荷叶醇提物在制备抑制癌症转移药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了荷叶醇提物在制备抑制癌症转移药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术以患转移性癌症的小鼠为实验对象，发现相较于喂食正常饲料的对照组，喂食含荷叶醇提物的饲料的患转移性癌症的小鼠体重明显下降，肺部转移灶数降低45％左右，转移灶处肿瘤总瘤重下降50％左右。本发明专利技术首次提出了荷叶醇提物可以用于有效地抑制癌症转移，从而为治疗转移性肿瘤开辟了新的道路，对药食同源两用资源的开发具有重要意义，而且实现了活性植物资源的高值转化，促进了农产品的精深加工利用。

【技术实现步骤摘要】
荷叶醇提物在制备抑制癌症转移药物中的应用
本专利技术涉及荷叶醇提物在制备抑制癌症转移药物中的应用，属于生物医药

技术介绍
荷叶为睡莲科植物莲(NelumbonuciferaGaertn)的叶，又名莲叶、藕叶，在我国南北方均有种植，是我国传统的中药材之一，属国家卫生部公布的既是食品又是药品的植物。国内外对荷叶的药理药效研究表明，荷叶具有调脂减肥、抗氧化、抑菌、降压和保护血管内皮等的功能，但其在癌症领域的应用还未见报道。癌症是由于机体细胞失去正常调控，过度增殖而引起的疾病。目前，在发达国家中已成为主要死亡原因之一，而癌症发展的最终结果是出现全身的系统性癌细胞转移，最终导致癌症患者死亡。在超过90％的病例中，癌症相关死亡率是由于远处转移的形成。与原发部位的大部分癌细胞相比，转移细胞具有更强的逃避原发肿瘤、侵入远处器官和适应新的微环境条件的能力。此外，转移细胞通常对抗癌疗法更具抗性，这使得它们更难以治疗。虽然目前对复发转移患者实施手术、放化疗等标准化综合治疗手段以及采取靶向治疗和免疫治疗等新的方案取得了一定疗效，但由于其特殊性和复杂性以及基础研究、临床应用研究及医疗技术水平的限制，对于如何预防患者复发转移，尚缺乏治疗策略。因此，寻找无毒副作用且能有效阻断癌细胞转移的药食同源食品已成为癌症治疗研究的热点之一。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供荷叶醇提物在制备抑制或者辅助抑制癌症转移的药物或药物组合物中的应用，所述药物为荷叶醇提物，或者所述药物或药物组合物以荷叶醇提物为有效成分。在本专利技术的一种实施方式中，所述癌症包括但不限于乳腺癌。在本专利技术的一种实施方式中，所述药物或药物组合物中包括但不限于荷叶醇提物和药学上可接受的载体。在本专利技术的一种实施方式中，在药学上可接受的载体是一种或多种在药学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂或矫味剂的载体。在本专利技术的一种实施方式中，所述药物或药物组合物的剂型包括但不限于颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂和口服液。在本专利技术的一种实施方式中，荷叶醇提物的制备方法包括以下步骤：(1)将以克计的荷叶粉与以毫升计的有机醇水溶液按照比例1:15-25混合均匀，所述有机醇水溶液的体积分数为70％-85％；(2)在35-39℃下，150-250rpm，提取10-15小时，过滤分离，收集滤液；(3)将收集到的滤液进行蒸发浓缩至干，得到所述的荷叶醇提物。在本专利技术的一种实施方式中，所述有机醇包括乙醇、丙醇、丁醇。在本专利技术的一种实施方式中，所述的蒸发浓缩包括在旋转蒸发仪中，在压力400-600毫米汞柱与旋转速度50-160转/分的条件下旋转蒸发浓缩。本专利技术的第二个目的是提供荷叶醇提物在制备具有抑制癌症转移功效的食品或保健品中的应用。本专利技术的第三个目的是提供荷叶醇提物在制备抑制癌症相关蛋白p-samd3和p-Erk1/2表达量提高的药品、食品或保健品中的应用本专利技术的第四个目的是提供一种用于抑制或辅助抑制癌症转移的药物或药物组合物，所述药物或药物组合物以荷叶醇提物为有效成分。本专利技术制备得到的荷叶醇提物在细胞划痕实验中可以使乳腺癌细胞转移率下降87.5％左右。以患转移性癌症的小鼠为实验对象，相较于喂食正常饲料的对照组，喂食含荷叶醇提物的饲料的小鼠体重明显下降，肺部转移灶数降低45％左右，转移灶处肿瘤总瘤重下降50％左右。本专利技术首次提出了荷叶醇提物可以用于有效地抑制癌症转移灶个数以及转移灶处肿瘤大小，对癌症转移具有显著的治疗作用，从而为治疗转移性肿瘤开辟了新的道路，对药食同源两用资源的开发具有重要意义，而且实现了活性植物资源的高值转化，促进了农产品的精深加工利用。所述具有抑制癌症转移的荷叶醇提物，可广泛应用于食品、保健品及医药等领域，具有显著的社会效益和经济效益。附图说明图1为不同浓度荷叶醇提物对癌细胞形态及毒性的影响：(a)不同浓度荷叶醇提物对癌细胞形态的影响；(b)不同浓度荷叶醇提物对癌细胞毒性的影响；图2为不同浓度荷叶醇提物对癌细胞转移率的影响：(a)不同浓度荷叶醇提物对癌细胞转移率影响的光镜图；(b)不同浓度荷叶醇提物对癌细胞转移率影响的统计分析图；图3为不同浓度荷叶醇提物对癌细胞中的catalase，SOD1蛋白表达及H2O2的影响：(a)不同浓度荷叶醇提物对癌细胞中catalase，SOD1蛋白表达的影响；(b)不同浓度荷叶醇提物对癌细胞中catalase蛋白表达影响的统计分析图；(c)100μg/mlLAE处理后癌细胞中H2O2含量变化图；图4为不同浓度荷叶醇提物对癌细胞中p-smad3，p-Erk1/2蛋白表达的影响；图5为喂食荷叶醇提物后，小鼠肺部组织形态、体重、转移灶个数及转移灶处肿瘤总瘤重变化图：(a)喂食荷叶醇提物后，小鼠肺部组织形态变化图；(b)喂食荷叶醇提物后，小鼠体重变化图；(c)喂食荷叶醇提物后，小鼠转移灶个数变化图；(d)喂食荷叶醇提物后，小鼠转移灶处肿瘤总瘤重变化图。具体实施方式通过下述实施例将能够更好地理解本专利技术，以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如《分子克隆实验指南》中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1：制备荷叶醇提物按照以克计荷叶粉与以毫升计乙醇水溶液的比1：15，让干燥荷叶粉与浓度为以体积计70％乙醇水溶液混合均匀，然后在温度35℃与转速200rpm的条件下震荡提取12小时，过滤分离，得到的残渣再以同样方式重复提取2次，提余残渣弃去，滤液合并；合并的滤液在由上海越众仪器有限公司以商品型号为RE-52销售的旋转蒸发仪中在压力400毫米汞柱与旋转速度50转/分的条件下进行旋转蒸发浓缩至干，得到所述的荷叶醇提物。实施例2：CCK8细胞增殖-毒性实验将得到的荷叶醇提物溶解于DMSO中，分别制成10、25、50、100、250μg/ml不同浓度的荷叶醇提物用于细胞实验。实验组设置：不同浓度的荷叶醇提物(分别为10、25、50、100、250μg/ml的荷叶醇提物)；对照组：加入等体积的二甲基亚砜(DMSO)。用对数生长期的MDA-MB-231乳腺癌细胞分别制成细胞悬液后，分别均匀接种至96孔板中，接种密度为每孔4000-5000个细胞。12h后细胞贴壁，按照设置的对照组与实验组进行加药刺激，每个浓度梯度设置6个复孔。48h后每孔分别加入10μlCCK8，37℃培养箱内显色作用2h，用酶标仪检测450nm处的吸光值，根据吸光值计算荷叶醇提物对癌细胞增殖活性的影响。图1为不同浓度荷叶醇提物对MDA-MB-231乳腺癌细胞形态及毒性的影响，从细胞形态图结果可见，低浓度的荷叶醇提物对癌细胞形态均无明显影响，且从CCK8增殖结果可以看出，低浓度的荷叶醇提物未大幅抑制癌细胞的活性，说明荷叶醇提物对MDA-MB-231乳腺癌细胞无明显毒性。实施例3：细胞划痕实验接种细胞于六孔板中，待细胞长满后，用200微升容量的移液器枪头在每个六孔板的正中间位置划一条粗细均匀的划痕，并用PBS清洗两遍，每孔加入无血清培养基2ml，并加入相应浓度的荷叶醇提物，培养0，24，36h后于显微镜下拍照记录结果。图2为50μg/ml和250μg/ml的荷叶醇提物对癌细胞转移率的影响，C为对照组。可以看到，250本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.荷叶醇提物在制备抑制或者辅助抑制癌症转移的药物或药物组合物中的应用，其特征在于，所述药物为荷叶醇提物，或者所述药物或药物组合为以荷叶醇提物为有效成分。

【技术特征摘要】
1.荷叶醇提物在制备抑制或者辅助抑制癌症转移的药物或药物组合物中的应用，其特征在于，所述药物为荷叶醇提物，或者所述药物或药物组合为以荷叶醇提物为有效成分。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述癌症包括但不限于乳腺癌。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物或药物组合物中包括荷叶醇提物和药学上可接受的载体。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在药学上可接受的载体是一种或多种在药学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂或矫味剂的载体。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物或药物组合物的剂型包括但不限于颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂和口服液。6.根据权利要求1-5任一所述的应用，其特征在于，荷叶醇提物的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：何钊，童跃林，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32