黄瓜CsMLO1基因及其沉默表达载体构建方法、应用技术

本发明专利技术属于分子生物学和生物技术领域，具体涉及一种黄瓜CsMLO1基因及其沉默表达载体构建方法、应用，黄瓜响应棒孢叶斑病调控途径中的CsMLO1基因的全长编码区序列如序列表SEQ ID NO.1所示；氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术还提供将黄瓜CsMLO1基因特异片段插入沉默表达载体pTRV2的构建方法，将构建的植物沉默表达载体经农杆菌转化到黄瓜子叶，获得转基因黄瓜植株并开展抗病性鉴定，结果表明该基因是黄瓜与棒孢叶斑病互作中的负调控因子。本发明专利技术为利用基因工程技术，为全面揭示黄瓜CsMLO1基因功能研究提供了技术手段与理论依据，具有很大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
黄瓜CsMLO1基因及其沉默表达载体构建方法、应用
本专利技术属于分子生物学和生物
，具体涉及一种黄瓜CsMLO1基因(Cucsa.207280)及其沉默表达载体构建方法、应用。
技术介绍
黄瓜(Cucumissativus)是我国北方设施栽培的主要蔬菜作物之一，其产量和品质严重受到非生物胁迫的影响。黄瓜棒孢叶斑病是一种世界性的真菌病害，由致病真菌多主棒孢(Corynesporacassiicola)引起；目前，该病害的研究主要集中在生物防治和化学防治等方面，在黄瓜对棒孢叶斑病的抗性机制研究甚少。MLO(MildewResistanceLocusO)蛋白是植物中特有的蛋白，其研究表明MLO家族成员作为感病基因，易受白粉菌的侵染，而隐性突变基因mlo却被赋予广谱抗性(Shirasuetal.,1999；Chenetal.,2006；Kimetal.,2002)。目前，mlo抗病路径与白粉菌以外的其它病原菌的关系也受到越来越多的关注。条形柄锈菌(Pucciniastriiformisf.sp.tritici)是引起小麦条锈病的专化真菌，主要危害小麦叶部。研究通过病毒诱导基因沉默(v本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黄瓜CsMLO1基因，其特征在于，其编码区序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种黄瓜CsMLO1基因，其特征在于，其编码区序列如SEQIDNO.1所示。2.用于扩增如权利要求1所述的黄瓜CsMLO1基因的引物，其特征在于，其核苷酸序列如下：CsMLO1-F：5’-ATGGCGGGGGCAGCCGGTGG-3’CsMLO1-R：5’-TTCAACTCTATCAAATGAAA-3’。3.利用如权利要求2所述的引物对黄瓜CsMLO1基因进行扩增的方法，其特征在于，以黄瓜叶片为材料，利用RNApreppure植物总RNA提取试剂盒的方法提取总RNA，反转录合成cDNA，设计如权利要求2所述的引物；以反转录的cDNA为模版，进行聚合链式PCR反应，回收PCR产物，获得1749bp目的片段，将纯化产物进行测序，得到序列如SEQIDNO.1所示的黄瓜CsMLO1基因。4.如权利要求1所述的黄瓜CsMLO1基因编码得到的蛋白质，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。5.如权利要求1所述的黄瓜CsMLO1基因的特异性区域引物，其特征在于，比对黄瓜MLO家族基因序列，选取特异性区域402bp设计引物,其核苷酸序列如下：TRV-CsMLO1-F:5’-gtgagtaaggttaccgaattcGTGGCAGAGGCCCTTCGCAAC-3’TRV-CsMLO1-R:5’-ggcct...

【专利技术属性】
技术研发人员：范海延，于广超，崔娜，于洋，王翔宇，孟祥南，陈秋敏，赵珺玥，杨云，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21