刺五加多糖的提取与纯化方法技术

本发明专利技术公开刺五加多糖的提取与纯化方法，该技术方案以刺五加为原料，通过超声波法、热水法和酶法进行多糖提取，然后除去蛋白质等杂质，通过正交试验寻找最佳实验条件，并对HPD826和HPD100两种树脂进行了优选，吸附多糖，通过紫外等方法进行表征，确定纯度以及大孔吸附效果，进而确定了最佳的提取和纯化方法，实验结果表明，刺五加多糖采用超声波法提取效果较好，而且采用HPD826树脂吸附效果较好。本发明专利技术为刺五加多糖的生产与应用奠定了基础，其制备方法简单易行，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
刺五加多糖的提取与纯化方法
本专利技术涉及多糖的提取与纯化领域，具体为刺五加多糖的提取与纯化方法。
技术介绍
刺五加为五加科植物。刺五加Acanthopanaxsenticosus(Rupr.etMaxim.)Harms的干燥根和根茎或茎，具有益气健脾，补肾安神的功效。其性辛、微苦，温。刺五加中的主要活性成分为黄酮类、皂苷类及多糖类化合物，其中刺五加中的多糖能增强机体免疫力，对肿瘤有较强的抑制作用。目前，多糖类化合物的提取技术常用的有热水提取、水提醇沉、碱提、酸提、微波提取、超声提取法，但针对刺五加多糖的提取纯化方法较少。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题在于提供刺五加多糖的提取与纯化方法，能够提高提取的浓度和纯度。为实现以上技术目的，本专利技术采用以下技术方案：刺五加多糖的提取与纯化方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：1)粉碎：粉碎成絮状；2)提取与纯化(1)提取方法：超声波法提取称取5g粉碎料，以料液比1:20配置成水溶液，在超声仪中进行超声提取；(2)去蛋白质Sevage法去蛋白质：将提取液与有机浸提剂4:1混合，剧烈震荡20-30min，在3000r/min条件下离心15min，分去水层和有机层交界处变性蛋白质，除去沉淀，保留水层，重复多次，获得分离液；3)干燥。作为优选，所述步骤2)提取与纯化(1)提取方法：超声波提取方法中，超声波提取条件为温度：70℃，超声波功率：320W，超声波提取时间：2小时。作为优选，所述有机浸提剂为体积比5:1的氯仿：正丁醇溶液。作为优选，所述步骤2)提取与纯化(1)提取方法还可以用热水法提取：称取5g粉碎料，投入至水浴锅料液比1：15(去离子水)，90℃恒温蒸馏2h，放出煎液，残渣仍留于锅中，再加入15倍量的去离子水，与第一次操作一样，放出第2次煎液，与第一次合并，获得初提液，将初提液放入烧杯，静置过夜，分离获得提取液。作为优选，所述步骤2)提取与纯化还可以用酶法进行提取与纯化：(1)称取5g粉碎料，投入至水浴锅料液比1：6(去离子水)，90℃恒温蒸馏1h；(2)水浴锅降温至45℃，加入酶液，并搅拌均匀，45℃保温1h；(3)水浴锅升温至100℃并保持1分钟以杀死酶；(4)80目过滤取滤液；(5)残渣加10倍水量，100℃保持2h，80目过滤；(6)将两步滤液合并，静置过夜，取上清液。作为优选，所述(2)中酶液包括纤维素酶1.5％，木瓜蛋白酶0.8％，菠萝蛋白酶3.5％。作为优选，还包括大孔树脂静态吸附进一步纯化：HPD826树脂进行预处理；取预处理后的HPD826和步骤2)中最终获得的液体，在120次/min，25℃条件下震荡12h，进行吸附提取。作为优选，所述大孔树脂静态吸附中用HPD100树脂替换HPD826树脂。本专利技术提供了刺五加多糖的提取与纯化方法。该技术方案以刺五加为原料，通过超声波法、热水法和酶法进行多糖提取，然后除去蛋白质等杂质，通过正交试验寻找最佳实验条件，并对HPD826和HPD100两种树脂进行了优选，吸附多糖，通过紫外等方法进行表征，确定纯度以及大孔吸附效果，进而确定了最佳的提取和纯化方法，实验结果表明，刺五加多糖采用超声波法提取效果较好，而且采用HPD826树脂吸附效果较好。本专利技术为刺五加多糖的生产与应用奠定了基础，其制备方法简单易行，具有广阔的应用前景。附图说明图1为刺五加红外特征吸收光谱；图2刺五加多糖GPC分子量测定；图3为刺五加紫外特征吸收光谱；图4为刺五加溶液的标准曲线。具体实施方式以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。实施例1刺五加多糖的提取与纯化方法，包括以下步骤：1)粉碎：粉碎成絮状；2)提取与纯化(1)提取方法：超声波法提取称取5g粉碎料，以料液比1:20配置成水溶液，在超声仪中进行超声提取；(2)去蛋白质Sevage法去蛋白质：将提取液与有机浸提剂4:1混合，剧烈震荡20-30min，在3000r/min条件下离心15min，分去水层和有机层交界处变性蛋白质，除去沉淀，保留水层，重复多次，获得分离液；3)干燥。实施例2刺五加多糖的提取与纯化方法，包括以下步骤：1)粉碎：粉碎成絮状；2)提取与纯化(1)提取方法：超声波法提取称取5g粉碎料，以料液比1:20配置成水溶液，在超声仪中进行超声提取，超声波提取条件为温度：70℃，超声波功率：320W，超声波提取时间：2小时。；(2)去蛋白质Sevage法去蛋白质：将提取液与有机浸提剂4:1混合，所用的有机浸提剂为体积比5:1的氯仿：正丁醇溶液，将混合液剧烈震荡20-30min，在3000r/min条件下离心15min，分去水层和有机层交界处变性蛋白质，除去沉淀，保留水层，重复多次，获得分离液；3)干燥。实施例3刺五加多糖的提取与纯化方法，包括以下步骤：1)粉碎：粉碎成絮状；2)提取与纯化(1)提取方法：热水法提取称取5g粉碎料，投入至水浴锅料液比1：15(去离子水)，90℃恒温蒸馏2h，放出煎液，残渣仍留于锅中，再加入15倍量的去离子水，与第一次操作一样，放出第2次煎液，与第一次合并，获得初提液，将初提液放入烧杯，静置过夜，分离获得提取液。(2)去蛋白质Sevage法去蛋白质：将提取液与有机浸提剂4:1混合，所用的有机浸提剂为体积比5:1的氯仿：正丁醇溶液，将混合液剧烈震荡20-30min，在3000r/min条件下离心15min，分去水层和有机层交界处变性蛋白质，除去沉淀，保留水层，重复多次，获得分离液；3)干燥。实施例4刺五加多糖的提取与纯化方法，包括以下步骤：1)粉碎：粉碎成絮状；2)提取与纯化：酶法(1)称取5g粉碎料，投入至水浴锅料液比1：6(去离子水)，90℃恒温蒸馏1h；(2)水浴锅降温至45℃，加入酶液，并搅拌均匀，45℃保温1h；加入的酶液包括纤维素酶1.5％，木瓜蛋白酶0.8％，菠萝蛋白酶3.5％。(3)水浴锅升温至100℃并保持1分钟以杀死酶；(4)80目过滤取滤液；(5)残渣加10倍水量，100℃保持2h，80目过滤；(6)将两步滤液合并，静置过夜，取上清液；(7)HPD826和HPD100两种树脂进行预处理，然后取预处理后的HPD826和HPD100各0.1g于锥形瓶中，在120次/min，25℃条件下震荡12h。3)干燥。实施例5刺五加多糖的提取与纯化方法，包括以下步骤：1)粉碎：粉碎成絮状；2)提取与纯化(1)提取方法：超声波法提取称取5g粉碎料，以料液比1:20配置成水溶液，在超声仪中进行超声提取，超声波提取条件为温度：70℃，超声波功率：320W，超声波提取时间：2小时。；(2)去蛋白质Sevage法去蛋白质：将提取液与有机浸提剂4:1混合，所用的有机浸提剂为体积比5:1的氯仿：正丁醇溶液，将混合液剧烈震荡20-30min，在3000r/min条件下离心15min，分去水层和有机层交界处变性蛋白质，除去沉淀，保留水层，重复多次，获得分离液；(3)大孔树脂静态吸附HP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.刺五加多糖的提取与纯化方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：1)粉碎：粉碎成絮状；2)提取与纯化(1)提取方法：超声波法提取称取5g粉碎料，以料液比1:20配置成水溶液，在超声仪中进行超声提取；(2)去蛋白质Sevage法去蛋白质：将提取液与有机浸提剂4:1混合，剧烈震荡20‑30min，在3000r/min条件下离心15min，分去水层和有机层交界处变性蛋白质，除去沉淀，保留水层，重复多次，获得分离液；3)干燥。

【技术特征摘要】
1.刺五加多糖的提取与纯化方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：1)粉碎：粉碎成絮状；2)提取与纯化(1)提取方法：超声波法提取称取5g粉碎料，以料液比1:20配置成水溶液，在超声仪中进行超声提取；(2)去蛋白质Sevage法去蛋白质：将提取液与有机浸提剂4:1混合，剧烈震荡20-30min，在3000r/min条件下离心15min，分去水层和有机层交界处变性蛋白质，除去沉淀，保留水层，重复多次，获得分离液；3)干燥。2.根据权利要求1所述的刺五加多糖的提取与纯化方法，其特征在于：所述步骤2)提取与纯化(1)提取方法：超声波提取方法中，超声波提取条件为温度：70℃，超声波功率：320W，超声波提取时间：2小时。3.根据权利要求1所述的刺五加多糖的提取与纯化方法，其特征在于：所述有机浸提剂为体积比5:1的氯仿：正丁醇溶液。4.根据权利要求1所述的刺五加多糖的提取与纯化方法，其特征在于：所述步骤2)提取与纯化(1)提取方法还可以用热水法提取：称取5g粉碎料，投入至水浴锅料液比1∶15(去离子水)，90℃恒温蒸馏2h，放出煎液，残渣仍留于锅中，再加入15倍量的去离子水，与第一次操作一样，放出第2次...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗明献，张一丁，朱雪鹏，张家民，刘林洋，张超，
申请(专利权)人：廊坊市思丁生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13