硫酸新霉素的分析检测方法技术

硫酸新霉素的分析检测方法，涉及硫酸新霉素。合成金纳米粒子；制备Au@PVP核壳纳米粒子溶胶；取Au@PVP核壳纳米粒子溶胶，测定Au@PVP核壳纳米粒子溶胶的表面等离子体共振吸收谱；硫酸新霉素的定量分析检测。利用硫酸新霉素的氨基能够和Au@PVP核壳纳米粒子上的PVP的吡咯烷酮的氧形成氢键，诱导Au@PVP核壳纳米粒子发生团聚，导致其在542nm处的表面等离子体共振吸收降低，从而实现对硫酸新霉素的定量分析检测。该方法，样品前处理过程简单，不需要昂贵的仪器设备和较高的操作技术要求，可满足快速分析检测的要求。利用纳米粒子对一些物质超敏感而随即发生团聚的现象，简单、快速、可视、高灵敏。

【技术实现步骤摘要】
硫酸新霉素的分析检测方法
本专利技术涉及硫酸新霉素，尤其是涉及通过水热合成法制备Au@PVP核壳纳米粒子，利用硫酸新霉素诱导核壳纳米粒子发生聚集反应，降低Au@PVP核壳纳米粒子的表面等离子体共振吸收，根据降低的程度对硫酸新霉素进行分析检测。
技术介绍
硫酸新霉素(NEO)是由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成的氨基糖苷类抗生素。此类抗生素常用作兽药，诱导细菌合成错误蛋白以及阻抑已合成蛋白的释放，从而导致细菌死亡。常被作用于革兰氏阴性菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌、产气杆菌，以及治疗水产动物由气单细胞菌、爱德华氏菌等引起的肠道疾病等(高玲.水产品中氨基糖苷类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法研究[J].中国兽药杂志,2012,46(11):27-30；刘永涛.固相萃取-高效液相色谱/串联质谱法测定水产品中硫酸新霉素残留量[J].分析科学学报,2017,33(1):6-10；柳富荣.渔用抗生素类药物[J].湖南农业，2016,(1)：27.)。但是，一些养殖户过度追逐利益，非法将此类抗生素添加在饲料里面，超量或长期不合理用药造成药物残留问题。人类在食用了这类抗生素超标的动物源性食物时会受到较大的危害(张静.HPLC-MS/MS法测定饲料中硫酸新霉素的含量[J].饲料研究,2017,(11):27-32.)，例如常常导致耳聋，引起各种肾病及心血管疾病(赵壮.氨基糖苷类药物耳毒性的斑马鱼模型的研究[J].药学学报,2011,46(8):928-935；舒卫宁.硫酸新霉素对新生大鼠离体培养耳蜗毛细胞的毒性作用研究[J].中国儿科学杂质，2010,8(1):105-109.)等。目前，欧盟规定有鳍鱼类中硫酸新霉素的残留限量为500μg/kg(CommissionImplementingRegμLation(EU)No.1056(2013)AmendingtheAnnextoRegμLationEU)No37/2010onpharmacologicallyactivesubstancesandtheirclassificationregardingmaximumresiduelimitsinfoodstuffsofanimalorigin,asregardsthesubstanceneomycin.)，日本规定鱼类、去壳软体动物、甲壳纲动物等中新霉素最高残留量值为500ug/Kg(JapaneseMinistryofHealth,Labor,PositiveListofthe2003AmendmenttotheFoodHygieneLaw(肯定列表《食品卫生法2003修订案》))。我国仅规定了畜禽中硫酸新霉素的最高残留量为500ug/Kg(AnnouncementNo.235oftheMinistryofAgricμLtureofthePeople'sRepublicofChina.MaximumResidueLimitsofVeterinaryDrugsinAnimalsFoods(中国人民共和国农业部公告第235号《动物性食品中最高残留限量》))。因此，发展水产品中新霉素的快检方法，严格控制其在水产品中的残留量具有重要意义。目前，该类抗生素的检测方法主要有微生物测定法、色谱法和分光光度法。微生物法不适合定量分析。对于常用色谱法，由于新霉素结构中缺少发色团或荧光团，很难用常规的液相色谱法进行检测，一般需要对其进行柱前衍生化，或通过免疫层析亲和柱纯化后再衍生化。衍生化过程复杂繁琐，不易操作，稳定性不高。另一种是通过在液相色谱柱后串联一些检测技术，如蒸发光检测、电泳、脉冲安培检测、电化学检测、质谱或二级质谱质谱等，通过转变为光或电信号进行检测。这些检测技术往往要求液相色谱采用挥发性离子对试剂作为流动相，分析时对仪器和色谱柱的损伤大，需要对离子源和色谱定期清洗以防污染和灵敏度下降，而且检测成本高，耗费时间长，样品前处理复杂，因而不适用于大批量样品的检测。分光光度法，因其操作简单、稳定性好、检测速度快、成本低，而被用于抗生素的检测。ZonghuiQin等人(秦宗会.曲利本红分光光度法测定氨基糖苷类抗生素[J].理化检验(化学分册),2005,(7):486-489.)利用曲本利红与氨基糖苷类抗生素发生显色反应对氨基糖苷类抗生素进行检测，检测范围是0～1.8×10-2mol/L。(I.Kinetic-spectrophotometricdeterminationofneomycin[J].JournalofAnalyticalChemistry,2015，70(2)：234-239.)利用动力学比色分光光度法测定眼药水中的硫酸新霉素，检测范围约为1.7×10-4～8.5x10-5mol/L。这些方法主要是通过溶液的显色反应进行分析检测，一般检测限高，无法满足痕量检测要求。尽管文献报道了通过加入少量一些特定物质，纳米粒子会发生团聚的现象，但是迄今为止，并无利用这种现象对抗生素进行分析检测的报道。`
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供能够利用纳米粒子对一些物质超敏感而随即发生团聚的现象，实现硫酸新霉素的高灵敏、快速检测，方法简单、快速、可信度高的硫酸新霉素的分析检测方法。本专利技术首先在溶液中合成Au@PVP纳米粒子，然后分别探究pH值、Au@PVP与硫酸新霉素结合的量比，对Au@PVP核壳纳米粒子在542nm处表面等离子体共振吸收的影响，通过Au@PVP核壳纳米粒子表面等离子体共振吸收的降低幅度间接检测硫酸新霉素，实现硫酸新霉素的低浓度、高灵敏的快速定量分析检测。本专利技术包括以下步骤：1)合成金纳米粒子；在步骤1)中，所述合成金纳米粒子的具体方法可为：用柠檬酸钠还原氯金酸制备金纳米粒子溶胶(AuNPs溶胶)，通过控制反应物的浓度、反应时间、反应温度、搅拌速度、反应条件，在磁力搅拌下加热回流至沸腾，然后迅速加柠檬酸三钠，继续加热回流30～50min，使其完全反应后自然冷却至室温，制得粒径均一的金纳米粒子；所述金纳米粒子可为球形或椭圆形金纳米粒子，粒径可为50±10nm，氯金酸的质量浓度分数可0.01％～0.05％，柠檬酸钠质量浓度分数可为0.8％～1.5％，氯金酸溶液与柠檬酸钠溶液的体积比为120～150，反应温度可为95～105℃，反应时间可为30～50min，搅拌速度可为1500～2000r/min。2)制备Au@PVP核壳纳米粒子溶胶；在步骤2)中，所述制备Au@PVP核壳纳米粒子的具体方法可为：取AuNPs溶胶，搅拌下加入PVP溶液反应，制得Au@PVP核壳纳米粒子溶胶；所述搅拌的转速可为1000r/min，反应的时间20～30min，制得Au@PVP核壳纳米粒子可为球形或椭圆形，粒径可为50～80nm，所述AuNPs溶胶的体积可为20～30ml，所述PVP溶液的质量浓度分数可为0.7％～1.2％，Au纳米粒子与PVP体积比可为(130～200)︰1，合成的Au@PVP核壳纳米粒子的PVP壳层的厚度可为2.5～3.7nm；所述Au@PVP核壳纳米粒子溶胶的表面等离子体共振吸收是Au@PVP核壳纳米粒子溶胶本身在542nm波长处具有的表面等离子体共振吸收，当加入硫酸新霉素后，Au@PVP核壳纳米粒子发生团聚，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.硫酸新霉素的分析检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)合成金纳米粒子；2)制备Au@PVP核壳纳米粒子溶胶；3)取Au@PVP核壳纳米粒子溶胶，测定Au@PVP核壳纳米粒子溶胶的表面等离子体共振吸收谱；4)硫酸新霉素的定量分析检测。

【技术特征摘要】
1.硫酸新霉素的分析检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)合成金纳米粒子；2)制备Au@PVP核壳纳米粒子溶胶；3)取Au@PVP核壳纳米粒子溶胶，测定Au@PVP核壳纳米粒子溶胶的表面等离子体共振吸收谱；4)硫酸新霉素的定量分析检测。2.如权利要求1所述硫酸新霉素的分析检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述合成金纳米粒子的具体方法为：用柠檬酸钠还原氯金酸制备金纳米粒子溶胶，通过控制反应物的浓度、反应时间、反应温度、搅拌速度、反应条件，在磁力搅拌下加热回流至沸腾，然后迅速加柠檬酸三钠，继续加热回流30～50min，使其完全反应后自然冷却至室温，制得粒径均一的金纳米粒子。3.如权利要求2所述硫酸新霉素的分析检测方法，其特征在于所述金纳米粒子为球形或椭圆形金纳米粒子，粒径为50±10nm。4.如权利要求2所述硫酸新霉素的分析检测方法，其特征在于所述氯金酸的质量浓度分数0.01％～0.05％，柠檬酸钠质量浓度分数为0.8％～1.5％，氯金酸溶液与柠檬酸钠溶液的体积比为120～150。5.如权利要求2所述硫酸新霉素的分析检测方法，其特征在于所述反应温度为95～105℃，反应时间为30～50min，搅拌速度为1500～2000r/min。6.如权利要求1所述硫酸新霉素的分析检测方法，其特征在于在步骤2)中，所述制备Au@PVP核壳纳米粒子的具体方法为：取AuNPs溶胶，搅拌下加入PVP溶液反应，制得Au@PVP核壳纳米粒子溶胶。7.如权利要求6所述硫酸新霉素的分析检测方法，其特征在于所述搅拌的转速为1000r/min，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张芹，贺路影，苏文金，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建,35