使用循环微粒对自发性早产风险进行分层制造技术

本公开文本涉及自发性早产的蛋白质组生物标记物、足月分娩的蛋白质组生物标记物及其使用方法。具体而言，本公开文本提供了用于测定怀孕受试者是否处于增加的早产风险中的工具，以及用于降低怀孕受试者早产风险的工具。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用循环微粒对自发性早产风险进行分层
：相关申请的交叉引用本申请要求2015年12月4日提交的美国临时申请号62/263,549的优先权的权益，出于所有目的将该临时申请通过引用以其全文特此结合。
技术介绍
在低于5岁的儿童中，早产是新生儿发病和死亡的主要原因，早期孕龄的分娩展现出显著增加的风险(Liu等人,Lancer,385:61698-61706,2015；以及Katz等人,Lancet,382:417-425,2013)。根据母婴爱护基金会(MarchofDimes)，与38周后出生的婴儿相比，对于每个更早孕周分娩，新生儿综合发病率增加一倍。大约三分之二的自发性早产是自然自发性的，这意味着它们与医学干预无关(Goldenberg等人,Lancet,371:75-84,2008；以及McElrath等人,AmJEpidemiol,168:980-989,2008)。然而，我们对自发性早产(SPTB)的病因的理解在近期几乎没有进展，虽然这种现状是有令人信服的理由的。虽然人们越来越多地认为SPTB表示一种综合征而不是单一的病理单元，但研究子宫胎盘界面的病理生理学在伦理和身体方面均比较困难(Romero等人,Science,345:760-765,2014)。循环微粒(circulatingmicroparticle，CMP)生物学的发展领域可以提供这些困难的解决方案，因为这些颗粒提供了对子宫胎盘环境的取样。此外，研究这些颗粒的内容物有望鉴别出：新型的基于血液的且在临床上有用的生物标记物。微粒是与膜结合的囊泡，其大小范围为50-300nm，并且由多种类型的细胞脱落。微粒命名不同，但通常将50-100nm之间的微粒称为外泌体，>100nm的微粒称为微泡，以及其他术语如微团聚体，常用于文献之中。除非另有说明，术语“微粒”是对所有这些物种的总的称谓。微粒日益被认为是生理学、病理生理学和细胞凋亡环境中细胞间通讯的重要途径。不同类型微粒的内容物随细胞类型而变化：它们可以包括核蛋白、细胞溶质蛋白和膜蛋白，以及脂质和信使RNA和微RNA。关于来源细胞的类型的信息可以由对微粒内容物的检查中得出。因此，微粒代表了一种独特的实时进入细胞、组织和器官活动的窗口，否则的话难以采样。高比例的不良妊娠结局在妊娠早期的子宫胎盘界面具有其病理生理学起源(Romero等人,同上,2014；Gagnon,EurJObstetGynecolReprodBiol,110:S99-S107,2003；以及Masoura等人,J.ObstetGynaecol,32:609-616,2012)。用以评估相关组织和细胞群状态的能力可以预期用来预测即将发生的并发症。非常希望有非侵入性的工具，它能用以在以相当高的新生儿发病率为标志的孕龄(<34周)分娩的妊娠与在足月分娩的妊娠之间进行区分，假设能及时给予治疗剂，就可以预防早产或以其他方式延长妊娠。非常需要以下工具：其用于测定：怀孕受试者是否具有增加的早产风险，以及用于降低怀孕受试者早产风险。将本文引用的专利、专利申请、专利申请公开案、期刊文章和方案通过引用并入本文。
技术实现思路
本公开文本涉及自发性早产的蛋白质组生物标记物、足月分娩的蛋白质组生物标记物及其使用方法。具体而言，本公开文本提供了用于测定怀孕受试者是否处于增加的早产风险中的工具，以及用于降低怀孕受试者早产风险的工具。在一个方面，本文提供了一种用于评估怀孕受试者的自发性早产风险的方法，该方法包括：(a)从来自该怀孕受试者的血液样品制备富含微粒的部分；(b)对该部分中的一组微粒相关蛋白的定量测量值进行测定，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少三种蛋白质；并且(c)基于该测量值评估该自发性早产风险。在一些实施方案中，该组包括：由表4的蛋白质选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由表5的蛋白质选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由表7的三联体选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由表8的三联体选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由FETUB、CBPN、CHLE、C9、F13B、HEMO、IC1、PROS和TRFE组成的群组中选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由KLKB1、APOM、ITIH4、IC1、KNG1、C9、APOL1、PGRP2、THBG、FBLN1、ITIH2、VTDB、C8A、APOA1、HPT、和TRY3组成的群组中选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由AACT、KLKB1、APOM、ITIH4、IC1、KNG1、C9、F13B、APOL1、LCAT、PGRP2、FBLN1、ITIH2、CD5L、CBPN、VTDB、AMBP、C8A、ITIH1、TTHY、和APOA1组成的群组中选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由A1AG1、A2MG、CHLE、IC1、KLKB1、和TRFE组成的群组中选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由F13A、IC1、PGRP2、和THBG组成的群组中选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由AACT、A1AG1、A2MG、CBPN、CHLE、C9、F13B、HEMO、IC1、KLKB1、LCAT、PGRP2、PROS、TRFE、A2AP、A2GL、APOL1、APOM、C6、CPN2、FBLN1、ITIH4、KAIN、KNG1、MBL2、SEPP1、THBG、TRY3、AMBP、APOA1、CD5L、C8A、F13A、HPT、ITIH1、和ITIH2组成的群组中选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由AACT、A1AG1、A2MG、CBPN、CHLE、C9、F13B、HEMO、IC1、KLKB1、LCAT、PGRP2、PROS、和TRFE组成的群组中选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由A2AP、A2GL、APOL1、APOM、C6、CPN2、FBLN1、ITIH4、KAIN、KNG1、MBL2、SEPP1、THBG、和TRY3组成的群组中选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括：由AMBP、APOA1、CD5L、C8A、F13A、HPT、ITIH1、和ITIH2组成的群组中选出的至少三种蛋白质。在一些实施方案中，该组至少包括HEMO、KLKB1、和TRFE。在一些实施方案中，该组至少包括A2MG、HEMO、和MBL2。在一些实施方案中，该组至少包括KLKB1、IC1、和TRFE。在一些实施方案中，该组至少包括F13A、IC1、PGRP2、和THBG。在一些实施方案中，该组至少包括IC1、PGRP2、和THBG。在一些实施方案中，该组至少包括CHLE、FETUB、和PROS。在一些实施方案中，该组包括来自表1的至少4种蛋白质、来自表2的至少4种蛋白质、来自表4的至少4种蛋白质、或来自表5的至少4种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括来自表1的至少5种蛋白质、来自表2的至少5种蛋白质、来自表4的至少5种蛋白质、或来自表5的至少5种蛋白质。在一些实施方案中，该组包括来自表1的至少6种蛋白质、来自表2的至少6种蛋白质、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于评估怀孕受试者的自发性早产风险的方法，该方法包括：a.从来自该怀孕受试者的血液样品制备富含微粒的部分；b.对该部分中的一组微粒相关蛋白的定量测量值进行测定，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少三种蛋白质；并且c.基于该测量值评估该自发性早产风险。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.04 US 62/263,5491.一种用于评估怀孕受试者的自发性早产风险的方法，该方法包括：a.从来自该怀孕受试者的血液样品制备富含微粒的部分；b.对该部分中的一组微粒相关蛋白的定量测量值进行测定，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少三种蛋白质；并且c.基于该测量值评估该自发性早产风险。2.权利要求1的方法，其中该组包括：由表4或表5的蛋白质选出的至少三种蛋白质。3.权利要求1的方法，其中该组包括：由表7或表8的三联体选出的至少三种蛋白质。4.权利要求1的方法，其中该组包括：由FETUB、CBPN、CHLE、C9、F13B、HEMO、IC1、PROS和TRFE组成的群组选出的至少三种蛋白质。5.权利要求1的方法，其中该组包括：由KLKB1、APOM、ITIH4、IC1、KNG1、C9、APOL1、PGRP2、THBG、FBLN1、ITIH2、VTDB、C8A、APOA1、HPT、和TRY3组成的群组选出的至少三种蛋白质。6.权利要求1的方法，其中该组包括：由AACT、KLKB1、APOM、ITIH4、IC1、KNG1、C9、F13B、APOL1、LCAT、PGRP2、FBLN1、ITIH2、CD5L、CBPN、VTDB、AMBP、C8A、ITIH1、TTHY、和APOA1组成的群组选出的至少三种蛋白质。7.权利要求1的方法，其中该组包括：由A1AG1、A2MG、CHLE、IC1、KLKB1、和TRFE组成的群组选出的至少三种蛋白质。8.权利要求1的方法，其中该组包括：由F13A、IC1、PGRP2、和THBG组成的群组选出的至少三种蛋白质。9.权利要求1的方法，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少四种蛋白质。10.权利要求1的方法，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少五种蛋白质。11.权利要求1的方法，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少六种蛋白质。12.权利要求1的方法，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少七种蛋白质。13.权利要求1的方法，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少八种蛋白质。14.权利要求9至13中任一项的方法，其中该组包括：由FETUB、CBPN、CHLE、C9、F13B、HEMO、IC1、PROS和TRFE选出的若干种蛋白质。15.权利要求9至13中任一项的方法，其中该组包括：由KLKB1、APOM、ITIH4、IC1、KNG1、C9、APOL1、PGRP2、THBG、FBLN1、ITIH2、VTDB、C8A、APOA1、HPT、和TRY3选出的若干种蛋白质。16.权利要求9至13中任一项的方法，其中该组包括：由AACT、KLKB1、APOM、ITIH4、IC1、KNG1、C9、F13B、APOL1、LCAT、PGRP2、FBLN1、ITIH2、CD5L、CBPN、VTDB、AMBP、C8A、ITIH1、TTHY、和APOA1选出的若干种蛋白质。17.权利要求10的方法，其中该组包括：由A1AG1、A2MG、CHLE、IC1、KLKB1、和TRFE选出的至少五种蛋白质。18.权利要求11的方法，其中该组至少包括：A1AG1、A2MG、CHLE、IC1、KLKB1、和TRFE。19.权利要求10至13中任一项的方法，其中该组包括：表9所呈现的五至八联的多重标记物组中的任一个。20.权利要求1至19中任一项的方法，其中该怀孕受试者是初孕妇。21.权利要求1至20中任一项的方法，其中该样品取自：处于孕早期或孕中期的怀孕受试者。22.权利要求21的方法，其中该样品取自：妊娠10至12周之间或妊娠18至24周之间的怀孕受试者。23.权利要求1至22中任一项的方法，其中，对取自处于孕早期的怀孕受试者的第一样品进行该方法的步骤，对取自处于孕中期的怀孕受试者的第二样品重复该方法的步骤。24.权利要求23的方法，其中，第一样品取自：妊娠8至12周之间的怀孕受试者，而第二样品取自：妊娠18至24周之间的怀孕受试者。25.权利要求23或24的方法，其中在该第一样品和该第二样品中均测量至少五种标记物，并且其中测量了：由以下项选出的至少五种标记物：AACT、KLKB1、APOM、ITIH4、IC1、KNG1、C9、F13B、APOL1、LCAT、PGRP2、FBLN1、ITIH2、CD5L、CBPN、VTDB、AMBP、C8A、ITIH1、TTHY、和APOA1。26.权利要求1至25中任一项的方法，其中该血液样品是血清或血浆样品。27.权利要求1至26中任一项的方法，其中使用尺寸排阻色谱法制备该富含微粒的部分。28.权利要求27的方法，其中该尺寸排阻色谱法包括：用水洗脱。29.权利要求27至28中任一项的方法，其中该尺寸排阻色谱法是用琼脂糖固相和水性液相进行的。30.权利要求27至29中任一项的方法，其中该制备步骤还包括：使用超滤或反相色谱法。31.权利要求27至30中任一项的方法，其中该制备步骤还包括：在尺寸排阻色谱之前使用尿素进行变性，使用二硫苏糖醇进行还原，使用碘乙酰胺(iodoacetamine)进行烷基化，以及使用胰蛋白酶进行消化。32.权利要求1至31中任一项的方法，其中对定量测量值的测定包括：质谱法。33.权利要求32的方法，其中对定量测量值的测定包括：液相色谱法/质谱法(LC/MS)。34.权利要求33的方法，其中该质谱法包括多重反应监测，该液相色谱法使用一种包括乙腈的溶剂进行，和/或该检测步骤包括：为该蛋白质赋予索引保留时间。35.权利要求34的方法，其中该质谱法包括：多重反应监测。36.权利要求1至35中任一项的方法，其中该测定包括：执行一个分类规则，该规则将该受试者分类为：处于自发性早产风险中，并且其中对该分类规则的执行产生：与早产或足月分娩之间的相关性，其p值要小于至少0.05。37.权利要求1至35中任一项的方法，其中该测定包括：执行分类规则，该规则将该受试者分类为：处于自发性早产风险中，并且其中该分类规则的执行产生：接受者操作特征(ROC)曲线，其中该ROC曲线具有至少0.6的曲线下面积(AUC)。38.权利要求1至37中任一项的方法，其中该分类规则对受试者进行分类所依据的值还包括以下项中的至少一个：孕妇年龄、孕妇体重指数、初产妇、和怀孕期间吸烟。39.权利要求1至38中任一项的方法，其中该分类规则被配置为具有至少80％、至少90％或至少95％的特异性。40.权利要求1至39中任一项的方法，其中该方法还包括：由激素和皮质类固醇组成的群组中选出的治疗步骤。41.一种降低怀孕受试者的自发性早产风险和/或减少自发性早产的新生儿并发症的方法，该方法包括：a.根据权利要求1至40中任一项的方法评估怀孕受试者的自发性早产风险；并且b.以能有效降低自发性早产风险和/或减少自发性早产的新生儿并发症的量向受试者给予治疗剂。42.权利要求41的方法，其中该治疗剂由激素和皮质类固醇组成的群组中选出。43.权利要求41的方法，其中该治疗剂包括：阴道用孕酮或肠胃外17-α-羟孕酮己酸酯。44.一种方法，其包括：向表征为具有指示出增加的自发性早产风险的一组微粒相关蛋白的怀孕受试者给予：被设计为降低该自发性早产风险的有效量的治疗，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少三种蛋白质。45.权利要求44的方法，其中该治疗由激素和皮质类固醇组成的群组中选出。46.权利要求44的方法，其中该治疗包括阴道用孕酮或肠胃外17-α-羟孕酮己酸酯。47.一种方法，其包括：a.从来自该怀孕受试者的血液样品制备富含微粒的部分；并且b.对该部分中的一组微粒相关蛋白的定量测量值进行测定，其中该组包括：由表1或表2的蛋白质选出的至少三种蛋白质。48.权利要求44至47中任一项的方法，其中该组微粒相关蛋白包括：由表4或表5的蛋白质选出的至少三种蛋白质。49.权利要求44至47中任一项的方法，其中该组包括：由表7或表8的三联体选出的至少三种蛋白质。50.权利要求44至47中任一项的方法，其中该组包括：由FETUB、CBPN、CHLE、C9、F13B、HEMO、IC1、PROS和TRFE组成的群组中选出的至少三种蛋白质。51.权利要求44至47中任一项的方法，其中该组包括：由KLKB1、APOM、ITIH4、IC1、KNG1、C9、APOL1、PGRP2、THBG、FBLN1、ITIH2、VTDB、C8A、APOA1、HPT、和TRY3组成的群组中选出的至少三种蛋白质。52.权利要求44至47中任一项的方法，其中该组包括：由AACT、KLKB1、APOM、ITIH4、IC1、KNG1、C9、F13B、APOL1、LCAT、PGRP2、FBLN1、ITIH2、CD5L、CBPN、VTDB、AMBP、C8A、ITIH1、TTHY、和APOA1组成的群组中选出的至少三种蛋白质。53.权利要求44至47中任一项的方法，其中该组包括：由A1AG1、A2MG、CHLE、IC1、KLKB1、和TRFE组成的群组中选出的至少三种蛋白质。54.权利要求44至47中任一项的方法，其中该组包括：由F13A、IC1、PGRP2、和THBG组成的群组中选出的至少三种蛋白质。55.权利要求44至47中任一项所述的方法，其中该组包括：由AACT、A1AG1、A2MG、CBPN、CHLE、C9、F13B、HEMO、IC1、KLKB1、LCAT、PGRP2、PROS、TRFE、A2AP、A2GL、APOL1、APOM、C6、CPN2、FBLN1、ITIH4、KAIN、KNG1、MBL2、SEPP1、THBG、TRY3、AMBP、APOA1、CD5L、C8A、F13A、HPT、ITIH1、和ITIH2组成的群组中选出的至少三种蛋白质。56.权利要求44至47中任一项的方法，其中该组包括：由AACT、A1AG1、A2MG、CBPN、CHLE、C9、F13B、HEMO、IC1、KLKB1、LCAT、PGRP2、PROS、和TRFE组成的群组中选出的至少三种蛋白质。57.权利要求44至47中任一项的方法，其中该组包括：由A2AP、A2GL、APOL1、APOM、C6、CPN2、FBLN1、ITIH4、...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·D·布罗曼，Z·张，K·S·高迪，R·C·多斯，A·M·艾兹瑞恩，K·P·罗森布拉特，
申请(专利权)人：NX产前公司，
类型：发明
国别省市：美国,US