用于调节体重的组合物和方法技术

本公开内容提供在体重调节中起作用的蛋白质复合物，包括蛋白质复合物的三维结构。另外，蛋白质复合物及其组分，包括其三维结构，应用于鉴定可用来控制体重的药剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调节体重的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年3月4日提交的美国临时申请号62/304,141的优先权的权益，其完整内容通过引用并入本文。引言体重减轻与许多疾病和病症有关。例如，非刻意体重减轻与某些消耗病(例如恶病质)有关和/或可能与全身性炎症或急性炎症反应有关。恶病质，通常以体重减轻、肌肉萎缩、疲劳、衰弱和严重食欲不振为特征，可大大提高患有某些慢性疾病(例如癌症、慢性肾病、慢性阻塞性肺病、AIDS、结核病、慢性炎性疾病、脓毒症和全身性炎症的其它形式、例如肌肉萎缩等肌肉消耗和称为神经性厌食症的进食障碍)的患者的发病率。例如，在晚期癌症中，恶病质是普遍的(发生于最末期癌症患者中)，全部癌症相关死亡的大约四分之一由其造成。代谢过程(例如对肌肉起直接作用的代谢过程，减少其质量和/或形成)和食物摄入减少(例如导致脂肪和/或肌肉丢失的食物摄入减少)会促使恶病质的发生和/或发展。恶病质可通过名为前恶病质、恶病质和难治性恶病质的阶段发展。体重调节是一个复杂的多因素过程，可以调节体重和控制非刻意体重减轻的药剂，包括例如可以调节体重和控制非刻意体重减轻的药剂，以及鉴定这类药剂的方法都十分引人关注。专利技术概述本公开内容提供在体重调节中起作用的蛋白质复合物。本公开内容的蛋白质复合物的成分可用于调节体重。另外，蛋白质复合物及其成分应用于鉴定可用来控制体重的药剂。本文还提供用于治疗和/或预防非刻意体重减轻的方法。另外，还公开了用于降低GDF15水升高或有发生GDF15水平升高的风险的对象的GDF15活性的方法。在某些实施方案中，提供包括GDNF家族受体α样(GFRAL)蛋白和GDF15蛋白的分离的复合物。GFRAL蛋白可存在于经遗传修饰表达GFRAL的细胞的表面。在某些实施方案中，GFRAL蛋白从经遗传修饰表达GFRAL的细胞中纯化。GFRAL蛋白可固定在支持物上。在某些实施方案中，分离的复合物还可包括RET蛋白。在某些实施方案中，GDF15、GFRAL和RET蛋白的至少一种可与异源蛋白质融合。与GDF15、GFRAL和RET蛋白融合的异源蛋白质可独立选自IgFc、白蛋白和麦芽糖结合蛋白。在某些实施方案中，与GDF15、GFRAL和RET蛋白的至少一种融合的白蛋白可以是人血清白蛋白。在某些实施方案中，GDF15蛋白质和GFRAL蛋白的至少一种可被可检测地标记。在某些实施方案中，复合物是晶体。在某些方面，晶体具有本文所述的原子坐标。晶体可具有的晶胞尺寸，和/或具有约的分辨率。本文还提供包括分离的GDF15蛋白的组合物和经遗传修饰表达GFRAL蛋白的重组细胞。在某些实施方案中，重组细胞可经遗传修饰表达RET。在某些实施方案中，重组细胞可包括报道分子构建体(reporterconstruct)。报道分子构建体可包括与编码报道分子的核酸序列有效连接的启动子序列，其中启动子通过GDF15蛋白与GFRAL结合在RET激活时指导报道分子的表达。还公开了鉴定与GFRAL蛋白的胞外域结合的药剂的方法。所述方法可包括测定候选药剂与GFRAL的胞外域结合，其中结合GFRAL蛋白的候选药剂被鉴定为结合GFRAL蛋白的药剂，其中将候选药剂的结合与GDF15蛋白与GFRAL蛋白的胞外域的结合进行比较。在某些实施方案中，候选药剂以类似于GDF15蛋白的亲和力与GFRAL蛋白的胞外域结合。在另一个实施方案中，所述方法可包括构建具有由本文所述原子坐标界定的GDF15蛋白的复合物的三维结构；利用三维结构和建模方法鉴定与GFRAL蛋白结合的候选药剂；测定与GFRAL蛋白的胞外域结合的候选药剂；并将候选药剂的结合与GDF15蛋白与GFRAL蛋白的胞外域的结合进行比较，其中当候选药剂以类似于GDF15蛋白的亲和力结合时，候选药剂被鉴定为与GFRAL蛋白的胞外域结合的药剂。在某些情况下，GDF15可被可检测地标记。在示例性方法中，GFRAL可固定在支持物上或由经遗传修饰表达GFRAL的重组细胞表达。在某些情况下，重组细胞可经遗传修饰表达RET。在另一个实施方案中，重组细胞可包括包含与编码报道分子的核酸序列有效连接的启动子序列的报道分子构建体，其中启动子在RET激活时指导报道分子表达，且其中所述方法可包括测定报道分子的表达，其中与阴性对照相比报道分子的表达增加鉴定该药剂为与GFRAL结合并激活RET的药剂。在又一个另外的实施方案中，GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和GDF15蛋白之间的界面缔合(associatedwith)的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基。在该实施方案中，GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基可与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLY140、LEU148、ALA149、ALA146、VAL142、ASN145、VAL139、ALA135、GLU136、LEU152、LEU132、SER201、ALA204、LEU205、LYS153、ILE196、PRO197和GLN200。此外或备选，GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和RET蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基。在该实施方案中，GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基可与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLN246、ARG247、ARG250、LYS251、CYS252、ASP255、GLU256、ASN257、CYS258、ILE259、SER260、THR261、LEU262、THR297、GLN298和SER299。公开了经遗传修饰表达GFRAL蛋白和RET蛋白的重组细胞。在某些实例中，GFRAL蛋白或RET蛋白的至少一种可与异源蛋白质融合。在一些实例中，GFRAL可与异源蛋白质融合。在其它情况下，RET可与异源蛋白质融合。在一些情况下，GFRAL和RET两者可与异源蛋白质融合，所述异源蛋白质可独立选自IgFc、白蛋白和麦芽糖结合蛋白。在一些实施方案中，GFRAL蛋白或RET蛋白的至少一种可被可检测地标记。还提供鉴定调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的药剂的方法，所述方法可包括使候选药剂与经遗传修饰表达GFRAL的重组细胞接触，其中所述接触在GDF15存在下；测定GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平，其中与在候选药剂不存在时GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平相比在候选药剂存在时GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平的变化，将候选药剂鉴定为调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的药剂。在另一个实施方案中，所述方法包括构建具有由本文所述原子坐标界定的GDF15蛋白的复合物的三维结构；利用三维结构和建模方法鉴定调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白的结合的候选药剂；使候选药剂与经遗传修饰表达GFRAL蛋白的重组细胞接触，其中所述接触在GDF15蛋白存在下；测定GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平，其中与在候选药剂不存在时GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平相比在候选药剂存在时GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平的变化，将候选药剂鉴定为调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的药剂。在某些情况下，重组细胞可经遗传修饰表达RET。在某些实施方案中，重组细胞可包括包含与本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴定与GFRAL蛋白的胞外域结合的药剂的方法，所述方法包括：a)构建具有由表6的原子坐标界定的GDF15蛋白的复合物的三维结构；b)利用三维结构和建模方法鉴定与GFRAL蛋白结合的候选药剂；c)测定与GFRAL蛋白的胞外域结合的候选药剂；和d)将候选药剂的结合同GDF15蛋白与GFRAL蛋白的胞外域的结合进行比较，其中当所述候选药剂以类似于GDF15蛋白的亲和力结合时，候选药剂被鉴定为与GFRAL蛋白的胞外域结合的药剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.04 US 62/304,1411.一种鉴定与GFRAL蛋白的胞外域结合的药剂的方法，所述方法包括：a)构建具有由表6的原子坐标界定的GDF15蛋白的复合物的三维结构；b)利用三维结构和建模方法鉴定与GFRAL蛋白结合的候选药剂；c)测定与GFRAL蛋白的胞外域结合的候选药剂；和d)将候选药剂的结合同GDF15蛋白与GFRAL蛋白的胞外域的结合进行比较，其中当所述候选药剂以类似于GDF15蛋白的亲和力结合时，候选药剂被鉴定为与GFRAL蛋白的胞外域结合的药剂。2.权利要求1的方法，其中所述GDF15蛋白是可检测标记的。3.权利要求1或2的方法，其中所述GFRAL蛋白被固定在支持物上。4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述GFRAL蛋白由经遗传修饰表达GFRAL蛋白的重组细胞表达。5.权利要求4的方法，其中所述重组细胞经遗传修饰表达RET蛋白。6.权利要求4或5的方法，其中所述重组细胞包含含有与编码报道分子的核酸序列有效连接的启动子序列的报道分子构建体，其中所述启动子在RET蛋白活化时指导报道分子表达，和其中所述方法包括测定报道分子的表达，其中与阴性对照相比报道分子的表达增加鉴定药剂为与GFRAL蛋白结合并激活RET蛋白的药剂。7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和GDF15蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLY140、LEU148、ALA149、ALA146、VAL142、ASN145、VAL139、ALA135、GLU136、LEU152、LEU132、SER201、ALA204、LEU205、LYS153、ILE196、PRO197和GLN200。8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和RET蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLN246、ARG247、ARG250、LYS251、CYS252、ASP255、GLU256、ASN257、CYS258、ILE259、SER260、THR261、LEU262、THR297、GLN298和SER299。9.一种鉴定调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的药剂的方法，所述方法包括：a)使候选药剂与经遗传修饰表达GFRAL蛋白的重组细胞接触，其中所述GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和GDF15蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLY140、LEU148、ALA149、ALA146、VAL142、ASN145、VAL139、ALA135、GLU136、LEU152、LEU132、SER201、ALA204、LEU205、LYS153、ILE196、PRO197和GLN200，和其中所述接触在GDF15蛋白存在下；和b)测定GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平；其中与在候选药剂不存在时GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平相比在候选药剂存在时GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平的变化，将候选药剂鉴定为调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的药剂。10.权利要求9的方法，其中所述重组细胞经遗传修饰表达RET蛋白。11.权利要求9或10的方法，其中所述GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和RET蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLN246、ARG247、ARG250、LYS251、CYS252、ASP255、GLU256、ASN257、CYS258、ILE259、SER260、THR261、LEU262、THR297和GLN298。12.权利要求9-11中任一项的方法，其中所述重组细胞包含含有与编码报道分子的核酸序列有效连接的启动子序列的报道分子构建体，其中所述启动子在RET蛋白活化时指导报道分子表达，其中所述测定包括测定报道分子的表达，其中与在候选药剂不存在时的表达相比报道分子表达的变化将候选药剂鉴定为调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的药剂。13.权利要求9-12中任一项的方法，其中当所述药剂抑制GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合时，所述药剂被鉴定为GDF15蛋白-GFRAL蛋白结合的拮抗剂。14.权利要求9-12中任一项的方法，其中当所述药剂增加GDF15蛋白与GFRAL蛋白的结合时，所述药剂被鉴定为GDF15蛋白-GFRAL蛋白结合的激动剂。15.一种鉴定调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的药剂的方法，所述方法包括：a)构建具有由表6的原子坐标界定的GDF15蛋白的复合物的三维结构；b)利用三维结构和建模方法鉴定调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白的结合的候选药剂；c)使候选药剂与经遗传修饰表达GFRAL蛋白的重组细胞接触，其中所述接触在GDF15蛋白存在下；和d)测定GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平，其中与在候选药剂不存在时GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平相比在候选药剂存在时GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的水平的变化，将候选药剂鉴定为调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的药剂。16.权利要求15的方法，其中所述重组细胞经遗传修饰表达RET蛋白。17.权利要求15或16的方法，其中所述重组细胞包含含有与编码报道分子的核酸序列有效连接的启动子序列的报道分子构建体，其中所述启动子在RET蛋白活化时指导报道分子表达，其中所述测定包括测定报道分子的表达，其中与在候选药剂不存在时的表达相比报道分子表达的变化，将候选药剂鉴定为调节GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合的药剂。18.权利要求15-17中任一项的方法，其中当所述药剂抑制GDF15蛋白与GFRAL蛋白结合时，所述药剂被鉴定为GDF15-GFRAL结合的拮抗剂。19.权利要求15-17中任一项的方法，其中当所述药剂增加GDF15蛋白与GFRAL蛋白的结合时，所述药剂被鉴定为GDF15蛋白-GFRAL蛋白结合的激动剂。20.权利要求15-19中任一项的方法，其中由重组细胞表达的GFRAL蛋白包含GFRAL蛋白的胞外域。21.权利要求20的方法，其中所述GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和GDF15蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLY140、LEU148、ALA149、ALA146、VAL142、ASN145、VAL139、ALA135、GLU136、LEU152、LEU132、SER201、ALA204、LEU205、LYS153、ILE196、PRO197和GLN200。22.权利要求20或21的方法，其中所述GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和RET蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLN246、ARG247、ARG250、LYS251、CYS252、ASP255、GLU256、ASN257、CYS258、ILE259、SER260、THR261、LEU262、THR297和GLN298。23.一种鉴定调节包含胞外域的GFRAL蛋白与RET蛋白结合的药剂的方法，所述方法包括：a)使候选药剂与经遗传修饰表达GFRAL蛋白和RET蛋白的重组细胞接触，其中所述GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和RET蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLN246、ARG247、ARG250、LYS251、CYS252、ASP255、GLU256、ASN257、CYS258、ILE259、SER260、THR261、LEU262、THR297和GLN298；和b)测定GFRAL蛋白和RET蛋白的结合水平；其中与在候选药剂不存在时GFRAL蛋白和RET蛋白的结合水平相比，在候选药剂存在时GFRAL蛋白和RET蛋白的结合水平的变化将候选药剂鉴定为调节GFRAL蛋白与RET蛋白的结合的药剂。24.一种鉴定调节GFRAL蛋白与RET蛋白结合的药剂的方法，所述方法包括：a)构建具有由表6的原子坐标界定的GDF15蛋白的复合物的三维结构；b)利用三维结构和建模方法鉴定调节GFRAL蛋白与RET蛋白的结合的候选药剂；c)使候选药剂与经遗传修饰表达GFRAL蛋白和RET蛋白的重组细胞接触；和d)测定GFRAL蛋白和RET蛋白的结合水平；其中与在候选药剂不存在时GFRAL蛋白和RET蛋白的结合水平相比在候选药剂存在时GFRAL蛋白和RET蛋白的结合水平的变化将候选药剂鉴定为调节GFRAL蛋白与RET蛋白的结合的药剂。25.权利要求24的方法，其中由重组细胞表达的GFRAL蛋白包含GFRAL蛋白的胞外域。26.权利要求25的方法，其中所述GFRAL蛋白的胞外域包含与在GFRAL蛋白和RET蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLN246、ARG247、ARG250、LYS251、CYS252、ASP255、GLU256、ASN257、CYS258、ILE259、SER260、THR261、LEU262、THR297和GLN298。27.一种治疗对象的非刻意体重减轻或预防有非刻意体重减轻风险的对象的非刻意体重减轻的方法，所述方法包括：给予对象以下之一：a)结合GFRAL蛋白的胞外域的药剂，其中所述GFRAL-ECD包含(i)与在GFRAL蛋白和GDF15蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLY140、LEU148、ALA149、ALA146、VAL142、ASN145、VAL139、ALA135、GLU136、LEU152、LEU132、SER201、ALA204、LEU205、LYS153、ILE196、PRO197和GLN200，和/或(ii)与在GFRAL蛋白和RET蛋白之间的界面缔合的GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基，其中所述GFRAL结构域的一个或多个氨基酸残基与选自以下位置的氨基酸残基一致：SEQIDNO:9的GLN246、ARG247、ARG250、LYS251、CYS252、ASP255、GLU256、ASN257、CYS258、ILE259、SER260、THR261、LEU262、THR297和GLN298；和b)GFRAL蛋白的胞外域(GFRAL-ECD)，其中以有效量给予所述药剂或GFRAL-ECD以治疗或预防对象的非刻意体重减轻的发生。28.权利要求27的方法，其中给予所述GFRAL-ECD。29.权利要求28的方法，其中所述GFRAL-ECD与异源蛋白质融合。30.权利要求29的方法，其中所述异源蛋白质独立选自IgFc、白...

【专利技术属性】
技术研发人员：许哲源，陈宇，苏珊妮·克里斯汀·克劳利，田晖，沈文彦，唐杰，杰瑞德·马丁·希格比，
申请(专利权)人：恩格姆生物制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US