华山新麦草分子特异性标记引物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种华山新麦草分子特异性标记引物及其应用，涉及分子生物学技术领域。本发明专利技术利用基因数据库信息，通过筛选、设计、合成以及PCR扩增验证，筛选得到34个SSR分子特异性标记引物对和102个EST分子特异性标记引物对，上述标记均可在华山新麦草中扩增出特异条带，在华山新麦草、小麦及部分同源种属材料间有显著差异，且为华山新麦草分子标记辅助育种工作提供理论支撑。

【技术实现步骤摘要】
华山新麦草分子特异性标记引物及其应用
本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种华山新麦草分子特异性标记引物及其应用。
技术介绍
华山新麦草(2n＝14，NsNs)是小麦近缘物种，携带多种与小麦农艺性状有关的优良基因和抗病基因。目前有关华山新麦草遗传物质转移至小麦遗传背景中的研究取得了很多关键研究成果，其中华山新麦草遗传物质的鉴别与筛选是重要一环。随着分子技术的快速发展，大量SSR标记和EST标记被开发利用。但是在小麦远缘杂交过程中，丰富的种类和数量也给单一材料研究带来选择困难、差异性低的问题。针对这一现象，本专利技术利用现有的分子标记，筛选得到可以直接扩增出华山新麦草的特异片段的特异分子标记，使研究过程变得简单快速。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术实施例提供了一种华山新麦草分子特异性标记引物及其应用，主要目的是筛选出可鉴定华山新麦草的特异性引物。为达到上述目的，本专利技术主要提供了如下技术方案：一方面，本专利技术实施例提供了一种华山新麦草分子特异性标记引物，所述特异分子标记引物包括34个SSR引物对和102个EST引物对；所述SSR引物对的名称分别为：Xwmc166(9g1F)、Xcfd0156、Xgwm314、Xgwm271、Xcfd190、Xcfd31、Xcwm532、Xcfd156、Xgdm0136、Xgpw5195、Xgpw7244、Xgwm518、Xwmc522(22h5F)、Xwmc533(26h1F)、Xwmc85-1B、Xwmc631、Xwmc702、Xwmc93(6h12F)、Xgwm264-1B、Xwmc471(25e1F)、Xgwm0249、Xgwm0265、Xwmc734、Xcfd35、Xwmc397、Xgpw4095、Xgpw5237、Xmag1932、Xmag1809、Xmag834、Xmag1441、Xmag3137、Xmag1682及Xmag3318；所述EST引物对的名称分别为：BE426274、BF291740、BE406901、BE497107、CD490579、BG262410S、BM134486、BE425354、BE443071、BE443797、BE637935、BE490643、BE403153、BF293581、BF201704、BE403214、BE426257、BE352611、BE497177、BE403867、BF291549、BF473049、BG607666、BQ166400、CD453617、CD373543、CD373500、CD452643、CD491981、CD452846、BF484028、BF474569、BF429122、BE59069、BE490237、BE407068、BE499071、BG264080、BQ171235、BQ159493、BQ167013、CD452736、BQ159475、CD454353、CD454198、BF48528、BF484133、BE499843、BE404437、BE398399L、CD373513、BM135247、BE443103、BE406996、BE499327、BE406901、BE443796、BE497584、BE495292、BE404332、BQ160526、CD490485、CD373475、CD454575、BQ169491、BF291730、BM137713、CD452844、BE605103、BE637806、BE606250、BF429203、CD454173、BE446061、BE404973、CD373484、BE444811、BE591142、BE444644、BG604865、CD491981、BF482781、BF482530、BE591737、BE637663、BG274576、BE591127、BQ168298、BG606097、BE495150、BF291549、BE405518、BF485168、BE495786、BE405749、BE518255、BE443691、BE404963、BF202706、BE490599、BE606392及BE638039。又一方面，本专利技术实施例提供了上述特异性引物在鉴定华山新麦草遗传物质中的应用。再一方面，本专利技术实施例提供了上述特异性引物的使用方法，包括以下步骤：(1)采用CTAB方法提取叶片全基因组DNA作为待鉴定样品；(2)利用数据库信息，筛选和设计符合要求的EST、SSR引物；(3)以所述待鉴定样品作为DNA模板进行PCR扩增，获得扩增产物；(4)对所述扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，获得清晰条带。作为优选，所述PCR扩增体系为10μl，具体如下：作为优选，所述PCR的扩增程序：94℃预变性3min；94℃变性30s，50-60℃退火45s，72℃延伸50s，35个循环；72℃终延伸10min，12℃保存。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术利用基因数据库信息，通过筛选、设计、合成、以及PCR扩增验证，筛选出34个SSR分子特异性引物对和102个EST分子特异性引物对，上述标记均可在华山新麦草中扩增出特异的条带，本专利技术的提供的上述136个特异性引物对在华山新麦草、小麦、部分同源种属材料间有显著差异，且为华山新麦草分子标记辅助育种工作提供理论支撑。附图说明图1是本专利技术实施例2提供的利用BE443103扩增的目的产物的凝胶电泳图谱；(1:CS，2:7182，3:长穗偃麦草，4:中间偃麦草，5:拟鹅观草，6:华山新麦草，7:滨麦，8:黑麦；)图2是本专利技术实施例2提供的利用BE591142扩增的目的产物的凝胶电泳图谱；图3是本专利技术实施例2提供的利用BE490643扩增的目的产物的凝胶电泳图谱；图4是本专利技术实施例2提供的利用CD452643扩增的目的产物的凝胶电泳图谱；图5是本专利技术实施例2提供的利用BE637806扩增的目的产物的凝胶电泳图谱；图6是本专利技术实施例2提供的利用BE605103扩增的目的产物的凝胶电泳图谱；图7是本专利技术实施例2提供的利用BE497584扩增的目的产物的凝胶电泳图谱；图8是本专利技术实施例2提供的利用BE497177扩增的目的产物的凝胶电泳图谱；图9是本专利技术实施例2提供的利用BF291549扩增的目的产物的凝胶电泳图谱。具体实施方式为更进一步阐述本专利技术为达成预定专利技术目的所采取的技术手段及功效,以下以较佳实施例，对依据本专利技术申请的具体实施方式、技术方案、特征及其功效，详细说明如后。下述说明中的多个实施例中的特定特征、结构、或特点可由任何合适形式组合。实施例1利用序列数据库查找比对华山新麦草近缘物种和小麦低同源序列，遵循引物设计原则，利用Primer5.0设计EST引物和SSR引物，涉及到的特意标记总计136个，其中SSR标记34个，EST标记102个，上述特异性引物的筛选验证工作是由本专利技术独立完成，上述136对特异引物在染色体的位置和核苷酸序列如表1所示。表1.华山新麦草136对特异性引物生物信息注：1-34为SSR分子标记，35-136为EST分子标记；本领域技术人员可根据上述引物对名称从PCR引物网站(http://wheat.pw.usda.gov/SNP/new/pcr_pr本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.华山新麦草分子特异性标记引物，其特征在于，所述分子特异性标记引物包括34个SSR引物对和102个EST引物对；所述SSR引物对的名称分别为：Xwmc166(9g1F)、Xcfd0156、Xgwm314、Xgwm271、Xcfd190、Xcfd31、Xcwm532、Xcfd156、Xgdm0136、Xgpw5195、Xgpw7244、Xgwm518、Xwmc522(22h5F)、Xwmc533(26h1F)、Xwmc85‑1B、Xwmc631、Xwmc702、Xwmc93(6h12F)、Xgwm264‑1B、Xwmc471(25e1F)、Xgwm0249、Xgwm0265、Xwmc734、Xcfd35、Xwmc397、Xgpw4095、Xgpw5237、Xmag1932、Xmag1809、Xmag834、Xmag1441、Xmag3137、Xmag1682及Xmag3318；所述EST引物对的名称分别为：BE426274、BF291740、BE406901、BE497107、CD490579、BG262410S、BM134486、BE425354、BE443071、BE443797、BE637935、BE490643、BE403153、BF293581、BF201704、BE403214、BE426257、BE352611、BE497177、BE403867、BF291549、BF473049、BG607666、BQ166400、CD453617、CD373543、CD373500、CD452643、CD491981、CD452846、BF484028、BF474569、BF429122、BE59069、BE490237、BE407068、BE499071、BG264080、BQ171235、BQ159493、BQ167013、CD452736、BQ159475、CD454353、CD454198、BF48528、BF484133、BE499843、BE404437、BE398399L、CD373513、BM135247、BE443103、BE406996、BE499327、BE406901、BE443796、BE497584、BE495292、BE404332、BQ160526、CD490485、CD373475、CD454575、BQ169491、BF291730、BM137713、CD452844、BE605103、BE637806、BE606250、BF429203、CD454173、BE446061、BE404973、CD373484、BE444811、BE591142、BE444644、BG604865、CD491981、BF482781、BF482530、BE591737、BE637663、BG274576、BE591127、BQ168298、BG606097、BE495150、BF291549、BE405518、BF485168、BE495786、BE405749、BE518255、BE443691、BE404963、BF202706、BE490599、BE606392及BE638039。...

【技术特征摘要】
1.华山新麦草分子特异性标记引物，其特征在于，所述分子特异性标记引物包括34个SSR引物对和102个EST引物对；所述SSR引物对的名称分别为：Xwmc166(9g1F)、Xcfd0156、Xgwm314、Xgwm271、Xcfd190、Xcfd31、Xcwm532、Xcfd156、Xgdm0136、Xgpw5195、Xgpw7244、Xgwm518、Xwmc522(22h5F)、Xwmc533(26h1F)、Xwmc85-1B、Xwmc631、Xwmc702、Xwmc93(6h12F)、Xgwm264-1B、Xwmc471(25e1F)、Xgwm0249、Xgwm0265、Xwmc734、Xcfd35、Xwmc397、Xgpw4095、Xgpw5237、Xmag1932、Xmag1809、Xmag834、Xmag1441、Xmag3137、Xmag1682及Xmag3318；所述EST引物对的名称分别为：BE426274、BF291740、BE406901、BE497107、CD490579、BG262410S、BM134486、BE425354、BE443071、BE443797、BE637935、BE490643、BE403153、BF293581、BF201704、BE403214、BE426257、BE352611、BE497177、BE403867、BF291549、BF473049、BG607666、BQ166400、CD453617、CD373543、CD373500、CD452643、CD491981、CD452846、BF484028、BF474569、BF429122、BE59069、BE490237、BE407068、BE499071、BG264080、BQ171235、BQ159493、BQ167013、CD452736、BQ159475、CD454353、CD454198、BF48528、BF484133、BE499843、BE404437、BE398399...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉万全，王艳珍，张德时，张宏，陈春环，王长有，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61