The invention provides a preparation method of tacrolimus coarse crystal, acidifying its fermentation broth, adsorbing resin, filtering and removing supernatant, then rinsing and removing mycelium with water to obtain tacrolimus-rich resin, and then stirring and soaking with acetone to obtain tacrolimus soaking solution and concentrating it into concentrate under vacuum. Mechanical solvent stirring, solid removal, and then static removal of the water layer to obtain organic solution; add saturated sodium bicarbonate solution for washing, and remove the water layer, get organic phase, wash with purified water to neutral, then stratify to obtain organic solution layer, and finally decompression and concentration of organic solution to obtain black-brown oil. Tacrolimus crystals were obtained by adding polar solvents, stirring and dissolving, adding non-polar solvents, and filtering after crystallization. Crude Tacrolimus products were obtained by vacuum drying. The method has the advantages of low production cost, simple process, convenient operation, and is suitable for industrial production.
【技术实现步骤摘要】
一种他克莫司粗晶的制备方法
本专利技术属于生物制药工程领域,涉及一种微生物药物的制备方法,特别涉及一种他克莫司粗晶的制备方法。
技术介绍
他克莫司(Tacrolimus,FK-506)是从S.tsukubaensis的发酵液中提取得到的大环内酯类强效免疫抑制剂,其免疫活性是环孢菌素A的10~100倍,在预防各种器官移植出现排斥反应的效果优于环孢菌素。他克莫司能减少肝肾移植受体的急、慢性排斥反应,患者使用后的细菌和病毒感染率也较环孢素治疗者低,尤其是他克莫司有较强的亲肝性,对肝移植的功效比环孢素强,而且FK-506和MMF(霉酚酸酯)及Pred(强的松)三联用药具有明显的协同作用,效果更好。他克莫司不仅可用于防止器官移植免疫反应的发生,还可用于治疗已发生的免疫反应及自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮,具有广阔的应用前景。目前,他克莫司一般采用微生物发酵生产,发酵液中除了他克莫司外,还有未利用完全的培养基、酸性化合物(如脂肪酸)、碱性物质(如生物碱,多肽,中性脂肪等脂溶性化合物)以及无机盐等,他克莫司在上述产物中的含量低,一般从发酵液中提取得到的黑褐色浓缩物为粘稠状,其中所含他克莫司的量低于40%,高效液相色谱(HPLC)测定纯度低于60%,而主杂子囊霉素及二氢他克莫司的含量高于15%。他克莫司在液体状态易降解,在粘稠状浓缩物中亦不利于保存和运输,因而通常都是将发酵所得的黑褐色浓缩物马上纯化成纯度较高的他克莫司晶体以方便储存和运输。然而黑褐色浓缩物要纯化成纯度较高的他克莫司晶体须经过柱层析等以系列繁杂的工序才能得到他克莫司晶体。有鉴于此,一种生产成本低廉、 ...
【技术保护点】
1.一种他克莫司粗晶的制备方法,其特征在于:将筑波链霉菌发酵产生的他克莫司发酵液采用如下步骤进行操作:(1)富集洗涤:将他克莫司发酵液酸化,树脂吸附;过滤除去上清液,接着用水冲洗菌丝体和树脂,去除菌丝体后得到富含他克莫司的树脂;(2)浸泡浓缩:将步骤(1)处理所得的富含他克莫司的树脂用丙酮搅拌浸泡,得到他克莫司浸泡液,减压浓缩成浓缩物;(3)萃取:加入有机溶剂至步骤(2)处理所得的浓缩物中,并搅拌,然后过滤或离心除去固体,再将所得溶液静置以使溶液分为水、有机溶液两层,并除去水层以获得有机溶液;(4)洗涤浓缩:加入饱和碳酸氢钠溶液至经过步骤(3)处理所得有机溶液中,所述饱和碳酸氢钠溶液与有机溶液体积比为0.1~1:1,对有机溶液进行洗涤,并除去水层,得到有机相,继续用纯化水洗涤到水层中性为止,然后分层以获得有机溶液层,最后将有机溶液减压浓缩,得到黑褐色油状物;(5)结晶:加入极性溶剂至经过步骤(4)处理所得的油状物中搅拌溶解,获得他克莫司溶液,其中,极性溶剂与所述油状物的体积比为0.1~0.5:1,接着加入非极性溶剂,其中,非极性溶剂与油状物的体积比为5~15:1,并在室温下放置20~3 ...
【技术特征摘要】
1.一种他克莫司粗晶的制备方法,其特征在于:将筑波链霉菌发酵产生的他克莫司发酵液采用如下步骤进行操作:(1)富集洗涤:将他克莫司发酵液酸化,树脂吸附;过滤除去上清液,接着用水冲洗菌丝体和树脂,去除菌丝体后得到富含他克莫司的树脂;(2)浸泡浓缩:将步骤(1)处理所得的富含他克莫司的树脂用丙酮搅拌浸泡,得到他克莫司浸泡液,减压浓缩成浓缩物;(3)萃取:加入有机溶剂至步骤(2)处理所得的浓缩物中,并搅拌,然后过滤或离心除去固体,再将所得溶液静置以使溶液分为水、有机溶液两层,并除去水层以获得有机溶液;(4)洗涤浓缩:加入饱和碳酸氢钠溶液至经过步骤(3)处理所得有机溶液中,所述饱和碳酸氢钠溶液与有机溶液体积比为0.1~1:1,对有机溶液进行洗涤,并除去水层,得到有机相,继续用纯化水洗涤到水层中性为止,然后分层以获得有机溶液层,最后将有机溶液减压浓缩,得到黑褐色油状物;(5)结晶:加入极性溶剂至经过步骤(4)处理所得的油状物中搅拌溶解,获得他克莫司溶液,其中,极性溶剂与所述油状物的体积比为0.1~0.5:1,接着加入非极性溶剂,其中,非极性溶剂与油状物的体积比为5~15:1,并在室温下放置20~30h,结晶后过滤除去液体,得到他克莫司晶体;(6)干燥:将获得的他克莫司晶体置于40~50℃减压干燥,得到的产品与...
【专利技术属性】
技术研发人员:张祝兰,王德森,连云阳,严凌斌,杨煌建,邱观荣,张引,黄洪祥,
申请(专利权)人:福建省微生物研究所,
类型:发明
国别省市:福建,35
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