【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】链霉亲和素突变蛋白及其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年4月25日向欧洲专利局提交的欧洲专利申请16166773.8的优先权，所述专利申请的全部内容并入本文用于所有目的。专利
本专利技术涉及新的稳定的链霉亲和素突变蛋白，利用重组DNA技术产生该突变蛋白的方法，以及这些链霉亲和素突变蛋白在变性条件下用于分离、纯化和测定生物物质(比如重组蛋白)中的用途。因此，本专利技术还涉及具有固定于其上的本专利技术的链霉亲和素突变蛋白的固相以及编码本专利技术突变蛋白的核酸分子。本专利技术进一步涉及适用于检测、分离或纯化蛋白的试剂盒，其包含本专利技术的突变蛋白，例如固定于固相上的本专利技术的突变蛋白。
技术介绍
在大肠杆菌中许多重组蛋白的高水平表达导致形成高度聚集的蛋白，此类高度聚集的蛋白通常称为包涵体。包涵体通常在细胞质中形成。然而，当采用分泌载体时，包涵体也可在周质空间中形成。然而，包涵体不限于大肠杆菌；其也可以在例如酵母、哺乳动物和昆虫细胞中形成。若形成包涵体，则可以通过在纯化过程中使用比如6M盐酸胍(guanidiniumhydrochloride)(也称为盐酸胍...
【技术保护点】
1.一种突变蛋白，其选自链霉亲和素的突变蛋白，其中，所述突变蛋白(a)在参照野生型链霉亲和素的氨基酸序列(如SEQ ID NO：1所示)的序列位置127处具有Cys残基，和(b)在参照如SEQ ID NO：1所示野生型链霉亲和素的氨基酸序列的氨基酸位置115至121的区域中包含至少一个突变。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.25 EP 16166773.81.一种突变蛋白，其选自链霉亲和素的突变蛋白，其中，所述突变蛋白(a)在参照野生型链霉亲和素的氨基酸序列(如SEQIDNO：1所示)的序列位置127处具有Cys残基，和(b)在参照如SEQIDNO：1所示野生型链霉亲和素的氨基酸序列的氨基酸位置115至121的区域中包含至少一个突变。2.根据权利要求1所述的突变蛋白，其中，作为(b)中所述的突变，所述突变蛋白在野生型链霉亲和素的氨基酸位置117至121的区域中包含至少一个突变。3.根据权利要求1或2所述的突变蛋白，其中，在序列位置114处存在氨基酸残基，其中所述氨基酸残基是野生型苏氨酸或任意其它氨基酸。4.根据权利要求1至3中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置117处携带芳香族氨基酸残基。5.根据权利要求4所述的突变蛋白，其中，在序列位点117处的所述芳香族氨基酸残基为Trp、Tyr、His或Phe。6.根据权利要求1至3中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置117处携带带电荷的氨基酸残基。7.根据权利要求6所述的突变蛋白，其中，在序列位置117处的所述带电荷的氨基酸残基为Glu、Asp或Arg。8.根据权利要求1至3中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置117处携带亲水性残基。9.根据权利要求8所述的突变蛋白，其中，所述亲水性氨基酸残基为Asn、Gln、Leu、Met、Ser、Ala或Gly。10.根据权利要求3至9中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置120处携带小氨基酸残基或选自Met或Pro的氨基酸残基。11.根据权利要求10所述的突变蛋白，其中，在序列位置120处的所述小氨基酸残基为Ser、Ala或Gly。12.根据权利要求3至11中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置121处携带疏水性氨基酸残基。13.根据权利要求12所述的突变蛋白，其在序列位置121处携带芳香族氨基酸残基。14.根据权利要求12或13所述的突变蛋白，其中，在序列位置121处的所述氨基酸残基为Trp、Tyr或Phe。15.根据权利要求4至9中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置120处携带疏水性氨基酸残基。16.根据权利要求15所述的突变蛋白，其中，在序列位置120处的所述疏水性氨基酸残基为Leu、Ile、Met、Val、Tyr或Phe。17.根据权利要求15或16所述的突变蛋白，其在序列位置121处携带小氨基酸残基。18.根据权利要求17所述的突变蛋白，其中，在序列位置121处的所述小氨基酸残基为Gly、Ala、Ser或Gln。19.根据权利要求15或16所述的突变蛋白，其在序列位置121处携带疏水性氨基酸残基。20.根据权利要求19所述的突变蛋白，其中，在序列位置121处的所述疏水性氨基酸残基为Leu、Val、Ile、Trp、Tyr、Phe或Met。21.根据权利要求1至3中任一项所述的突变蛋白，其中，在位置118和/或119处的所述氨基酸残基缺失。22.根据权利要求21所述的突变蛋白，其在序列位置117处携带任意氨基酸残基。23.根据权利要求22所述的突变蛋白，其在序列位置120处携带大体积疏水性氨基酸残基。24.根据权利要求22或权利要求23所述的突变蛋白，其中，在序列位置120处的所述氨基酸残基为Phe、Tyr、Val或Trp。25.根据权利要求21至24中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置121处携带疏水性氨基酸残基。26.根据权利要求25所述的突变蛋白，其中，在序列位置121处的所述氨基酸残基为Met、Leu、Tyr或Phe。27.根据权利要求22至23中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置121处携带小亲水性氨基酸残基。28.根据权利要求27所述的突变蛋白，其中，所述小亲水性残基为具有羟基的氨基酸。29.根据权利要求27或28所述的突变蛋白，其中，所述氨基酸残基为Ser或Thr。30.根据权利要求22至24中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置121处携带Arg或Asp残基。31.根据权利要求1至3中任一项所述的突变蛋白，其在序列位置120处包含Gly残基(Gly120)。32.根据权利要求31所述的突变蛋白，其在序列位置121处携带Phe或Tyr残基。33.根据权利要求31或32所述的突变蛋白，其在序列位置117处携带Glu、Asp、Arg、His、Asn、Gln、Thr、Ser、Leu或Met残基。34.根据权利要求1至3中任一项所述的突变蛋白，其包含序列基序Aaa117Baa120Caa121，其中Aaa117可为Tyr、Phe、Arg、Trp或Gln，Baa120可为Tyr、Phe、Leu、Ile或Met，和Caa121可为任意氨基酸，其中Caa121优选为Leu、Ile、Met、Gly、Gly、Trp、Ser、Ala或Val残基。35.根据权利要求1至3中任一项所述的突变蛋白，其包含序列基序Daa117Eaa118Faa119Gaa120Haa121，其中Daa117和Haa121可为任意氨基酸，Eaa118和Faa119均缺失，和Gaa120可为Trp或Val，其中Daa117优选为His、Glu、Gln、Thr、Ala或Ile残基，并且其中Haa121优选为Tyr、Leu、Met或Arg残基。36.根据权利要求1至35中任一项所述的链霉亲和素突变蛋白，其中，所述突变蛋白在链霉亲和素的序列位置44至47处进一步包含至少一个突变。37.根据权利要求36所述的突变蛋白，其中，在序列位置44处的Glu被疏水性脂肪族氨基酸替代，在序列位置45处存在任意氨基酸，在序列位置46处存在疏水性脂肪族氨基酸，或/和在序列位置47处的Val被碱性氨基酸替代。38.根据权利要求37所述的突变蛋白，其中，在位置46处存在Ala。39.根据权利要求37或38所述的突变蛋白，其中，在位置47处存在Arg。40.根据权利要求37至39中任一项所述的突变蛋白，其中，所述序列Val44-Thr45-Ala46-Arg47(SEQIDNO：10)存在于氨基酸位置44至47的区域中。41.根据权利要求37至39中任一项所述的突变蛋白，其中，所述序列Ile44Gly45Ala46Arg47(SEQIDNO：11)存在于氨基酸位置44至47的区域中。42.根据前述权利要求中任一项所述的突变蛋白，其中，所述突变蛋白为最小链霉亲和素的突变蛋白，所述最小链霉亲和素N-端起始于野生型链霉亲和素的氨基酸10至16的区域中，C-端终止于野生型链霉亲和素的氨基酸133-142的区域中。43.根据权利要求1至42中任一项所述的突变蛋白，其中，所述突变蛋白在序列位置117至121处包含以下氨基酸序列Glu117Asn118Ala119Gly120Phe121(SEQIDNO：56)，Asp117Asn118Ala119Gly120Tyr121(SEQIDNO：57)，Glu117Asn118Ala119Gly120Tyr121(SEQIDNO：58)，Arg117Asn118Ala119Met120Met121(SEQIDNO：59)，Arg117Asn118Ala119Gly120phe121(SEQIDNO：60)，Ala117Asn118Ala119pro120Ala121(SEQIDNO：61)，Ala117Asn118Ala119Met120Val121(SEQIDNO：62)，Gln117Asn118Ala119Ser120Ala121(...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。