一种从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，包括：原料预处理、制备脱脂粉、碱溶、酸沉、透析法低温除盐、杀菌及干燥。本发明专利技术具有工艺简单、处理成本低、周期短等优点，且整个过程无有害物质排放，对环境无污染；制备的虾夷扇贝生殖腺分离蛋白的持水、持油性、乳化性较虾夷扇贝生殖腺脱脂粉有明显的改善，且分离蛋白的形态较好，外观均一，质地细腻，色泽稳定，其持油性和乳化性均可与商品化的大豆分离蛋白相媲美。此外蛋白质中无溶剂残留，可以作为基料广泛用于食品或饲料工业因此本发明专利技术对于虾夷扇贝原料的开发利用具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法
本专利技术涉及一种功能性分离蛋白的制备工艺，更具体地说，涉及一种从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法。
技术介绍
近年来，中国扇贝产业发展迅速，2016年全国扇贝养殖产量高达180万吨。然而在扇贝高产的同时，也产生了大量的食品工业废弃物。虾夷扇贝生殖腺作为贝柱产品生产过程中的可食用副产物，其本身蛋白含量丰富，达到62.89±0.87％(以干重计)，是回收蛋白质的良好原料。水产分离蛋白具有营养价值高的特点，可以作为临床营养品和保健食品以及运动食品等的配料。传统的植物分离蛋白生产方法主要为酸/碱溶解-等电点沉淀法(即碱溶酸沉法)，而这一技术在水产蛋白的生产上还鲜有报道。该法与传统的硫酸铵盐析、酶法、有机溶剂沉淀、高压均质等方法相比，操作工艺简单，成本低，分离蛋白纯度较高，同时可一次性处理大量样品，不需要复杂仪器辅助，适合大规模生产，且产物具有较高的功能特性，具有良好的发展前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于开发一种利用碱溶酸沉法从虾夷扇贝生殖腺中回收功能性分离蛋白的方法，提高扇贝加工过程中副产物的利用率，避免资源浪费与环境污染，同时保证该方法具有工艺简单、可操作性强、生产效率高、适用于工业化生产等特点。为达到上述目的，本专利技术提供了一种从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，包括如下步骤：S1、原料预处理：取虾夷扇贝生殖腺，用水洗净后，制备成虾夷扇贝生殖腺匀浆液；优选方式下，步骤S1所述均浆参数为：2000～3000rpm条件下匀浆3～5min。S2、制备脱脂粉：向步骤S1制得的虾夷扇贝生殖腺匀浆液中加入正己烷/无水乙醇混合液，搅拌脱脂，抽滤得滤饼，所述滤饼使用正己烷/无水乙醇混合液冲洗表面，自然风干，粉碎后过100目筛，得扇贝生殖腺脱脂粉；优选方式下，步骤S2所述搅拌脱脂具体为：4℃下搅拌4～8h，所述搅拌脱脂重复1～3次；所述滤饼用所述正己烷/无水乙醇混合液冲洗表面，目的是除去残留在滤饼表面的油脂；所述正己烷/无水乙醇混合液中正己烷与无水乙醇的体积比为2～3:1，所述扇贝生殖性匀浆液与所述正己烷/无水乙醇混合液的体积比为1:8～12。S3、碱溶：将步骤S2制得的扇贝生殖腺脱脂粉与水混匀，调节pH至碱性，恒温搅拌，离心，收集上清，得扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液；优选方式下，步骤S3所述碱溶具体为：将步骤S2制得的扇贝生殖腺脱脂粉与水按料液比1:5～40(g:ml)混匀，使用1MNaOH溶液调节pH8～13，4～60℃恒温水浴搅拌5～240min，2000～5000rpm离心15～30min，收集上清，即扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液。S4、酸沉：将步骤S3所得扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液调至酸性pH，室温静置后收集沉淀，得扇贝生殖腺酸沉蛋白；优选方式下，步骤S4所述酸沉具体为：用1MHCl溶液调节步骤S3所得扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液pH至3.4～4.4，室温静置1～3h，9000～12000rpm离心15～30min，收集沉淀，即扇贝生殖腺酸沉蛋白。S5、透析法低温除盐：将步骤S4所得的酸沉蛋白溶于其重量1～3倍的去离子水中，搅拌均匀，pH调至中性得酸沉蛋白溶液，对所述酸沉蛋白溶液进行透析；优选方式下，步骤S5所述透析具体为：利用2～5KDa的透析膜、10～30mMpH7.4的磷酸盐缓冲溶液对酸沉蛋白溶液进行静置透析20～24h，控制整个透析过程温在0～4℃，所述磷酸盐缓冲溶液的用量为酸沉蛋白溶液体积的30～50倍；所述透析除盐的目的在于去除酸沉蛋白中的盐离子，以便减少蛋白中的杂质，以保证沉淀的效率即蛋白质纯度更高。S6、杀菌：对步骤S5所得透析后的扇贝生殖腺酸沉蛋白溶液进行杀菌，去除低分子臭味物质；优选方式下，步骤S6所述杀菌具体为：使用闪蒸杀菌系统，杀菌温度为100～150℃，闪蒸负压为-0.2～0.01MPa。S7、干燥：将步骤S6制得的蛋白溶液进行冷冻干燥或喷雾干燥处理，即得到扇贝生殖腺分离蛋白粉。优选方式下，所述从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，包括如下步骤：S1、原料预处理：取雌性虾夷扇贝生殖腺，用清水反复清洗后，2500rpm匀浆4min，制备生殖腺匀浆液；S2、制备脱脂粉：取步骤S1所得生殖腺匀浆液，加入8倍体积的正己烷/无水乙醇(V正己烷:V无水乙醇＝2:1)混合液，进行脱脂，抽滤后所得滤饼用正己烷/无水乙醇(V正己烷:V无水乙醇＝2:1)混合液冲洗以除去滤饼表面残留的脂肪，将滤饼自然风干，球磨仪粉碎，过100目筛，得到扇贝生殖腺脱脂粉；所述脱脂为4℃搅拌8h进行，脱脂过程进行3次；S3、碱溶：将步骤S2制备的扇贝生殖腺脱脂粉与水按照料液比1:5(g:mL)混匀，用1MNaOH溶液调节pH至11，4℃恒温水浴搅拌240min；随后4℃，2000rpm离心30min，收集上清，即碱溶蛋白溶液；S4、酸沉：将步骤S3所得的碱溶蛋白溶液用1MHCl溶液调节pH至4.4，室温静置3h，9000rpm离心30min，收集沉淀，即扇贝生殖腺酸沉蛋白；S5、透析法低温除盐：将步骤S3所得酸沉蛋白溶于其3倍重量的去离子水中，搅拌均匀，pH调至中性得扇贝生殖腺酸沉蛋白溶液，利用2KDa的透析膜、30mMpH7.4的磷酸盐缓冲溶液对所述扇贝生殖腺酸沉蛋白溶液进行静置透析除盐22h，所述磷酸盐缓冲溶液的用量为扇贝生殖腺酸沉蛋白溶液体积的40倍，透析温度为4℃；S6、杀菌：将步骤S5所得透析后的扇贝生殖腺酸沉蛋白经过闪蒸杀菌系统，去除低分子臭味物质，杀菌温度为120℃，闪蒸负压-0.05Mpa。S7、干燥：将步骤S6所得杀菌后的蛋白进行进行喷雾干燥得分离蛋白，所述喷雾干燥条件为：进口温度为220℃，出口温度为80℃，雾化盘转速为48Hz，塔内负压在10Pa。优选方式下，步骤S7所述冷冻干燥工作条件为：1～5Pa，-25℃～-50℃条件下真空冷冻干燥60～72h；喷雾干燥工作条件为：进口温度200～250℃，出口温度80～90℃，雾化盘转速为48Hz，塔内负压为8～10Pa。优选方式下，步骤S1为取虾夷扇贝生殖腺，用水清洗后，匀浆，制备生殖腺匀浆液。优选方式下，步骤S2为将步骤S1制得的生殖腺匀浆液中加入正己烷/无水乙醇混合液萃取脱脂，4℃下磁力搅拌萃取6h，所述萃取过程共进行2次，抽滤，所得滤饼用少量所述正己烷/无水乙醇混合液冲洗，自然风干，球磨仪粉碎，过100目筛，得到扇贝生殖腺脱脂粉；所述正己烷/无水乙醇混合液中正己烷与无水乙醇的体积比为3:1，所述扇贝生殖性匀浆液与所述正己烷/无水乙醇混合液的体积比为1:10。优选方式下，步骤步骤S3所述料液比为1:20(g/mL)，溶液pH值为12，水浴温度为25℃，浸提时间为60min，离心条件为4℃下4000rpm离心20min。优选方式下，步骤S4所述离心条件为4℃下10500rpm离心20min，蛋白等电点为pH3.8。优选方式下，步骤S5所述为采用3.5KDa的透析膜、20mMpH7.4的磷酸盐缓冲溶液对蛋白进行透析除盐处理，控制整个除盐过程磷酸盐缓冲溶液温度在4℃以下，处理20～24h。优选方式下，步骤S6所述闪蒸杀菌温度130℃，闪蒸负压-0.06MPa。本专利技术的有益效果是：1、本专利技术方法提高了虾夷扇贝加工过程中可食用副产物的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、原料预处理：取虾夷扇贝生殖腺，用水洗净后，制备成虾夷扇贝生殖腺匀浆液；S2、制备脱脂粉：向步骤S1制得的虾夷扇贝生殖腺匀浆液中加入正己烷/无水乙醇混合液，搅拌脱脂，抽滤得滤饼，所述滤饼使用正己烷/无水乙醇混合液冲洗表面，自然风干，粉碎后过100目筛，得扇贝生殖腺脱脂粉；S3、碱溶：将步骤S2制得的扇贝生殖腺脱脂粉与水混匀，调节pH至碱性，恒温搅拌，离心，收集上清，得扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液；S4、酸沉：将步骤S3所得扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液调至酸性pH，室温静置后收集沉淀，得扇贝生殖腺酸沉蛋白；S5、透析法低温除盐：将步骤S4所得的酸沉蛋白溶于其重量1～3倍的去离子水中，搅拌均匀，pH调至中性得酸沉蛋白溶液，对所述酸沉蛋白溶液进行透析；S6、杀菌：对步骤S5所得透析后的扇贝生殖腺酸沉蛋白溶液进行杀菌；S7、干燥：将步骤S6制得的蛋白溶液进行冷冻干燥或喷雾干燥，得到扇贝生殖腺分离蛋白粉。

【技术特征摘要】
1.一种从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、原料预处理：取虾夷扇贝生殖腺，用水洗净后，制备成虾夷扇贝生殖腺匀浆液；S2、制备脱脂粉：向步骤S1制得的虾夷扇贝生殖腺匀浆液中加入正己烷/无水乙醇混合液，搅拌脱脂，抽滤得滤饼，所述滤饼使用正己烷/无水乙醇混合液冲洗表面，自然风干，粉碎后过100目筛，得扇贝生殖腺脱脂粉；S3、碱溶：将步骤S2制得的扇贝生殖腺脱脂粉与水混匀，调节pH至碱性，恒温搅拌，离心，收集上清，得扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液；S4、酸沉：将步骤S3所得扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液调至酸性pH，室温静置后收集沉淀，得扇贝生殖腺酸沉蛋白；S5、透析法低温除盐：将步骤S4所得的酸沉蛋白溶于其重量1～3倍的去离子水中，搅拌均匀，pH调至中性得酸沉蛋白溶液，对所述酸沉蛋白溶液进行透析；S6、杀菌：对步骤S5所得透析后的扇贝生殖腺酸沉蛋白溶液进行杀菌；S7、干燥：将步骤S6制得的蛋白溶液进行冷冻干燥或喷雾干燥，得到扇贝生殖腺分离蛋白粉。2.根据权利要求1所述从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，其特征在于，步骤S1所述制备成虾夷扇贝生殖腺匀浆液的方法为：2000～3000rpm条件下匀浆3～5min。3.根据权利要求1所述从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，其特征在于，步骤S2所述搅拌脱脂具体为：4℃下搅拌4～8h，所述搅拌脱脂过程重复1～3次。4.根据权利要求1所述从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，其特征在于，步骤S2所述所述扇贝生殖腺匀浆液与所述正己烷/无水乙醇混合液的体积比为1:8～12。5.根据权利要求1所述从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，其特征在于，步骤S2所述所述正己烷/无水乙醇混合液中正己烷与无水乙醇的体积比为2～3:1。6.根据权利要求1所述从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，其特征在于，步骤S3所述碱溶具体为：将步骤S2制得的扇贝生殖腺脱脂粉与水按料液比1:5～40(g:ml)混匀，使用1MNaOH溶液调节pH8～13，4～60℃恒温水浴搅拌5～240min，2000～5000rpm离心15～30min，收集上清，即扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液。7.根据权利要求1所述从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，其特征在于，步骤S4所述酸沉具体为：用1MHCl溶液调节步骤S3所得扇贝生殖腺碱溶蛋白溶液pH至3.4～4.4，室温静置1～3h，9000～12000rpm离心15～30min，收集沉淀，即扇贝生殖腺酸沉蛋白。8.根据权利要求1所述从虾夷扇贝生殖腺中回收分离蛋白的方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴海涛，韩佳润，商文慧，阎佳楠，杜椅楠，聂斌，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21