一种提取姬松茸总DNA的试剂及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种提取姬松茸总DNA的试剂及应用。该方法与传统DNA提取方法相比如CTAB法、SDS法、碱裂解法和常规试剂盒相比，具有样品用量少、DNA样品纯度高、完整性好、操作简单等优点，整个提取过程只需15min，且提取过程中无有毒试剂，保证了研究人员免于有毒试剂的伤害。实验结果表明，本发明专利技术适用于姬松茸等多种真菌总DNA的提取，可直接用于PCR、Real‑Time PCR、分子标记等下游分子生物学试验。

【技术实现步骤摘要】
一种提取姬松茸总DNA的试剂及应用
本专利技术属于基因工程技术分子生物学领域，尤其涉及一种提取姬松茸总DNA的试剂及应用。
技术介绍
DNA是生命体中遗传信息的载体，包含了生物体的遗传性状。高质量、高纯度的总DNA是保证开展PCR扩增、限制性内切酶酶切、遗传图谱分析、分子杂交、遗传多样性分析以及基因组学等分子生物学研究的首要条件。因此，高效、快速制备高纯度、完整性好的总DNA样品显得极为重要。目前，传统制备真菌总DNA的方法包括CTAB法、SDS法、碱裂解法和常规试剂盒方法等，CTAB法和SDS法采用离子型表面活性剂用于裂解真菌细胞，使基因组释放出来，再通过苯酚/氯仿/异戊醇等的多次抽提使蛋白质等沉淀于有机试剂中，最后经过异丙醇或者乙醇沉淀得到纯度高、完整性好的DNA分子。在这种方法中存在反复离心、沉淀、等待的工序，操作繁琐且耗时长，其提取过程需要2-3h；且药品中苯酚、氯仿和异戊醇等有机溶剂具有毒性，对操作人员可能造成一定伤害；其次可能导致有机溶剂残留在总DNA样品中从而造成下游试验无法顺利进行。常规试剂盒方法是在CTAB法、SDS法等常规方法等基础上结合DNA吸附柱进行优化，解决本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提取姬松茸总DNA的试剂，其特征在于，包括以下四种试剂：（1）平衡液，包含以下成分：1.5wt%的 Na2SiO3·9H2O，1wt%的 KOH；（2）裂解液，包含以下成分：5.0M的盐酸胍，30%v/v的异丙醇和2wt%的PVP‑ K30；（3）DNA洗涤液，包含以下成分：20 mM NaCl，20 mM Tris‑HCl，终浓度为85%v/v的乙醇，pH 7.5；（4）DNA洗脱液，包含以下成分：10 mM Tris‑HCl，pH 8.5。

【技术特征摘要】
1.一种提取姬松茸总DNA的试剂，其特征在于，包括以下四种试剂：（1）平衡液，包含以下成分：1.5wt%的Na2SiO3·9H2O，1wt%的KOH；（2）裂解液，包含以下成分：5.0M的盐酸胍，30%v/v的异丙醇和2wt%的PVP-K30；（3）DNA洗涤液，包含以下成分：20mMNaCl，20mMTris-HCl，终浓度为85%v/v的乙醇，pH7.5；（4）DNA洗脱液，包含以下成分：10mMTris-HCl，pH8.5。2.如权利要求1所述一种利用该试剂提取姬松茸总DNA的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）向DNA吸附柱中加平衡液200μL，10,000rpm离心1min，弃废液，对DNA吸附柱进行预处理；（2）将50mg的样品研磨后加入裂解液500μL，混匀，室温10,000rpm，离心30s；（3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘朋虎，张煜隆，赵光辉，黄在兴，胡应平，罗海凌，李晶，刘艳玲，林占熺，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建,35