一种提高铁皮石斛多糖含量的方法及采用该方法得到的铁皮石斛技术

本发明专利技术公开了一种提高铁皮石斛多糖含量的方法，属于基因工程领域，其步骤包括过表达DcUGP载体构建、菌种活化、侵染、共培养、抗性筛选和获得抗性植株等步骤；本申请利用农杆菌介导的方法，将DcUGP转入铁皮石斛中，获得了葡萄糖、蔗糖及多糖含量均高于野生型的铁皮石斛；本方法成本低、易操作，对缩短铁皮石斛育种年限，提高其品质具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种提高铁皮石斛多糖含量的方法及采用该方法得到的铁皮石斛
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种通过过表达基因提高铁皮石斛多糖含量的方法及采用该方法得到的石斛。
技术介绍
铁皮石斛(DendrobiumcatenatumLindl)，又称黑节草，为兰科石斛属多年生常绿草本植物。其种类繁多，全世界石斛属植物就有1000多种，其中我国有70多种，大部分分布在华南和西南地区。石斛在中国及东南亚的国家中是有着极高价值的民间药材，其干茎成为“枫斗”，根据《本草图经》中的“惟生石上者胜.亦有生栎木上者，名木斛，不堪用”，又知铁皮石斛在石斛属中为上品，其品质佳，药用价值高，药用成分好。铁皮石斛含有人体所必需的多种有益成分，味甘性微寒，属补益药中的补阴药；不仅具有清音润喉、滋阴清热、生津益胃等功效，还可以增强机体免疫力，预防心血管和眼科疾病。石斛的有效成分包括多糖、生物碱、黄酮类物质、菲类化合物、氨基酸及微量元素等，其中多糖是主要活性成分，石斛生理活性的强弱与其多糖含量密切相关，故常以多糖含量的高低判断石斛类药材质量的好坏。目前，已知的提高铁皮石斛中多糖含量的方法包括：1.通过改变种植铁皮石斛本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高铁皮石斛多糖含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)过表达DcUGP载体构建：a.根据已知的铁皮石斛的DcUGP cDNA序列，设计引物；b.提取铁皮石斛RNA反转录得到总cDNA，根据步骤(a)中设计得到的引物进行PCR扩增得到DcUGP目的片段；c.用SpeI与AscI限制内切酶对载体pFGC1008与步骤(b)得到的DcUGP目的片段进行酶切；d.将步骤(c)酶切后的DcUGP目的片段与载体pFGC1008进行电泳检测，对所需片段进行回收；将回收产物加入连接酶进行连接反应，得到连接产物pFGC1008‑DcUGP；e.将步骤(d)所得的连接产物pFGC1008‑DcUGP...

【技术特征摘要】
1.一种提高铁皮石斛多糖含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)过表达DcUGP载体构建：a.根据已知的铁皮石斛的DcUGPcDNA序列，设计引物；b.提取铁皮石斛RNA反转录得到总cDNA，根据步骤(a)中设计得到的引物进行PCR扩增得到DcUGP目的片段；c.用SpeI与AscI限制内切酶对载体pFGC1008与步骤(b)得到的DcUGP目的片段进行酶切；d.将步骤(c)酶切后的DcUGP目的片段与载体pFGC1008进行电泳检测，对所需片段进行回收；将回收产物加入连接酶进行连接反应，得到连接产物pFGC1008-DcUGP；e.将步骤(d)所得的连接产物pFGC1008-DcUGP转化大肠杆菌后，提取质粒pFGC1008-DcUGP并验证；(2)pFGC1008-DcUGP转化农杆菌GV3101将步骤(1)所得的质粒pFGC1008-DcUGP转化农杆菌GV3101，然后进行克隆PCR，进行农杆菌验证；(3)菌种活化：活化含有pFGC1008-DcUGP的保存农杆菌GV3011，制成侵染液；(4)侵染：选取生长健壮、颜色较绿且较致密的铁皮石斛野生型原球茎并切割，然后加入步骤(3)所得侵染液，进行侵染；(5)共培养：将步骤(4)侵染后的原球茎转入共培养基上进行共培养；(6)抗性筛选：将步骤(5)共培养后的原球茎转移至筛选培养基进行抗性筛选，至分化出新的原球茎，即完成抗性筛选；(7)植株再生：将步骤(6)所得的新的原球茎转移至不含潮霉素的培养基，待其分化出芽后，转入生根培养基中生根，获得完整植株。2.根据权利要求1所述的提高铁皮石斛多糖含量的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈稷，王丽，黄进，梁欢，杜丽峨，金小琬，田孟良，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51