一种检测组氨酸磷酸化蛋白的ELISA检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种检测组氨酸磷酸化蛋白的ELISA检测试剂盒及检测方法，属于生物技术领域。主要技术方案如下：一种检测组氨酸磷酸化蛋白的ELISA检测试剂盒，包括：包被有组氨酸磷酸化OVA蛋白包被抗原的酶标板、酶标物、洗涤缓冲液、包被缓冲液、封闭液、磷酸化组氨酸结构类似物抗体、底物显色液、反应终止液；所述酶标物为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体；所述洗涤缓冲液为25mM Tris pH 8.5，137mM NaCl，2.7mM KCl，0.1％v/v吐温20。本发明专利技术提供组氨酸磷酸化蛋白抗体纯度高，特异性结合能力好。本发明专利技术采用的组氨酸磷酸化蛋白检测方法操作简单，高效灵敏，易于标准化。

【技术实现步骤摘要】
一种检测组氨酸磷酸化蛋白的ELISA检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测组氨酸磷酸化蛋白的ELISA检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
蛋白质磷酸化是生物体内一种广泛存在的蛋白质翻译后修饰形式，这种氨基酸与磷酸基团共价连接的修饰模式对蛋白质结构和功能起到了重要调节作用。例如，微生物的双组分信号转导系统，该系统由跨膜的受体组氨酸激酶(receptorhistidinekinase，RHK)和胞质内的反应调节蛋白(responseregulator，RR)组成。当RHK感应到外界环境刺激后，其保守组氨酸残基发生自磷酸化，随后将磷酸基团转移给RR上的保守天冬氨酸残基。RR发生磷酸化后对下游基因的表达进行调控。研究表明双组分信号转导系统不仅对细菌的基本生命活动有调节作用，还参与调控很多病原菌的毒力和耐药机制的产生，与致病性密切相关，被认为是潜在的药物鞭标。受体组氨酸激酶作为双组分信号转导系统的核心蛋白，在微生物细胞信号转导过程中发挥着至关重要的作用。因此，简便快速、高灵敏度的组氨酸激酶活性分析方法对于疾病诊断、靶向药物的筛选等都具有重要意义。传统的蛋白激酶活性检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测组氨酸磷酸化蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有组氨酸磷酸化OVA蛋白包被抗原的酶标板、酶标物、洗涤缓冲液、包被缓冲液、封闭液、磷酸化组氨酸结构类似物抗体、底物显色液、反应终止液；所述酶标物为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体；所述洗涤缓冲液为25mM Tris pH 8.5，137mM NaCl，2.7mM KCl，0.1％v/v吐温20；所述包被缓冲液为0.015M Na2CO3，0.035M NaHCO3，pH 9.6；所述封闭液为1wt％BSA的PBST；所述底物显色液为TMB显色液；所述反应终止液为2M H2SO4；所述磷酸化组氨酸结构类似物抗体的制备方法如下...

【技术特征摘要】
1.一种检测组氨酸磷酸化蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有组氨酸磷酸化OVA蛋白包被抗原的酶标板、酶标物、洗涤缓冲液、包被缓冲液、封闭液、磷酸化组氨酸结构类似物抗体、底物显色液、反应终止液；所述酶标物为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体；所述洗涤缓冲液为25mMTrispH8.5，137mMNaCl，2.7mMKCl，0.1％v/v吐温20；所述包被缓冲液为0.015MNa2CO3，0.035MNaHCO3，pH9.6；所述封闭液为1wt％BSA的PBST；所述底物显色液为TMB显色液；所述反应终止液为2MH2SO4；所述磷酸化组氨酸结构类似物抗体的制备方法如下：(一)制备磷酸化组氨酸结构类似物完全抗原称取磷酸化组氨酸结构类似物、N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐依次溶于N，N-二甲基甲酰胺中，20-30℃下搅拌反应，得到活化溶液A；称取载体蛋白溶于碳酸氢钠溶液中，磁力搅拌，得到溶液B；在冰水浴下，将活化溶液A缓慢滴加到溶液B中，磁力搅拌，得到溶液C；将溶液C装入透析袋中，透析并离心得到完全抗原；所述磷酸化组氨酸结构类似物的化学名称为：1-(4-氨基丁...

【专利技术属性】
技术研发人员：权春善，张丽影，李容庆，范圣第，
申请(专利权)人：大连民族大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21