贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03及其应用制造技术

本发明专利技术公开了贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03及其应用，贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03的保藏编号为CCTCC M 2018084。本发明专利技术的贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03，纯菌对香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种及其他多种病原菌都有很好的抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03及其应用
本专利技术涉及一株新的贝莱斯芽孢杆菌菌株及其应用。
技术介绍
土传病害是由生活在土壤中或残留在土壤的病株残体中的病菌引起的作物病害。土传病在世界范围内非常普遍，通常引起作物枯萎病、立枯病、黄萎病、根腐病、青枯病、根结线虫病和疫病等，这些病害给农业生产带来重大的经济损失，严重制约现代农业的可持续发展。香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型[Fusariumoxysporumf.sp.Cubense(E.F.Smith)Snyder&Hansen)引起的一种重要的土传真菌性病害。香蕉作为全球第四大食物贸易商品，且该病对香蕉产业的危害具有世界性、毁灭性等特征，使其成为全球最重要的植物病害之一。从1874年首次报道至今，尽管有多种防治方法的研究，但仍未找到对香蕉实际生产种植过程中，香蕉枯萎病的发生、防控有效的手段。传统的化学防治方法通常使用化学农药直接喷施继而作用到作物或病原菌。但该方法难以触杀到隐藏在土中及香蕉维管束内部的香蕉枯萎病菌，用溴化甲烷进行土壤熏蒸消毒最长只能维持3年，香蕉枯萎病菌又卷土重来，并且化学药品的施用不仅因病原菌易产生抗性而药效变得更低，也易引起一系列的环境和安全问题，故该防治方法不被推荐来继续研究和使用。抗病品种的选育周期长，目前进展非常缓慢，虽有选育出抗性品种，但其栽培性状出现果实口感差、品质不佳等问题，影响其推广。生物防治手段对环境、人体较为友好，被广大研究者推崇。但目前生物防治尤其是利用拮抗菌，存在着菌株在环境中难存活，难以持续对抗土壤中病原菌，或难以定殖于植物对抗病原菌等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株新的贝莱斯芽孢杆菌菌株及其应用。本专利技术所采取的技术方案是：贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03，保藏于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏名称为贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03BacillusvelezensisHN03，分类命名为BacillusvelezensisHN03，保藏编号为CCTCCM2018084。一种微生物制剂，包括载体，载体负载有上述的贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03。上述贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03在制备微生物病害生物防治菌剂中的应用。作为上述应用的进一步改进，微生物病害病原菌选自香蕉枯萎病菌4号生理小种、香蕉枯萎病1号生理小种、辣椒枯萎病菌、番茄枯萎病菌、烟草疫霉病菌、葡萄炭疽病菌、诺丽枯萎病菌、释迦枯萎病菌、苜蓿枯萎病菌。一种香蕉育种栽培基质，包括有机质和上述的贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03，有机质选自蚯蚓粪和牛粪中的至少一种。作为上述香蕉育种栽培基质的进一步改进，基质还含有河沙、椰糠。作为上述香蕉育种栽培基质的进一步改进，贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03初始菌剂、蚯蚓粪的质量比为1：(8～12)。作为上述香蕉育种栽培基质的进一步改进，贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03初始菌剂、蚯蚓粪、河沙、椰糠的质量比为0.1:1:2:86.9。作为上述香蕉育种栽培基质的进一步改进，贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03初始菌剂的培养方法为：1)将贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03接种于NA培养基30℃培养24h后得到发酵种子液；2)将发酵种子液按1％体积比接种于NA培养基中，30℃、200rpm震荡培养3-5d，得到菌株发酵液；3)将菌株发酵液离心后，菌体重悬浮于清水中，得到菌株初始菌剂。作为上述香蕉育种栽培基质的进一步改进，菌株初始菌剂中，贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03的菌液浓度不低于109CFU/mL。本专利技术的有益效果是：本专利技术的贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03对香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种及其他多种病原菌都有很好的抑制作用。将本专利技术中的贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03菌体(不含发酵液)与蚯蚓粪一起制成生物有机肥，对香蕉枯萎病1号、4号生理小种及其他多种病原菌具有很好的拮抗效果，同时还对植株生长具有促生作用。将本专利技术中的贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03菌体、蚯蚓粪和椰糠一起制成香蕉育种栽培基质，预防苗期枯萎病的侵染，促进香蕉生长，提高蕉苗的抗性。贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03在蚯蚓粪中易于定殖，使其能够在土壤中有效持续抑制香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种及其它土壤常见病原的生长，环境安全性好，对多种土传病害均有拮抗作用。贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03菌株培养条件简单，繁殖速度快。仅用菌体而非发酵液作为防控的主体，利于对病原菌的识别并分泌抗性物质。同时菌体较发酵液等易于保存，易于工业化生产、保存、运输。施用可随日常浇水同时进行，施用简单，具有良好的开发应用前景。附图说明图1是贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03的系统发育树；图2是贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03菌液对峙部分病原菌的实验结果；图3～9是不同处理组对香蕉枯萎病的防治效果。具体实施方式下面结合实验，进一步说明本专利技术的技术方案。贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03的筛选：专利技术人从土壤中分离得到贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03，该菌株于2018年2月5日送去中国典型培养物保藏中心进行保藏后，经鉴定该菌株HN03的保藏名称为BacillusvelezensisHN03，分类命名为BacillusvelezensisHN03，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2018年2月5日，保藏号为CCTCCM2018084。保藏中心于2018年3月1日完成检测，确定保藏的微生物存活。贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03的鉴定：贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03的主要生物学特性为:该菌为革兰氏阳性菌，培养条件为NA培养基，30℃，pH7.0。其16SRNA序列如下(SEQIDNO：1)：ATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03，保藏于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2018084。

【技术特征摘要】
1.贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03，保藏于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM2018084。2.一种微生物制剂，包括载体，其特征在于：载体负载有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03。3.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03在制备微生物病害生物防治菌剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：微生物病害病原菌选自香蕉枯萎病菌4号生理小种、香蕉枯萎病1号生理小种、辣椒枯萎病菌、番茄枯萎病菌、烟草疫霉病菌、葡萄炭疽病菌、诺丽枯萎病菌、释迦枯萎病菌、苜蓿枯萎病菌。5.一种香蕉育种栽培基质，包括有机质和权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌菌株HN03，有机质选自蚯蚓粪和牛粪中的至少一种。6.根据权利要求5所述的香蕉育种栽培基质，其特征在于：基质还含有河沙、椰糠。7.根据权利要求5所...

【专利技术属性】
技术研发人员：武春媛，吴小燕，李勤奋，邓晓，李怡，吴东明，谭华东，苏剑程，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：海南,46