一种肺癌检测标志物及诊断试剂盒制造技术

技术编号:19712562 阅读:35 留言:0更新日期:2018-12-08 18:26
本发明专利技术公开了一种肺癌检测标志物及诊断试剂盒。外泌体CD171蛋白作为检测靶点在制备肺癌诊断试剂盒中的应用。检测外泌体CD171蛋白表达量的试剂在在制备肺癌诊断试剂盒中的应用。检测外泌体CD171蛋白mRNA表达量的实时荧光PCR检测试剂优选包括检测外泌体CD171蛋白的qPCR引物,上游引物序列如SEQ ID NO.1所示,下游引物序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术公开了一种外泌体CD171蛋白,通过检测CD171的蛋白表达水平,可用于诊断病人是否患有肺癌。经过实验证明,CD171蛋白可以有效区分肺癌和健康人。因此,本发明专利技术为肺癌的早期诊断检测提供了新的检测靶点。

【技术实现步骤摘要】
一种肺癌检测标志物及诊断试剂盒
本专利技术属于生物检测领域,涉及一种肺癌检测标志物及诊断试剂盒。
技术介绍
肺癌(lungcancer)是目前世界范围内发生率和病死率第一的恶性肿瘤,近50年来,许多国家报道肺癌发病率和死亡率均明显增高,其中男性和女性的肺癌发病率和死亡率是在所有恶性肿瘤中分别排名第一和第二。肺癌已经成为严重威胁人类健康的胸部常见恶性肿瘤。目前,首选的肺癌的治疗手段是外科手术,然而就算实施了有根治性效果的切除手术,有部分患者仍然不能达到较高的生存率。目前约75%的肺癌患者在诊断时已属晚期,5年生存率进约为15%左右。利用支气管镜、纵膈镜或胸腔穿刺术活检是目前诊断肺癌比较可靠的方法,但是这些操作不适合用来对疾病的普通检查和连续监测。因此提高肺癌的治疗效果和生存率,唯一的措施是进行早期诊断、早期治疗。早期筛检能使肺癌诊断的分期降低,手术切除率提高,中位生存期延长,5年生存率提高。所以探索新的早期检测肺癌的标志物,开展肺癌早期诊断,是十分必要的。外泌体(exosome)是多种细胞主动分泌的微小囊泡,直径为40-100nm,具有脂质双层膜结构。外泌体含有蛋白质、脂质、核酸等多种成分,在细胞的整个生理过程中发挥着重要作用,外泌体被细胞释放后进入体液,可以作为可靠的肿瘤标记物。研究发现,外泌体可以促进肺癌微环境的形成,从而增加肿瘤细胞的侵袭和转移能力,参与促进肺癌的发生和发展。目前检测肺癌的诊断方式有胸部X线检查、胸部CT、经皮肺穿刺活检等,但大部分都是有创操作,并且容易受到肿瘤组织的大小或者患者的自身情况等的影响。而外泌体用于肿瘤检测的优势在于:操作无创,并且能够在血液、汗液、尿液、胸水、腹水等多种体液中检测得到。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足,提供一种新的肺癌生物标志物的应用。本专利技术的另一目的是提供该肺癌生物标志物的检测试剂。本专利技术的又一目的是提供肺癌诊断试剂盒。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现:外泌体CD171蛋白作为检测靶点在制备肺癌诊断试剂盒中的应用。检测外泌体CD171蛋白表达量的试剂在在制备肺癌诊断试剂盒中的应用。所述的检测外泌体CD171蛋白表达量的试剂优选包括:检测外泌体CD171蛋白mRNA表达量的实时荧光PCR检测试剂;或者直接检测外泌体CD171蛋白表达量的westernblot检测试剂。所述的检测外泌体CD171蛋白mRNA表达量的实时荧光PCR检测试剂优选包括检测外泌体CD171蛋白的qPCR引物,上游引物序列如SEQIDNO.1所示,下游引物序列如SEQIDNO.2所示。一种用于检测外泌体CD171蛋白的qPCR引物,上游引物序列如SEQIDNO.1所示,下游引物序列如SEQIDNO.2所示。一种肺癌诊断试剂盒,包含检测外泌体CD171蛋白mRNA表达量的实时荧光PCR检测试剂。所述的试剂盒优选包括用于检测外泌体CD171蛋白编码基因的qPCR引物,检测内参β-Actin基因的qPCR引物,以及其他实时荧光PCR常用的试剂。所述的检测外泌体CD171蛋白编码基因的qPCR引物上游引物序列优选如SEQIDNO.1所示,下游引物序列优选如SEQIDNO.2所示。有益效果:本专利技术公开了一种外泌体CD171蛋白,通过检测CD171的蛋白表达水平,可用于诊断病人是否患有肺癌。经过实验证明,CD171蛋白可以有效区分肺癌和健康人。通过检测血液中外泌体CD171蛋白的表达可以用来肺癌患者的辅助诊断,为临床医生采取诊疗方案提供一定的支持。外泌体CD171蛋白是一种新型的肿瘤检测标志物,与传统的标志物相比,CD171蛋白微创操作,易于检测,相对稳定,提高了肺癌检测的敏感性和特异性。附图说明图1显示通过实时荧光PCR检测外泌体CD171的表达情况。图2显示利用ROC曲线分析外泌体CD171区分健康人组和肺癌患者组的敏感性和特异性。具体实施方式实施例1实时荧光PCR检测CD171蛋白的表达1、TRIzol法提取总RNA和总蛋白血液样本使用TRIzol法提取总RNA,RNA提取后,取1μL用1%的琼脂糖凝胶电泳检测,并用Nanodrop2000(ThermoScientific)检测浓度,并评估RNA质量,将260/280比值在1.8-2.1之间的RNA根据RTreagentKit(TaKaRa)反转录试剂盒说明书反转录成为cDNA,合成的cDNA在-20℃条件下保存备用。2、引物的设计根据Genbank查询得知CD171和内参β-Actin的基因序列,利用软件Primer5.0设计扩增引物。3、实时荧光定量PCR检测CD171的表达(1)反应体系:见下表(2)反应条件:见下表(4)统计学分析根据得到的Ct值,通过2-△△Ct法进行计算CD171在以β-Actin为内参的相对表达水平的数值。(5)结果根据实时荧光定量PCR结果得到的Ct值,通过2-△△Ct法进行计算结果(图1)与健康个体相比,CD171在肺癌患者中表达量较高,具有统计学意义。实施例2分析外泌体CD171蛋白的敏感性和特异性ROC曲线分析显示,CD171在区分健康人组和肺癌患者组时,其AUC值为0.8574,其最佳临界点时的敏感性为71%,特异性为66%(图2),结果显示外泌体CD171作为潜在的肺癌检测标志物具有较好的灵敏性和特异性。序列表<110>南京求臻基因科技有限公司<120>一种肺癌检测标志物及诊断试剂盒<160>4<170>SIPOSequenceListing1.0<210>1<211>20<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>1tacgagatccacttgtttaa20<210>2<211>19<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>2actcacaaagccgatgaac19<210>3<211>19<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>3cacccgcgatacaaccttc19<210>4<211>19<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>4ccatacccaccatcacacc19本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.外泌体CD171蛋白作为检测靶点在制备肺癌诊断试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.外泌体CD171蛋白作为检测靶点在制备肺癌诊断试剂盒中的应用。2.检测外泌体CD171蛋白表达量的试剂在在制备肺癌诊断试剂盒中的应用。3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于所述的检测外泌体CD171蛋白表达量的试剂包括:检测外泌体CD171蛋白mRNA表达量的实时荧光PCR检测试剂;或者直接检测外泌体CD171蛋白表达量的westernblot检测试剂。4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于所述的检测外泌体CD171蛋白mRNA表达量的实时荧光PCR检测试剂包括检测外泌体CD171蛋白的qPCR引物,上游引物序列如SEQIDNO.1所示,下游引物序列如SEQIDNO.2所示。5.一种用...

【专利技术属性】
技术研发人员:李曼曼段小红承康平丁蕊张磊王东亮周启明
申请(专利权)人:南京求臻基因科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏,32

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