检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段及其筛选方法与应用技术

本发明专利技术提供了检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段及其筛选方法与应用，属于生物检测和蛋白质技术领域。本发明专利技术提供的检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段，时效性高，能特异性的针对CYP2E1酶进行检测，专属性较强；能较好的避免被干扰，将特征肽段应用到检测大鼠CYP2E1酶中，效果明显；检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段的筛选方法，通过本筛选方法，能获得特异性的片段。

【技术实现步骤摘要】
检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段及其筛选方法与应用
本专利技术涉及生物检测和蛋白质
，具体而言，涉及检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段及其筛选方法与应用。
技术介绍
肝脏中细胞色素P450(cytochromeP450，CYP450)是许多内源性和外源性物质进行Ⅰ相代谢的主要酶类，其中CYP1A、CYP2C、CYP2D、CYP2E和CYP3A五大类参与了临床70～80％常用药物的代谢。CYP2E1是CYP2E家族中报道对药物影响最大的代谢酶。对于CYP2E1酶作用的药物，不同个体对同一药物剂量反应不同，甚至导致不可预见的药物不良反应及毒性，主要表现在酶基因多态性和含量差异性两个方面。其基因多态性已被广泛任何，但由于现有蛋白定量方法的缺陷，含量差异在药物对人体的作用研究相对较少。不同的研究机构对代谢酶的定量方法不全相同，主要包括定量RT-PCR、半定量RT-PCR从转录水平对mRNA定量分析，或以免疫组织化学技术(IHC)、免疫印迹法(WesternBlot)从翻译水平对相应蛋白质表达水平定量。但是由于mRNA的翻译水平调控以及蛋白质的翻译后转移和修饰受多种因素的影响，因此测得的m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段，其特征在于，所述特征肽段包括定量肽段、标记肽段和延长肽段；所述定量肽段包括第一定量肽段和第二定量肽段，所述第一定量肽段和所述第二定量肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑2所示；所述标记肽段包括第一标记肽段和第二标记肽段，所述第一标记肽段和所述第二标记肽段为同位素标记；所述延长肽段包括第一延长肽段和第二延长肽段，所述第一延长肽段和所述第二延长肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3‑4所示。

【技术特征摘要】
1.检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段，其特征在于，所述特征肽段包括定量肽段、标记肽段和延长肽段；所述定量肽段包括第一定量肽段和第二定量肽段，所述第一定量肽段和所述第二定量肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.1-2所示；所述标记肽段包括第一标记肽段和第二标记肽段，所述第一标记肽段和所述第二标记肽段为同位素标记；所述延长肽段包括第一延长肽段和第二延长肽段，所述第一延长肽段和所述第二延长肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.3-4所示。2.根据权利要求1所述的检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段，其特征在于，所述第一标记肽段的同位素标记方式为：FINL(13C615N1)VPSNLPHEATR；所述第二标记肽段的同位素标记方式为GII(13C615N1)FNNGPTWK。3.如权利要求1或2所述的检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段在CYP2E1酶定量检测的应用。4.检测大鼠CYP2E1酶的特征肽段的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：取大鼠CYP2E1酶液待测样本进行SDS-PAGE凝胶电泳；电泳结束后用水漂洗所述SDS-PAGE凝胶，再用固定液处理，得到固定液凝胶；用考马斯亮蓝染色所述固定液凝胶得到染色凝胶，用水清洗所述染色凝胶并用脱色液处理；将染色的蛋白条带切下，并切碎成胶粒，再加入脱色液处理后用乙腈脱水，用还原液水浴处理后，加入蛋白保护液处理后，再次加入250μL所述还原液室温处理，得到还原胶粒；干燥所述还原胶粒，并加入酶处理18h，并通过ZipTipC18柱脱盐处理，得到脱盐样本；将所述脱盐样本干燥浓缩并加入0.1％甲酸溶液混悬，得到样本混悬液；将所述样本混悬液通过液相色谱系统和质谱系统分析，获得大鼠CYP2E1酶的体征肽段及其氨基酸序列，分析并获得目标肽段信息，合成得到特征肽段。5.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：余鹏，邱朝辉，孟凡奇，蒋蕾，丁尧，张可，
申请(专利权)人：余鹏，
类型：发明
国别省市：湖南,43