快速检测转基因产品的试纸条制造技术

本发明专利技术公开了一种快速检测转基因产品的试纸条，其顺次包括：样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜检测区和吸水垫；金标结合垫上涂有胶体金标记的地高辛抗体；硝酸纤维素膜检测区设置有检测线和质控线；所述检测线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被链亲和素形成；所述质控线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被羊抗鼠IgG形成；待检测产品的反应产物被滴到样品垫上后通过毛细管作用，向着吸水垫的方向层析。

【技术实现步骤摘要】
快速检测转基因产品的试纸条
本专利技术属于核酸检测
，具体地涉及一种快速检测转基因产品的试纸条。
技术介绍
一般转基因检测分为核酸水平检测和蛋白水平检测。蛋白水平检测(现有胶体金蛋白试纸技术)检测便捷，但是由于有些转基因样品蛋白未能表达，且蛋白容易降解，因此有可能待测样品内蛋白表未达或者待测样品储存条件造成降解，所以造成假阴性结果(阳性未检出)。蛋白试纸条方法具有快速、简便、经济的优点，无需任何特殊仪器设备，但由于其检测灵敏度较低、适用范围窄，主要适用于转基因植物的大田和原材料的快速初筛。PCR方法是基于基因水平的检测，可检出存在于样品基因组内的待测基因而不受基因表达情况的影响。但是PCR方法对实验设施和条件要求较高，且比较费时。目前普通PCR检测方法是我国转基因植物检测的核心技术，但该方法对实验条件要求较高，对实验区要求具有前PCR区、样品制备区、核酸提取纯化区、PCR体系配置区、PCR反应区、电泳分析区等功能区，需要生物安全柜、高压灭菌锅、组织粉碎机、恒温水浴锅、高速冷冻离心机、核酸定量检测仪器、生物安全柜、PCR扩增仪、涡旋混合仪、电泳系统、凝胶成像系统等。
技术实现思路
鉴于上述问题，本专利技术旨在提出一种析快速检测转基因产品的试纸条，其仅需使用较少设备就能快速地以PCR方法进行转基因产品检测。本专利技术的快速检测转基因产品的试纸条，其顺次包括：样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜检测区和吸水垫；金标结合垫上涂有胶体金标记的地高辛抗体；硝酸纤维素膜检测区设置有检测线和质控线；所述检测线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被链亲和素形成；所述质控线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被羊抗鼠IgG形成；待检测产品的反应产物被滴到样品垫上后通过毛细管作用，向着吸水垫的方向层析。优选地，所述试纸条设置有外壳，所述外壳在对应于样品垫的位置形成有凹孔；所述外壳在对应于检测线和质控线的位置形成有观察窗。优选地，所述凹孔形成为喇叭口状。优选地，所述待检测的样本经过如下步骤后形成反应产物：步骤1)样本处理：取30mg待测粉状物样本，加500μlddH2O，使用移液枪多次吹吸混匀，静置5min得到待测样本备用；步骤2)DNA一管法提取步骤：取5μl核酸释放剂，加入PCR反应管中；取所述待测样本5μl加入对应的PCR反应管中，并用移液器在管底吹打混匀10次；每个PCR反应管中加30μl无菌石蜡油；将PCR反应管放置在PCR仪中进行裂解，得到裂解样品；步骤3)试样PCR反应：在PCR反应管中依次加入反应试剂、混匀，加入到所述裂解样品中；将PCR反应管放到离心机上，500g-1000g离心10s，然后取出PCR反应管，放入PCR仪中进行扩增得到反应产物。优选地，所述步骤2)中的裂解程序为将样品置于95℃反应10min后，再置于4℃冷却5min。优选地，所述步骤3)中的PCR反应体系总体积为35μl，其中：ddH2O为27.4μl，10×PCRBuffer为5μl，dudNTP混合液为1μl；10μmol/L上游引物为0.3μl，10μmol/L下游引物为0.3μl，TaqDNA聚合酶为1μl；其中10×PCRBuffer含有0.1％体积的DMSO、3～5％体积的BSA、1％～2％体积的PEG-6000、100mmol/LKCl、1mmol/LMgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。优选地，所述上游引物序列为地高辛标记；所述下游引物序列为生物素标记。优选地，所述步骤3)中的PCR扩增程序如下：50℃反应2分钟后升温到95℃反应5分钟，然后进入32次循环，每次循环中在95℃反应15sec，然后在60℃反应45sec。优选地，所述核酸释放剂含有120～200mM/L的KCl、1％～5％体积的TritonX-100、5～10mg/ml的蛋白酶K、5-10μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH。优选地，在所述外壳上对应于所述凹孔形成有装有超纯水的水囊，水囊破后，超纯水滴入样品垫，以加快层析。通过常规PCR扩增技术与PCR胶体金层析技术相结合，可以快速简便对转基因样品进行检测，结果可以通过直接肉眼观察胶体金卡条显色状况进行判别，结果易于判别分析。附图说明图1为本专利技术的PCR扩增产物核酸层析快速检测阳性结果示意图；图2为本专利技术的PCR扩增产物核酸层析快速检测阴性结果示意图；图3为快速检测转基因产品的试纸条层析示意图；图4为Npt引物胶体金检测结果；释放剂为120mM/L的KCl、3％体积的TritonX-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCRBuffer含有0.1％体积的DMSO、3％体积的BSA、1％体积的PEG-6000、100mmol/LKCl、1mmol/LMgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。图5为Pmi引物胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的TritonX-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCRBuffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、1％体积的PEG-6000、100mmol/LKCl、1mmol/LMgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。图6为T-CaMV35S引物胶体金检测结果；释放剂为200mM/L的KCl、3％体积的TritonX-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCRBuffer含有0.1％体积的DMSO、5％体积的BSA、1％体积的PEG-6000、100mmol/LKCl、1mmol/LMgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。图7为NOS引物胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、1％体积的TritonX-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCRBuffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/LKCl、1mmol/LMgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。图8为Mir604核酸Pmi胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、5％体积的TritonX-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCRBuffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/LKCl、1mmol/LMgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。图9为Bt11核酸BtF3/R3胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的TritonX-100、5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCRBuffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/LKCl、1mmol/LMgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。图10为Bt11核酸Bt-CryF/R胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测转基因产品的试纸条，其顺次包括：样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜检测区和吸水垫；金标结合垫上涂有胶体金标记的地高辛抗体；硝酸纤维素膜检测区设置有检测线和质控线；所述检测线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被链亲和素形成；所述质控线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被羊抗鼠IgG形成；待检测产品的反应产物被滴到样品垫上后通过毛细管作用，向着吸水垫的方向层析。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测转基因产品的试纸条，其顺次包括：样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜检测区和吸水垫；金标结合垫上涂有胶体金标记的地高辛抗体；硝酸纤维素膜检测区设置有检测线和质控线；所述检测线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被链亲和素形成；所述质控线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被羊抗鼠IgG形成；待检测产品的反应产物被滴到样品垫上后通过毛细管作用，向着吸水垫的方向层析。2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述试纸条设置有外壳，所述外壳在对应于样品垫的位置形成有凹孔；所述外壳在对应于检测线和质控线的位置形成有观察窗。3.如权利要求2所述的试纸条，其特征在于：所述凹孔形成为喇叭口状。4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述待检测的样本经过如下步骤后形成反应产物：步骤1)样本处理：取30mg待测粉状物样本，加500μlddH2O，使用移液枪多次吹吸混匀，静置5min得到待测样本备用；步骤2)DNA一管法提取步骤：取5μl核酸释放剂，加入PCR反应管中；取所述待测样本5μl加入对应的PCR反应管中，并用移液器在管底吹打混匀10次；每个PCR反应管中加30μl无菌石蜡油；将PCR反应管放置在PCR仪中进行裂解，得到裂解样品；步骤3)试样PCR反应：在PCR反应管中依次加入反应试剂、混匀，加入到所述裂解样品中；将PCR反应管放到离心机上，500g-1000g离心10s，然后取出PCR反应管，放入PCR仪中进行扩增得到反应产物。5.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雨峰，陈立柱，杨海侠，刘亚，赵久然，任雯，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，宝瑞源生物技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11