一种辅助鉴定小麦粒重性状的方法及其专用引物组技术

本发明专利技术公开了一种辅助鉴定小麦粒重性状的方法及其专用引物组。本发明专利技术提供了KASP5B8引物组，由序列1所示引物K5B8A、序列2所示引物K5B8B和序列3所示引物K5B8C组成。本发明专利技术还提供了KASP5B9引物组，由序列5所示引物K5B9A、序列6所示引物K5B9B和序列7所示引物K5B9C组成。本发明专利技术还保护一种鉴定待测小麦的籽粒性状的方法，包括如下步骤：检测待测小麦基于特异SNP的基因型；TT基因型小麦的籽粒性状优于CC基因型小麦。所述特异SNP(为小麦基因组中的序列表的序列4所示DNA分子的第19位核苷酸或小麦基因组中的序列表的序列8所示DNA分子的第24位核苷酸。本发明专利技术对与培育高产小麦具有重大应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种辅助鉴定小麦粒重性状的方法及其专用引物组
本专利技术涉及一种辅助鉴定小麦粒重性状的方法及其专用引物组。
技术介绍
作为三大粮食作物之一，小麦是全球35％～40％人口的主要粮食。随着人口增加、耕地面积减少和极端气候的加剧，持续提高小麦单产已成为保障粮食安全所面临的严峻课题。遗传改良是提高产量的重要途径，通过分子技术发掘产量性状相关基因位点并进行辅助选择，可显著提高高产新品种选育效率。粒重改良是提高小麦产量潜力的重要因子，大量研究已对其进行了QTL分析，但多数QTL效应不大、表达不稳定，未经验证，且与之连锁的标记多为SSR或SNP芯片检测标记，通量低、灵活性差，使其在育种中的应用受到限制。KASP(KompetitiveAllele-SpecificPCR，竞争性等位基因特异性PCR)是由英国LGC(LaboratoryoftheGovernmentChemist，政府化学家实验室)开发的一项经济有效、灵活的SNP分型技术，基于引物末端碱基的特异匹配和通用荧光探针对SNP进行分型，可在96、384和1536孔PCR板中进行，荧光定量PCR仪或普通PCR仪结合酶标仪即可满足大部分用户的需求。与其他标记相比，KASP标记更适合应用于分子标记辅助选择育种。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种辅助鉴定小麦粒重性状的方法及其专用引物组。本专利技术提供了KASP5B8引物组，由引物K5B8A、引物K5B8B和引物K5B8C组成；引物K5B8A为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；引物K5B8B为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；引物K5B8C为如下(c1)或(c2)：(c1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子。本专利技术还提供了KASP5B9引物组，由引物K5B9A、引物K5B9B和引物K5B9C组成；引物K5B9A为如下(d1)或(d2)：(d1)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(d2)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；引物K5B9B为如下(e1)或(e2)：(e1)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(e2)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子；引物K5B9C为如下(f1)或(f2)：(f1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(f2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子。本专利技术还提供了一种引物组组合，由KASP5B8引物组和KASP5B9引物组组成。本专利技术还保护一种试剂盒，包括KASP5B8引物组或KASP5B9引物组或所述引物组组合。所述试剂盒还包括特异引物组。所述特异探针组由荧光探针A、淬灭探针A、荧光探针B和淬灭探针B；荧光探针A如序列表的序列9所示，5’末端连接荧光基团；荧光探针B如序列表的序列10所示，5’末端连接荧光基团；荧光探针A和荧光探针B中的荧光基团不同；淬灭探针A如序列表的序列11所示，3’末端连接淬灭基团；淬灭探针B如序列表的序列12所示，3’末端连接淬灭基团。荧光探针A具体连接FAM荧光基团。荧光探针B具体连接HEX荧光基团。淬灭探针A具体连接连接淬灭基团BHQ。淬灭探针B具体连接淬灭基团BHQ。所述试剂盒还包括KASP2×MasterMix。本专利技术还保护KASP5B8引物组或KASP5B9引物组或所述引物组组合的应用，为如下(g1)至(g20)中的至少一种：(g1)鉴定小麦基于KASP5B8位点的基因型；(g2)鉴定小麦基于KASP5B9位点的基因型；(g3)鉴定或辅助鉴定小麦的粒重性状；(g4)鉴定或辅助鉴定小麦的千粒重性状；(g5)鉴定或辅助鉴定小麦的粒长性状；(g6)鉴定或辅助鉴定小麦的粒宽性状；(g7)筛选或选育具有高粒重性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g8)筛选或选育具有高千粒重性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g9)筛选或选育具有长粒长性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g10)筛选或选育具有宽粒宽性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g11)制备用于鉴定小麦基于KASP5B8位点的基因型的产品；(g12)制备用于鉴定小麦基于KASP5B9位点的基因型的产品；(g13)制备用于鉴定或辅助鉴定小麦的粒重性状的产品；(g14)制备用于鉴定或辅助鉴定小麦的千粒重性状的产品；(g15)制备用于鉴定或辅助鉴定小麦的粒长性状的产品；(g16)制备用于鉴定或辅助鉴定小麦的粒宽性状的产品；(g17)制备用于筛选或选育具有高粒重性状的小麦单株或株系或品系或品种的产品；(g18)制备用于筛选或选育具有高千粒重性状的小麦单株或株系或品系或品种的产品；(g19)制备用于筛选或选育具有长粒长性状的小麦单株或株系或品系或品种的产品；(g20)制备用于筛选或选育具有宽粒宽性状的小麦单株或株系或品系或品种的产品；本专利技术还保护所述试剂盒的应用，为如下(g1)至(g10)中的至少一种：(g1)鉴定小麦基于KASP5B8位点的基因型；(g2)鉴定小麦基于KASP5B9位点的基因型；(g3)鉴定或辅助鉴定小麦的粒重性状；(g4)鉴定或辅助鉴定小麦的千粒重性状；(g5)鉴定或辅助鉴定小麦的粒长性状；(g6)鉴定或辅助鉴定小麦的粒宽性状；(g7)筛选或选育具有高粒重性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g8)筛选或选育具有高千粒重性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g9)筛选或选育具有长粒长性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g10)筛选或选育具有宽粒宽性状的小麦单株或株系或品系或品种。以上任一所述KASP5B8位点为小麦基因组中的序列表的序列4所示DNA分子的第19位核苷酸；以上任一所述KASP5B9位点为小麦基因组中的序列表的序列8所示DNA分子的第24位核苷酸。本专利技术还保护一种鉴定待测小麦的籽粒性状的方法，包括如下步骤：检测待测小麦基于特异SNP的基因型；TT基因型小麦的籽粒性状优于CC基因型小麦；籽粒性状优体现为粒重高和/或千粒重高和/或粒长长和/或粒宽宽；所述特异SNP(KASP5B8)为小麦基因组中的序列表的序列4所示DNA分子的第19位核苷酸。所述特异SNP为T/C多态。本专利技术还保护一种鉴定待测小麦的籽粒性状的方法，包括如下步骤：检测待测小麦基于特异SNP的基因型；TT基因型小麦的籽粒性状优于CC基因型小麦；籽粒性状优体现为粒重高和/或千粒重高和/或粒长长和/或粒宽宽；所述特异SNP(KASP5B9)为小麦基因组中的序列表的序列8所示DNA分子的第24位核苷酸。所述特异SNP为T/C多态。本专利技术还保护一种鉴定待测小麦的籽粒性状的方法，包括如下步骤：(1)以待测小麦的基因组DNA为模板，采用KASP5B8引物组进行KASP；(2)完成步骤(1)后，进行荧光扫描，确定待测小麦基于特异SN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.KASP5B8引物组，由引物K5B8A、引物K5B8B和引物K5B8C组成；引物K5B8A为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；引物K5B8B为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；引物K5B8C为如下(c1)或(c2)：(c1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子。

【技术特征摘要】
1.KASP5B8引物组，由引物K5B8A、引物K5B8B和引物K5B8C组成；引物K5B8A为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；引物K5B8B为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；引物K5B8C为如下(c1)或(c2)：(c1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子。2.引物组组合，由权利要求1所述KASP5B8引物组和权利要求3所述KASP5B9引物组组成。3.KASP5B9引物组，由引物K5B9A、引物K5B9B和引物K5B9C组成；引物K5B9A为如下(d1)或(d2)：(d1)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(d2)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；引物K5B9B为如下(e1)或(e2)：(e1)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(e2)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子；引物K5B9C为如下(f1)或(f2)：(f1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(f2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子。4.一种试剂盒，包括权利要求1所述KASP5B8引物组或权利要求3所述KASP5B9引物组或权利要求2所述引物组组合。5.权利要求1所述KASP5B8引物组或权利要求3所述KASP5B9引物组或权利要求2所述引物组组合或权利要求4所述试剂盒的应用，为如下(g1)至(g20)中的至少一种：(g1)鉴定小麦基于KASP5B8位点的基因型；(g2)鉴定小麦基于KASP5B9位点的基因型；(g3)鉴定或辅助鉴定小麦的粒重性状；(g4)鉴定或辅助鉴定小麦的千粒重性状；(g5)鉴定或辅助鉴定小麦的粒长性状；(g6)鉴定或辅助鉴定小麦的粒宽性状；(g7)筛选或选育具有高粒重性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g8)筛选或选育具有高千粒重性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g9)筛选或选育具有长粒长性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g10)筛选或选育具有宽粒宽性状的小麦单株或株系或品系或品种；(g11)制备用于鉴定小麦基于KASP5B8位点的基因型的产品；(g12)制备用于鉴定小麦...

【专利技术属性】
技术研发人员：张勇，杨莉，赵德辉，曹双河，何中虎，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11