荧光细胞计数标准片制造技术

本实用新型专利技术涉及一种荧光细胞计数标准片，包括载玻片和盖玻片，载玻片上表面固定有滴涂区框体，滴涂区框体内部滴涂填充有多色荧光细胞样本液，盖玻片对滴涂区框体的上端框口进行封盖。本实用新型专利技术能够有效防止细胞样液受盖玻片挤压后发生偏离或者外溢，制成的标准片不仅标准化程度高，增加计数结果准确性，而且有利于标准片的长期保存。

【技术实现步骤摘要】
荧光细胞计数标准片
本技术属于显微计数载玻片的
，特别是涉及一种荧光细胞计数标准片。
技术介绍
载玻片广泛应用于生物医学样本制作，将组织切片或细胞放在载玻片上，盖上盖玻片，封片后用作观察。现有的载玻片在进行涂片时，由于载玻片上没有固定的细胞滴涂区，滴涂在载玻片上的细胞在压盖玻片时易受挤压而偏离或溢出，产生非标准化制片、差异大、易脱落、易溢出等现象。循环肿瘤细胞(circulatingtumorcell，CTC)是被公认为癌症转移的直接原因，目前检测CTC主要靠多色荧光标记等手段。自动荧光显微分析系统的问世，能够高效、准确地检测血液中的CTC。自动荧光显微分析系统在使用前，需对它的计数准确性进行校准。
技术实现思路
本技术所要解决的技术问题是提供一种荧光细胞计数标准片，能够有效避免滴涂液受挤压形成偏离和溢漏，保证制片的标准化。本技术解决其技术问题所采用的技术方案是提供一种荧光细胞计数标准片，包括载玻片和盖玻片，所述载玻片上表面固定有滴涂区框体，所述滴涂区框体内部滴涂填充有多色荧光细胞样本液，所述盖玻片对滴涂区框体的上端框口进行封盖。所述载玻片对应滴涂区框体内部的上表面设有亲水涂层。所述滴涂区框体采用疏水材料制成。所述载玻片的上表面设有标签区。所述标签区为磨砂面。所述标签区位于载玻片的一侧，所述滴涂区框体位于载玻片透明玻璃区的中间。所述滴涂区框体为正方形框体。有益效果在本技术中，载玻片上表面通过滴涂区框体形成多色荧光细胞样本液的滴涂空间，并通过盖玻片进行封盖，能够有效防止细胞样液受盖玻片挤压后发生偏离或者外溢，制成的标准片不仅标准化程度高，增加计数结果准确性，而且有利于标准片的长期保存。附图说明图1为本技术的立体结构示意图。图2为本技术的正面结构示意图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本技术。应理解，这些实施例仅用于说明本技术而不用于限制本技术的范围。此外应理解，在阅读了本技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。如图1和图2所示的一种荧光细胞计数标准片，包括载玻片1和盖玻片2。载玻片1以机械行业标准的“显微镜用载玻片”(JB/T8230.3-1997)尺寸和材料为基础(75mm×25mm×1.1mm，玻璃)，载玻片1上表面经多聚赖氨酸(PLL)、PLUS、AdStar黏附中的一种或多种涂覆形成涂层，使得载玻片1表面具有高度稳定的亲水效果，能够有效吸附滴涂液防止滑脱。载玻片1上表面的中间固定有一个正方形滴涂区框体3，不限于正方形框体，滴涂区框体3单边宽为1mm，框厚为0.02-0.1mm，内部为10mm×10mm的样本滴涂区。滴涂区框体3采用聚四氟乙烯(PTFE)、双酚A型环氧树脂或碳纳米管基超疏水材料制成，具有低荧光、超强的耐药性、耐腐蚀性的优点，能够有效防止滴涂液外溢。载玻片1上表面的一侧为19mm×25mm白色磨砂面的标签区4，用于粘贴条形码或记号笔标记。滴涂区框体3内部滴涂填充有多色荧光细胞样本液。细胞样本采用长势良好的乳腺癌系SK-BR-3细胞，但不限于此细胞，经胰酶消化后，加入完全培养液终止胰酶消化，缓慢冲打培养液至细胞为单细胞悬液，洗涤，离心，将洗涤后的细胞固定。用移液器吸取一定量已固定的细胞至离心管，洗去多余的固定液。分别选用不同的可激发出蓝、绿、红色荧光的染色液，对洗涤后的细胞避光染色，将多余染色液洗涤干净。上述细胞沉淀吹打混匀后取适量滴涂在载玻片上，用生物显微镜观察计数，记录浓度平均值，根据此浓度依次将细胞沉淀稀释至10±5个/5μL、50±10个/5μL、100±20个/5μL。分别取上述细胞溶液适量，滴涂至本技术载玻片1的滴涂区域，均匀铺开，暗处放置，分为空白对照N、样片L、样片M、样片H，细胞样本浓度分别为0、10±5个/5μL、50±10个、100±20个。采用甘油缓冲液的混合物和中性树脂作为封片剂。甘油缓冲液为甘油和碳酸盐缓冲液的混合物，将一定体积的甘油缓冲液，滴涂至细胞样品区，避免蓝绿色荧光衰减红色荧光加深、细胞形态变小、变不规则等现象。滴涂区框体3外侧滴涂中性树脂，小心压盖盖玻片2，牢固封片，从而能够进行长期保存。载玻片1上荧光细胞，用荧光显微镜对其进行计数，目的细胞识别条件为：明场可观察完整细胞形态同时在荧光场下相同位置可分别观察到绿色荧光和蓝色荧光。计量时，重复性n≥6，即为有效计数，计量后的荧光细胞载玻片即为荧光细胞计数标准片。下面提供一个采用此荧光细胞计数标准片对自动荧光显微分析系统的分析准确性、分析精密度、分析复现性等性能指标进行校准的具体实施例。1、分析准确性对空白对照N、样片L、样片M、样片H各测试10次，按照以下公式计算测试平均值：X＝(X1+X2+X3+…+Xi)/n式中：Xi—每次的测试值；n—测试次数；按下列公式计算准确性：准确性＝1-∣X-X0∣/X0×100％式中：X0—标准值；X—测试平均值；2、分析精密度采用上述计算得到的平均值X，按下列公式计算变异系数：CV＝SD/X×100％式中：X—测量平均值；Xi—第i次测试读数；n—测量次数；SD—标准差；CV—变异系数。3、分析复现性每隔0.5小时为一个间隔，重复测试三次，计算平均值，一共测试4个间隔，取5个结果中的最大值(最小值)；按下列公式计算仪器复现性误差：S＝∣Si-S0∣/S0×100％式中：S0——初始测试的读数平均值；Si——测试结果平均值中的最大值(最小值)；i＝1,2,3,4,54、结果经测试分析，计算可得自动荧光显微分析系统对样片L、样片M、样片H的测试准确性分别为98.96％、97.96％和99.17％，测试SD值分别为1.67、1.00和0.5773，计算分析精密度得到CV值分别为1.72％、2.00％和4.77％，复现性误差分别为0.34％、1.33％和2.70％。5、结论采用此荧光细胞计数标准片成功地解决了自动荧光显微分析系统的质控问题。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种荧光细胞计数标准片，包括载玻片(1)和盖玻片(2)，其特征在于：所述载玻片(1)上表面固定有滴涂区框体(3)，所述滴涂区框体(3)内部滴涂填充有多色荧光细胞样本液，所述盖玻片(2)对滴涂区框体(3)的上端框口进行封盖。

【技术特征摘要】
1.一种荧光细胞计数标准片，包括载玻片(1)和盖玻片(2)，其特征在于：所述载玻片(1)上表面固定有滴涂区框体(3)，所述滴涂区框体(3)内部滴涂填充有多色荧光细胞样本液，所述盖玻片(2)对滴涂区框体(3)的上端框口进行封盖。2.根据权利要求1所述的一种荧光细胞计数标准片，其特征在于：所述载玻片(1)对应滴涂区框体(3)内部的上表面设有亲水涂层。3.根据权利要求1所述的一种荧光细胞计数标准片，其特征在于：所述滴涂区框体(3)采用疏水材料...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈鹤柏，梅胜兰，相鸿坤，邢国杰，吴炅，
申请(专利权)人：上海柏慧康生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：上海,31