一种可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法技术

本发明专利技术涉及植物遗传育种技术领域，具体涉及一种可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法；通过设计加入DNAzyme标记的检测大豆皂苷合成酶基因的特异性探针，用正反引物对大豆皂苷合成酶基因进行扩增，利用核酸外切酶特异性地识别并酶切大豆皂苷合成酶基因，形成单链目标片段，再与探针发生杂交链式反应，将探针中的DNAzyme标记释放，最后通过显色反应判断样品中的皂苷类型；本发明专利技术方法快速、准确、高效且廉价，可应用于各种代谢产物类型的基因检测体系，特别是对作物品质育种和特异性材料的筛选均有很高的实用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法
本专利技术涉及植物遗传育种
，具体涉及一种涉及杂交链式反应(HybridizationChainReaction，HCR)的可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法。
技术介绍
大豆皂苷是大豆生长过程中一类重要的次生代谢产物之一，具有许多对人体有益的生理功能。大豆皂苷种类繁多、结构复杂，根据大豆皂苷苷元的不同目前把发现的54种大豆皂苷分为七类：A类、B类、DDMP类、E类、H类、I类和J类皂苷。胚和子叶中A类皂苷分别占总皂苷含量的68.78%、43.17%。A类大豆皂苷分为Aa、Ab和Ao三个系列。现有的分析鉴定A类大豆皂苷的方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用技术和制备型高效液相色谱法。这些方法各有不足之处，薄层色谱法鉴定A类皂苷种类准确度不高，高效液相色谱法和高效液相色谱-质谱联用技术准确度高，但是其仪器价格昂贵，运行成本高，运行时间长，难以满足作物育种中大量材料的检测。因此建立一种灵敏度高、准确性好、快速简单及检测成本低的方法对大豆中皂苷种类研究尤为重要。Aa、Ab类型大豆皂苷分别由是由GmSg-1位点的共显性等位基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法的PCR扩增引物序列，其特征在于，所述引物序列为：F2：5'‑ pATCCCACGACTTGCCTTCA‑3'；R2：5'‑ CCCGTGTCGGAATGGAGT‑3'。

【技术特征摘要】
1.一种用于可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法的PCR扩增引物序列，其特征在于，所述引物序列为：F2：5'-pATCCCACGACTTGCCTTCA-3'；R2：5'-CCCGTGTCGGAATGGAGT-3'。2.一种用于可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法的探针，其特征在于，用于检测Aa型大豆皂苷的探针为：GAa1:5'-CCTCTTCGCCGTCAGCGCCATGAAGTCCGTGGGTAGGGCGGGTTGGGAAATTACCCACCGACTTCATGGCGCTGACGGCG-3'；GAa2:5'-CGGACTTCATGGCGCTGACGGCGAAGAGGCGCCGTCAGCGCCATGAAGTCGGTGGGTA-3'；用于检测Ab型大豆皂苷的探针为：GAb1:5'-CTCTTCTCCGGCGCCGCCATGAAGTGCGTGGGTAGGGCGGGTTGGGAAATTACCCACCCACTTCATGGCGGCGCCGGAG-3'；GAb2:5'-GCACTTCATGGCGGCGCCGGAGAAGAGGCTCCGGCGCCGCCATGAAGTGGGTGGGTA-3'。3.一种可视化鉴定大豆A类皂苷类型的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、从待鉴定的大豆材料中提取大豆基因组DNA；b、以步骤a中所提取的大豆基因组DNA为模板采用如权利要求1所述的扩增引物进行PCR扩增反应，所述PCR反应条件为：95℃5min；95℃1min，6℃45s，72℃8s，35个循环；72℃10min，15℃保存，扩增出92bp的目标序列；c、酶切反应，酶切体系中加入LambdaExonuclease和步骤b所得的PCR产物；反应条件为：37℃90min；85℃15min；酶切反应切掉目标片段的互补链，得到的酶切产物为单链目标片段；d、HCR反应，所述HCR反应体系为：体系中加入如权利要求2所述的探针GAa1/GAa2或GAb1/GAb2，HCl-NaCl，步骤c的酶切产物，反...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳爱琴，杜维俊，赵晋忠，赵巧玲，王敏，高春燕，张永坡，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：山西,14