖醇螯合肥母液中钙离子分为游离态和螯合态，首先需要将糖醇螯合钙从糖醇螯合肥母液中分离，然后分别测定糖醇螯合钙和溶液中的钙离子含量。由于糖醇螯合钙不稳定，分离过程中容易破坏其螯合结构，导致螯合率的测定不准确。分离后若采用EDTA滴定测定钙离子的浓度，势必增加工作量；采用ICP—AES测定，糖醇螯合钙是一种螯合物其标准曲线难以绘制；若采用分光光度法测定，在显色处理中螯合态钙离子与显色剂不具有明显的线性定量关系。如何简单、快速、低成本地测定糖醇螯合钙的螯合率成为急需解决的问题。本专利技术建立了有机溶剂萃取法和分光光度法联用检测糖醇螯合钙螯合率的方法，具有简单、高效、成本低的优点，可以快速测定糖醇螯合物在螯合肥料中的占有量。
技术实现思路
：专利技术的目的在于寻求一种采用可见分光光度法快速检测山梨醇螯合钙肥螯合率的方法，解决了现有方法测定糖醇螯合肥中游离态和螯合态钙离子含量时，存在操作复杂，难以实现等问题。为了实现上述目的，本文专利技术一种采用可见分光光度法快速检测糖醇螯合钙肥螯合率的方法，具体包括以下步骤：(1)糖醇螯合钙螯合态钙和游离态钙的分离在糖醇螯合钙肥中加入适量丙酮，置于振荡器中，于100r/min-350r/min的振荡频率下，振荡10min-40min，分离得到白色胶状底层沉淀物和上清液；在底层沉淀物中加入适量丙酮，置于振荡器中，于100r/min-350r/min的振荡频率下，振荡10min-40min后分离，再次得到底层沉淀物和上清液，重复上述分离步骤，直至上清液中硝酸根含量不变，最后得到的底层沉淀物即为糖醇螯合钙；(2)分光光度法测定螯合率①糖醇螯合钙中游离态钙含量测定：收集步骤(1)产生的上清液，以水杨酸-硫酸溶液和NaOH为显色剂，在410nm波长下，采用可见分光光度法测定合并上清液中硝酸根含量C上清液；②糖醇螯合钙螯合态钙含量测定：将步骤(1)得到的糖醇螯合钙加水稀释，以水杨酸-硫酸溶液和NaOH为显色剂，在410nm波长下，采用可见分光光度法测定糖醇螯合钙中硝酸根的含量C底物；③螯合率计算：其中，C上清液为上清液中硝酸根含量C上清液(g)；C底物为糖醇螯合钙中硝酸根含量C上清液(g)。进一步地，所述糖醇螯合钙肥由糖醇、水和过量的硝酸钙制备而成，其中糖醇包括但不限于山梨醇、甘露醇和木糖醇中的一种或多种。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点：(1)将对钙离子的测定转化为对硝酸根离子含量的测定，显色明显，测量准确，又可以和测定钙离子含量做出互相对比。(2)分光光度法实验对设备和人员要求低，适合企业和普通实验室测定；并且只需计算硝酸根的含量即可测定螯合率，无需将其转化为钙离子含量，简化了计算过程。(3)提供一种便于企业和机构测定糖醇螯合钙螯合率的技术，以最简单直接的方式测定螯合率，填补国家标准检测方法空缺，满足行业需要。具体实施方式：下面通过具体实施方式对本专利技术做进一步描述。实施例1：本实施例中涉及的不同糖醇螯合钙利用分光光度法测定螯合率，具体包括以下步骤：(1)将山梨醇8份，水18份和硝酸钙40份加入到广口瓶中，在磁力水浴锅中搅拌，在65℃和1000r/min的转速下，反应35min，得到糖醇螯合钙母液；(2)称取1g上述(1)中制备的糖醇螯合钙母液和10mL丙酮加入到离心管中，封口后置于振荡器中，在300r/min的振荡频率下，振荡时间30min，收集上清液Ai，i＝1；(3)将10mL丙酮加入去除上清液的离心管中，再次置于振荡器中，在300r/min的振荡频率下，振荡30min，收集上清液Ai，i＝2、3、4、5；(4)重复步骤(3)四次，测定离心管底层白色胶状沉淀物即为糖醇螯合钙；(5)分光光度法测定螯合率：收集前面(1)-(4)步骤产生的上清液Ai，i＝1、2、3、4、5；将五次溶液倒入同一容量瓶中加水稀释至100mL，定容摇匀，以水杨酸-硫酸溶液为显色剂，在410nm波长下，采用可见光分光光度法测定的本实施例五次提取过程中上清液的硝酸根总量C上清液，收集步骤(4)产生的底层白色胶状沉淀物糖醇螯合钙；将糖醇螯合钙加水稀释，以水杨酸-硫酸溶液和NaOH为显色剂，在410nm波长下，采用可见分光光本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.采用可见分光光度法快速检测糖醇螯合钙肥螯合率的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)糖醇螯合钙螯合态钙和游离态钙的分离在糖醇螯合钙肥中加入适量丙酮，置于振荡器中，于100r/min‑350r/min的振荡频率下，振荡10min‑40min，分离得到白色胶状底层沉淀物和上清液；在底层沉淀物中加入适量丙酮，置于振荡器中，于100r/min‑350r/min的振荡频率下，振荡10min‑40min后分离，再次得到底层沉淀物和上清液，重复上述分离步骤，直至上清液中硝酸根含量不变，最后得到的底层沉淀物即为糖醇螯合钙；(2)分光光度法测定螯合率①糖醇螯合钙中游离态钙含量测定：收集步骤(1)产生的上清液，以水杨酸‑硫酸溶液和NaOH为显色剂，在410nm波长下，采用可见分光光度法测定合并上清液中硝酸根含量C上清液；②糖醇螯合钙螯合态钙含量测定：将步骤(1)得到的糖醇螯合钙加水稀释，以水杨酸‑硫酸溶液和NaOH为显色剂，在410nm波长下，采用可见分光光度法测定糖醇螯合钙中硝酸根的含量C底物；③螯合率计算：

【技术特征摘要】
1.采用可见分光光度法快速检测糖醇螯合钙肥螯合率的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)糖醇螯合钙螯合态钙和游离态钙的分离在糖醇螯合钙肥中加入适量丙酮，置于振荡器中，于100r/min-350r/min的振荡频率下，振荡10min-40min，分离得到白色胶状底层沉淀物和上清液；在底层沉淀物中加入适量丙酮，置于振荡器中，于100r/min-350r/min的振荡频率下，振荡10min-40min后分离，再次得到底层沉淀物和上清液，重复上述分离步骤，直至上清液中硝酸根含量不变，最后得到的底层沉淀物即为糖醇螯合钙；(2)分光光度法测定螯合率①糖醇螯...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜冬云，孙文轩，白利勇，张凤魁，陆彦平，朱凯，李玉鹏，李碧莹，
申请(专利权)人：青岛大学，鲁化好阳光生态肥业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37