The present invention discloses an experimental method for predicting the relevant targets of MiR 210 in glioma, which is characterized by the following steps: 1) U251 and U87 MG glioma cell lines are selected and cultured on D MEM high sugar medium with 10% fetal bovine serum and 1% penicillin or streptomycin, and divided into normal group and hypoxic group, respectively. Groups were cultured at 5% CO2 and 37 ~C, hypoxic groups were cultured at 2% O2, 5% CO2, 93% N2 and 37 ~C. Surgically resected glioblastoma specimens were selected and stored in 80 ~C refrigerator as control. 2) Tumor Suppressor protein chip was used to screen glioblastoma for decreased expression. Low protein, compared with normal brain tissue; At the same time, the cell line hypoxia group was used for protein chip experiment, and the normal group was used as control. According to DAVID database, the protein related to hypoxia of glioma was selected by using the results of cell line protein chip, and then the screening results and the results of glioblastoma samples were added. By contrast, the target proteins with the same expression trend were selected.
【技术实现步骤摘要】
MiR-210在胶质瘤中相关靶点预测的实验方法
本专利技术涉及MiR-210在胶质瘤中相关靶点预测的实验方法。
技术介绍
人脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,约占成人颅内肿瘤的40%-50%。目前临床主要采用手术并辅以放疗、化疗等综合治疗。但胶质瘤病人(尤其是胶质母细胞瘤)的治疗效果仍不理想,病死率和复发率仍旧很高,是预后最差的肿瘤之一。近年来,尽管显微神经外科技术以及相关辅助治疗手段有了极大的提高,但治疗效果依然不佳,这主要与人脑胶质瘤快速的生长、浸润、侵袭及耐药有关,但其中的机制还不清楚。探讨胶质瘤的发病机理、明确其如何快速生长和侵袭的机制,一直是神经外科研究领域比较热门的话题。目前的研究来看,肿瘤侵袭性主要涉及以下三个方面:(1)肿瘤细胞的黏附与迁移;(2)细胞外基质的降解(3)肿瘤新生血管的生成。胶质瘤的快速生长往往使肿瘤细胞处于缺氧的环境下,在缺氧环境下胶质瘤如何生长并且怎样继续向周围正常脑组织侵袭浸润的,目前的研究提示可能与肿瘤新生血管的生成有关,目前的研究提示HIF-1通路在缺氧环境下调节肿瘤新生血管的生成中起重要作用。缺氧诱导因子-l(HypoxiainducibIefactor-l,HIF-l)是由Semenzal993年在缺氧诱导的细胞核提取物中发现的一种转录因子,缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体细胞中,由HIF-lα和HIF-lα构成异二聚体,其中HIF-lα是主要的氧调节亚基[5]。HIF-lα可和缺氧适应有关基因如血管内皮生长因子(VEGF)等的启动子或增强子上的HIF-l结合位点结合,促进这些基因的转录。人类实体肿瘤中常存在 ...
【技术保护点】
1.MiR‑210在胶质瘤中相关靶点预测的实验方法,其特征为,括如下步骤:1)选取U251及U87‑MG胶质瘤细胞系,应用加入10%胎牛血清和1%青霉素或者链霉素的D‑MEM高糖培养基进行培养,分别分成正常组和低氧组,正常组置于5%CO2、37℃进行正常培养,低氧组置于2%O2、5%CO2、93%N2、37℃进行培养;选取手术切除的胶质母细胞瘤标本,以正常组织为对照,标本储存在‑80℃冰箱;2)利用Tumor Suppressor蛋白芯片技术筛选出胶质母细胞瘤中表达降低的蛋白,以正常脑组织为对照;同时应用细胞系中低氧组细胞进行蛋白芯片实验,以正常组为对照,根据DAVID数据库,利用细胞系蛋白芯片的结果选出和胶质瘤缺氧相关的蛋白,然后把筛选结果和胶质母细胞瘤标本中的结果进行对比,选出表达趋势一致的目标靶点蛋白,通过TargetScan靶点预测软件初步确定胶质瘤中与miR‑210密切相关的靶点。
【技术特征摘要】
1.MiR-210在胶质瘤中相关靶点预测的实验方法,其特征为,括如下步骤:1)选取U251及U87-MG胶质瘤细胞系,应用加入10%胎牛血清和1%青霉素或者链霉素的D-MEM高糖培养基进行培养,分别分成正常组和低氧组,正常组置于5%CO2、37℃进行正常培养,低氧组置于2%O2、5%CO2、93%N2、37℃进行培养;选取手术切除的胶质母细胞瘤标本,以正常组织为对照,标本储存在-80℃冰箱;2)利用TumorSuppressor蛋白芯片技术筛选出胶质母细胞瘤中表达降低的蛋白,以正常脑组织为对照;同时应用细胞系中低氧组细胞进行蛋白芯片实验,以正常组为对照,根据DAVID数据库,利用细胞系蛋白芯片的结果选出和胶质瘤缺氧相关的蛋白,然后把筛选结果和胶质母细胞瘤标本中的结果进行对比,选出表达趋势一致的目标靶点蛋白,通过TargetScan靶点预测软件初步确定胶质瘤中与miR-210密切相关的靶点。2.如权利要求1所述的MiR-210在胶质瘤中相关靶点预测的实验方法,其特征为,包括如下步骤:将步骤1替换为:收集手术切除的初次诊断为胶质母细胞瘤患者肿瘤组织标本,洗去血凝块及电凝的坏死的组织,...
【专利技术属性】
技术研发人员:蔺玉昌,苗增利,徐幸,秦琪珑,
申请(专利权)人:无锡市第二人民医院,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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