可视化检测水稻根系低氮胁迫程度的生物学方法技术

本发明专利技术的可视化检测水稻根系低氮胁迫程度的生物学方法，属于生物技术领域。OsCEP2基因的启动子序列将被克隆并连接GUS报告基因再导入水稻基因组中构建报告基因株系及材料。OsCEP2基因启动子proOsCEP2序列感知外部环境中低氮胁迫程度，调控下游GUS报告基因在水稻根系的表达；根据GUS染色的颜色深浅来判断植物根系受外界低氮胁迫的程度。本发明专利技术方便快捷，能在较短的时间内鉴别水稻根系是否受到低氮胁迫，以及低氮对水稻根系的胁迫情况，且不需要昂贵的仪器设备；另外使用颜色变化程度来显示植物根系受到低氮胁迫的程度，这种可视化的方式符合现代研究报告的需求。因此，本发明专利技术在相关商业产品开发和科学研究方面有较好推广前景。

【技术实现步骤摘要】
可视化检测水稻根系低氮胁迫程度的生物学方法
本专利技术提供一种可视化检测水稻根系低氮胁迫程度的生物学方法，属于生物

技术介绍
氮是植物生长发育所必需的大量营养元素。氮是叶绿素、核酸、蛋白质及一些激素的组成成分，对植物生命活动及农作物品质和产量均具有非常重要的作用。农业土壤中，植物养分的分布是极度不均匀的。植物能否感应并快速高效地吸收营养的能力会决定其养分吸收效率和竞争优势。植物在漫长的进化过程中形成了一系列分子机制、生理生化及形态学的适应性。所有这些机制的启动都是以植物感受到外源信号为前提的。为控制和减轻低氮对水稻产量以及人类生存造成的威胁，一方面我们可以在农业生产活动中经常通过施用大量氮素肥料来补充土壤中缺乏的氮素，另一方面，我们还可以培育响应低氮的粮食作物品种。水稻根系的生长受到低氮诱导而出现伸长，可视化的观察水稻根系是否受到低氮胁迫的影响，传统的方法是通过测定不同浓度低氮胁迫下水稻根的伸长量，或者通过定量PCR测定低氮相应基因的表达丰度，这样比较费时费力，并且水稻根伸长受外界环境因素(温度，pH，营养等)影响较大，导致测量结果误差较大，而且重复性不好。另外，根系伸长实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种ProOsCEP2序列，其特征在于：所述ProOsCEP2序列如SEQ ID NO：4所示；所述ProOsCEP2序列为OsCEP2基因的启动子序列；OsCEP2基因的编码序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种ProOsCEP2序列，其特征在于：所述ProOsCEP2序列如SEQIDNO：4所示；所述ProOsCEP2序列为OsCEP2基因的启动子序列；OsCEP2基因的编码序列如SEQIDNO：1所示。2.一种proOsCEP2-GUS转基因水稻种子，其特征在于：所述proOsCEP2-GUS转基因水稻种子的获得方法为：OsCEP2基因的ATG上游的2016bp序列作为启动子被特异性引物扩增；将目的片段ProOsCEP2序列导入克隆载体pEASY-Blunt，测序正确后再导入pCAMBIA1300，驱动下游的GUS报道基因表达；将pCAMBIA1300-proOsCEP2载体转化到农杆菌EHA105菌株中，利用转化有pCAMBIA1300-proOsCEP2载体的农杆菌侵染水稻愈伤组织，筛选获得转pCAMBIA1300-proOsCEP2的转基因水稻幼苗，大田种植并得到proOsCEP2-GUS转基因水稻种子。3.根据权利要求2所述的proOsCEP2-GUS转基因水稻种子，其特征在于：特异性引物为SEQIDNO：2所示的正向引物pCAMBIA1300-proOsCEP2-F和SEQIDNO：3所示的反向引物pCAMBIA1300-proOsCEP2-R。4.可视化检测水稻根系低氮胁迫程度的生物学方法，其特征在于：OsCEP2基因的启动子序列连接GUS报告基因再导入水稻基因组中，OsCEP2基因启动子proOsCEP2序列感知外部环境中低氮胁迫程度，调控下游GUS报告基因的表达；根据GUS染色的颜色深浅来判断植物根系受外界低氮胁迫的程度。5.根据权利要求4所述的可视化检测水稻根系低氮胁迫程度的生物学方法，其特征在于：OsCEP2基因启动子proOsCEP2序列由特异性引物进行扩增，特异性引物为SEQIDNO：2所示的正向引物pCAMBIA1300-proOsCEP2-F和SEQIDNO：3所示的反向引物pCAMBIA1300-proOsCEP2-R。6.权利要求5所述的可视化检测水稻根系低氮胁迫程度的生物学方法，其特征在于：（1）proOsCEP2-GUS转基因水稻种子的获得；基因OsCEP2的ATG上游的2016bp序列作为启动子被特异性引物扩增；将目的片段导入克隆载体pEASY-Blunt，测序...

【专利技术属性】
技术研发人员：宣伟，张玉文，谢远明，徐国华，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32