本发明专利技术涉及肠道菌群调节药物领域，具体涉及白花蛇舌草多糖在制备肠道菌群调节药物中的应用。本发明专利技术通过研究发现，白花蛇舌草多糖干预后的荷瘤大鼠对黄酮苷类成分的吸收作用出现了提高，灌胃一段时间后的荷瘤大鼠肠道菌群在门、纲、目、科、属、种层面的丰度发生了变化，证实了白花蛇舌草多糖对疾病状态的大鼠肠道菌群具有切实的调节作用，可用于制备针对肿瘤患者的肠道菌群调节药物，也可与黄酮苷类药物进行联合用药，提高抗肿瘤药物的药效，为黄酮苷类抗肿瘤药物的进一步开发做出了贡献。
【技术实现步骤摘要】
白花蛇舌草多糖在制备肠道菌群调节药物中的应用
本专利技术涉及肠道菌群调节药物领域，具体涉及白花蛇舌草多糖提取物在制备肠道菌群调节药物及在制备黄酮类抗肿瘤药物辅助药物方面的应用。
技术介绍
白花蛇舌草为茜草科植物耳草属的一年生披散草本植物，《中华人民共和国药典》(2015版)一部附录中描述其为茜草科植物白花蛇舌Oldenlandiadiffusa(Willd.)Roxb的干燥全草。其味苦、甘，性寒，归心、肝、脾经，具有清热解毒，利尿消肿，抗癌止痛的功效。黄酮类成分是白花蛇舌草中含量较高的有效提取部位，研究认为其抗肿瘤作用机制与干扰肿瘤细胞能量代谢，诱导肿瘤细胞凋亡等有关。周忆新等研究表明白花蛇舌草总黄酮对人肝癌细胞HepG-2有抑制增殖作用。杨娴等研究表明FOD(白花蛇舌草总黄酮)能有效抑制黑色素瘤A375和B16细胞增殖，诱导细胞凋亡。张硕等采用MTT法表明FOD在体外、体内均具有抑制肝癌细胞的作用。邓雪清等研究表明FOD对鼻咽癌细胞株CNE1具有抑制增殖作用，其作用机制可能与诱导细胞凋亡有关。除抗肿瘤作用之外，白花蛇舌草黄酮抗氧化功能机免疫功能等，李明通过体外实验研究表明白花蛇舌草多糖有良好的清除氧自由基和羟自由基的能力而具有体外抗氧化活性。王转子等研究表明白花蛇舌草多糖通过提高SOD活力和对负氧自由基的清除作用及抗脂质过氧化作用来抵抗衰老。蒋剑平等通过DPPH清除率、总的抗氧化活性和还原能力测定等体外抗氧化试验表明白花蛇舌草多糖对体外有较强的抗氧化能力，对自由基有较好的清除作用。王宇翎等通过实验表明白花蛇舌草总黄酮有增强机体特异性免疫功能和非特异性免疫功能的作用。杨培民研究认为多糖成分可提供肠道菌群所需糖源，恢复肠道益生菌数量和活力，可增强机体的全身免疫反应，提高机体免疫系统功能。黄酮类化合物对癌症、心脏病、中风等疾病的治疗起着十分重要的作用。黄酮类物质常与糖结合成苷类，仅有小部分以游离形式存在，其口服生物利用度低，在肠道内滞留时间长，绝大多数需经肠道细菌酶分解为次生苷、苷元或其他代谢产物而发挥疗效。临床上白花蛇舌草主要用于抗肿瘤、抗菌消炎作用，其多糖和黄酮类物质均为发挥药效作用的活性成分，通过集中探索二者单体成分的研究成果，发现其在药效发挥上具有不同程度的一致性，而大量研究只针对白花蛇舌草黄酮和多糖的单体成分，对二者间是否存在相互作用的报导寥寥无几。
技术实现思路
针对现有技术中的问题，本专利技术针对白花蛇舌草多糖与白黄蛇舌草黄酮提取物之间的作用关系进行了研究。通过药代动力学实验表明，白花蛇舌草多糖对荷瘤大鼠的肠道菌群具有调节作用，能够帮助疾病状态的大鼠增强对黄酮苷类物质的吸收，可用于制备肠道菌群调节药物或黄酮苷类抗肿瘤药物的辅助用药。为了实现以上目的，本专利技术提供以下方案：本专利技术的第一方面，提供一种白花蛇舌草多糖的提取方法，步骤如下：(1)将白花蛇舌草加水浸泡一段时间后，加热至一定温度回流提取，将提取液合并过滤离心，取上清液减压浓缩。(2)向上清液中加入乙醇使溶液中的醇达到一定浓度，静置一段时间离心将滤液浓缩，继续加醇使滤液中的醇含量升高，静置后离心取沉淀部分，经冷冻干燥得到白花蛇舌草多糖粗品。(3)向白花蛇舌草多糖粗品中加入鞣酸沉淀后再加入活性炭升温脱色，以除去蛋白质和色素等杂质。通过超滤技术截留一定分子量的多糖，然后采用DEAE-32离子交换层析和Superdex30凝胶层析去除无机盐和小分子糖等杂质，制得白花蛇舌草多糖。优选的，上述提取方法中，步骤(1)中白花蛇舌草加入10-20倍体积的水浸泡1-3h，加热至70-90℃，提取1-5次，每次1-3h，过滤离心，取上清液减压浓缩。优选的，步骤(2)中向浓缩后的上清液中加入无水乙醇至溶液中的乙醇含量达到30-50％，静置10-14h，离心后取滤液部分浓缩，继续加入乙醇至醇含量达到70-90％，静置10-14h，离心后保留沉淀部分，通过冷冻干燥得到白花蛇舌草多糖粗品。优选的，步骤(3)中向得到的白花蛇舌草多糖粗品中加入1％的鞣酸除去蛋白质沉淀，并加入0.5％(g·mL-1)活性炭升温至70-90℃保温脱色。脱色完成后过滤将滤液转移至超滤罐中，截留分子量<10K的多糖。本专利技术第二方面，提供上述制备方法得到的白花蛇舌草多糖。本专利技术第三方面，提供一种白花蛇舌草黄酮苷的提取方法，步骤如下：将白花蛇舌草干品加入乙醇溶液回流提取。优选的，将白花蛇舌草干品加入12-16倍量的乙醇溶液回流提取1-3次，每次2-4h。其中，乙醇溶液的浓度为73％。本专利技术第四方面，提供上述白花蛇舌草黄酮提取方法得到的白花蛇舌草黄酮苷。其中，芦丁、异槲皮苷、槲皮苷平均提取量分别为2.529，0.435，0.215mg·g-1。本专利技术的第五方面，提供上述白花蛇舌草多糖在制备调节肠道菌群药物中的应用。优选的，上述肠道菌群药物为针对肿瘤患者的肠道菌群药物。本专利技术的第六方面，提供上述白花蛇舌草多糖在制备抗肿瘤药物辅助药物方面的应用。优选的，上述抗肿瘤药物为黄酮苷类药物。优选的，上述辅助药物为帮助抗肿瘤药物吸收的药物。本专利技术的第七方面，提供上述白花蛇舌草多糖与白花蛇舌草黄酮苷联用在制备抗肿瘤药物、抗炎药物、抗氧化药物方面的应用。本领域公知，白花蛇舌草黄酮苷具有抗肿瘤、消炎抗氧化提高免疫力等多重功效，本专利技术研究发现白花蛇舌草多糖干预后，机体对黄酮苷类成分的吸收出现了显著提高。本领域技术人员毫无疑问可以将两者联合进行用药，实现药效的提高。优选的，上述白花蛇舌草多糖与白花蛇舌草黄酮苷的给药剂量为20mg/kg。本专利技术的有益效果本专利技术通过研究首次发现了白花蛇舌草多糖对白花蛇舌草黄酮苷类的物质的促进吸收作用。通过对大鼠肠道菌群LEfSe分析及大鼠药物代谢动力学的研究发现，与荷瘤大鼠相比，经白花蛇舌草多糖干预后肠道菌群差异主要集中在厚壁菌门、疣微菌门两大菌门以及其他纲、目、科、属下菌群变化，并在一定程度上可使荷瘤大鼠丰富度下降的肠道菌群提高，或降低荷瘤大鼠因病理状态而上调的肠道菌群丰富度，揭示多糖类成分对肿瘤病理状态发生变化的肠道菌群具有一定程度的改善作用。附图说明构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。图1白花蛇舌草多糖提取工艺流程图；图2白花蛇舌草多糖精制工艺流程图；图3正常大鼠、荷瘤大鼠及经多糖干预后的荷瘤大鼠灌胃白花蛇舌草总黄酮提取物体内芦丁、槲皮苷、异槲皮苷浓度－时间曲线图；其中图3A为正常大鼠、荷瘤大鼠及多糖干预后的大鼠体内芦丁代谢变化图，图3B为正常大鼠、荷瘤大鼠及多糖干预后的大鼠体内槲皮苷代谢变化图，图3C为正常大鼠、荷瘤大鼠及多糖干预后的大鼠体内异槲皮苷代谢变化图。图4荷瘤大鼠与经多糖干预后荷瘤大鼠肠道菌群Lefse树形图；图5荷瘤大鼠与经多糖干预后荷瘤大鼠肠道菌群LDA条形图；图6荷瘤大鼠与经多糖干预后荷瘤大鼠肠道菌群OTU分析柱形图；具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种白花蛇舌草多糖的提取方法，其特征在于，步骤如下：(1)将白花蛇舌草加水浸泡一段时间，加热至一定温度回流提取，合并提取液过滤离心，取上清液减压浓缩；(2)向所述上清液中加入乙醇使溶液中的醇达到一定浓度，静置一段时间离心将滤液浓缩，继续加醇使滤液中的醇含量升高，静置后离心取沉淀部分，经冷冻干燥得到白花蛇舌草多糖粗品；(3)向所述白花蛇舌草多糖粗品中加入鞣酸沉淀后再加入活性炭升温脱色；通过超滤技术截留一定分子量的多糖，然后采用DEAE‑32离子交换层析和Superdex 30凝胶层析，制得白花蛇舌草多糖。
【技术特征摘要】
1.一种白花蛇舌草多糖的提取方法，其特征在于，步骤如下：(1)将白花蛇舌草加水浸泡一段时间，加热至一定温度回流提取，合并提取液过滤离心，取上清液减压浓缩；(2)向所述上清液中加入乙醇使溶液中的醇达到一定浓度，静置一段时间离心将滤液浓缩，继续加醇使滤液中的醇含量升高，静置后离心取沉淀部分，经冷冻干燥得到白花蛇舌草多糖粗品；(3)向所述白花蛇舌草多糖粗品中加入鞣酸沉淀后再加入活性炭升温脱色；通过超滤技术截留一定分子量的多糖，然后采用DEAE-32离子交换层析和Superdex30凝胶层析，制得白花蛇舌草多糖。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述白花蛇舌草加入10-20倍体积的水浸泡1-3h，加热至70-90℃，提取1-5次，每次1-3h，过滤离心，取上清液减压浓缩。3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述上清液加入无水乙醇至溶液中的乙醇含量达到30-50％，静置10-14h，离心后取滤液部分浓缩，继续加入乙醇至醇含量达到70-90％，静置10-14h，离心后保留沉淀部分，通过冷冻干燥得到所述白花蛇舌草多糖粗品。4.如权利要求1所述的提取方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨培民，马传江，曹广尚，王信，逯双，陈明月，孟莹，
申请(专利权)人：山东中医药大学附属医院，
类型：发明
国别省市：山东,37
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