热稳定胆固醇酯酶突变体OPE-A制造技术

本发明专利技术提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑A

【技术实现步骤摘要】
热稳定胆固醇酯酶突变体OPE-A355E/T383E及其制备方法
本专利技术涉及一种胆固醇酯酶的热稳定性突变体酶蛋白，属于基因工程及酶工程

技术介绍
胆固醇酯酶（Sterolesterase，EC3.1.1.13），是一类能催化胆固醇酯酯键断裂或合成的水解酶。胆固醇酯酶活性中心催化三联体由丝氨酸、天冬氨酸和组氨酸三个氨基酸残基构成。胆固醇酯酶具有广谱底物特异性，除了催化胆固醇酯水解外，还能催化磷脂、维生素酯、酰化甘油酯、酯酰辅酶A等底物的水解（或合成），胆固醇酯酶甚至还能表现出酰胺酶（Amidase）的多功能催化活性。胆固醇酯酶在血清胆固醇酯的定量测定、有机合成（尤其是甾醇衍生物类药物的合成）、造纸（纸浆树脂障碍的控制）、特殊日用品（如隐形眼镜）的保洁、食品加工、高分子材料的合成（或降解）等领域具有广泛的应用，是一类具有重要经济价值的工业生物催化剂。目前，仅动物源的胰腺胆固醇酯酶得到系统深入的研究，但该类胆固醇酯酶的催化活性高度依赖于胆盐（Bilesalt）的激活；同时，在有胆盐的缓冲溶液中，胰腺胆固醇酯酶常以多聚体（如二聚体或六聚体）的形式存在。微生物源胆固醇酯酶尚缺乏深本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑A355E/T383E，其特征在于：所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.热稳定胆固醇酯酶突变体OPE-A355E/T383E，其特征在于：所述突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述胆固醇酯酶热稳定性突变体OPE-A355E/T383E的编码基因，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.包含权利要求2所述基因的重组质粒及转化子。4.胆固醇酯酶热稳定性突变体OPE-A355E/T383E的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)利用YASARA软件优化胆固醇酯酶的3D结构；(2)基于胆固醇酯酶突变体自由能的变化值，并以ΔΔG＜0KJ/mol作为筛选突变体的标准，继而利用FoldX等生物信息学软件，构建热稳定胆固醇酯酶突变体电子文库；(3)利用YASARA软件筛除...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒正玉，林红，董宛阡，黄建忠，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建,35