一种软脂固定液的制备方法技术

本申请涉及一种软脂固定液的制备方法，属于测试用样品制备技术领域。以甲醛、卵磷脂、无水乙醇和丙酮作为原料，将无水乙醇、甲醛和丙酮搅拌均匀后，加入卵磷脂，搅拌并使其溶解，形成的固定液中上述各原料的浓度分别为：甲醛50~150ml/L，卵磷脂30~70g/L，无水乙醇200~300 ml/L，丙酮200~300ml/L。将本申请应用于软脂固定液的制备，特别是癌症类样本中淋巴结解剖取材中的固定，不仅保证了淋巴结的及时充分固定，减少病理科医生的解剖取材时间，还确保了淋巴结细胞形态保存完整，无变形，免疫组化效果好，有效提高了淋巴结检出数目和精确淋巴结转移阳性率。

A preparation method of soft grease stationary liquid

The present application relates to a preparation method of a soft grease stationary liquid, belonging to the technical field of sample preparation for testing. With formaldehyde, lecithin, absolute ethanol and acetone as raw materials, absolute ethanol, formaldehyde and acetone were stirred evenly, lecithin was added and dissolved. The concentration of the above-mentioned raw materials in the fixed solution was 50-150 ml/L of formaldehyde, 30-70 g/L of lecithin, 200-300 ml/L of absolute ethanol and 200-300 ml/L of acetone, respectively. The application of this application in the preparation of soft-fat fixative, especially in the fixation of lymph node dissection in cancer samples, not only ensures the timely and sufficient fixation of lymph nodes, reduces the time of pathologist's dissection, but also ensures the integrity of lymph node cell morphology, no deformation, good immunohistochemical effect and effective extraction. The number of lymph nodes detected and the positive rate of accurate lymph node metastasis were increased.

【技术实现步骤摘要】
一种软脂固定液的制备方法
本申请涉及一种软脂固定液的制备方法，属于测试用样品制备

技术介绍
癌症转移的主要途径为淋巴道，癌细胞经淋巴回流转移至淋巴结，不但造成局部组织的破坏，而且在淋巴结隐匿，成为其它脏器转移的发源地，切除包括原发灶和引流区域淋巴结的根治性手术是癌症患者最为重要的手术治疗方式。癌症根治性手术后的淋巴结解剖与病理取材是临床诊疗的重要步骤之一。有研究显示，充分的淋巴结根治性切除能大幅度降低癌症相关事件，即使所有淋巴结病理检查均无转移，对于患者的远期存活率也有重要影响。淋巴结的转移状态往往是癌症患者的独立预后因素，切除的淋巴结数越多，患者的复发率和病死率越低，这种趋势也体现在有淋巴结转移的患者中。有研究证实，转移的淋巴结最小直径为0.4cm，淋巴结有无转移单凭肉眼大体特征很难判断。显然，充分而确切地淋巴结检查可以降低淋巴结假阴性的发生率，Axelsson等检查了31679例乳腺癌患者的手术标本，提示切除的淋巴结越多，淋巴结的转移率越高；与以10-14枚淋巴结取材为基数与以20枚淋巴结取材作为基数相比，能使直径1-5mm的淋巴结阳性率由14.2％升高到25.9％，使直径11-20mm淋巴结阳性率由38.6％升高到90.0％。癌症区域淋巴结切除个数及转移阳性率是影响患者预后的重要因素，也是制定治疗方案的重要依据之一，全数淋巴结取材对确定癌症分期、评估预后以及制定个体化治疗方案具有重要意义。目前，癌症根治术标本的淋巴结解剖取材大都沿用传统方法，即对新鲜或福尔马林固定的手术标本，病理医师采用刀切手摸的方法，根据经验判断通常包裹于脂肪组织中的淋巴结并取材。而淋巴结取材过程中最困难的就是脂肪组织过多，导致取得淋巴结数目不足，使得临床病理分期不准确，严重影响病人手术后的治疗方案，尤其是小于0.5cm的小淋巴结极易漏检，而这些小淋巴结同样存在转移癌的可能。淋巴结解剖取材的数量、质量以及所需时间受脂肪含量、解剖技术甚至操作人员的责任心等多种因素的影响。临床实际工作中急需能够溶解妨碍淋巴结暴露和判断的脂肪组织，并能保证淋巴结充分固定的方法。本研究即为解决这一临床急需的问题而设计。虽然已有肿瘤病理学家指出淋巴结收获可能需要考虑脂肪溶解技术，近年来研究主要集中于脂肪溶解液在乳腺癌腋窝淋巴结清扫术中，以保护淋巴管，防止传统腋清扫手术造成的上肢麻痹、疼痛、提肩运动障碍、上肢水肿、腋窝及胸部皮下积液等并发症。关于包括常规乳腺癌改良根治术、胃及结肠癌根治术在内的临床常见癌症根治性手术后标本取材用的脱脂固定方法鲜见报道。张琴琴等将手术中的脂肪溶解液应用于乳腺常规改良根治术的新鲜标本，并与常规解剖取样方法比较，提示用脂肪溶解液预处理标本可增加淋巴结检出的数目、减低解剖难度以及缩短解剖时间。但是该方法存在的主要问题是不适用于临床更为常见的固定标本。基于此，做出本申请。
技术实现思路
针对现有淋巴结检出技术所存在的上述缺陷，本申请提供一种全新的软脂固定液的制备方法，该软脂固定液不仅兼具了溶脂、固定、淋巴结染色的多重作用，在溶解经处理过的脂肪组织的同时，保证淋巴结结构的完整和最佳染色效果。为实现上述目的，本申请采取的技术方案如下：一种软脂固定液的制备方法，以甲醛、卵磷脂、无水乙醇和丙酮作为原料，将无水乙醇、甲醛和丙酮搅拌均匀后，加入卵磷脂，搅拌并使其溶解，形成的固定液中上述各原料的浓度分别为：甲醛50～150ml/L，卵磷脂30～70g/L，无水乙醇200～300ml/L，丙酮200～300ml/L；所述原料还包括有去氧胆酸，卵磷脂添加后加入去氧胆酸并搅拌至溶解，形成的固定液中去氧胆酸浓度为30～70g/L。进一步的，作为优选：所述原料还包括有甲醇，形成的固定液中甲醇浓度为200-300ml/L。所述原料还包括有美兰，卵磷脂添加后加入美兰粉末并搅拌至溶解，形成的固定液中美兰浓度为0.05-0.15g/L。所述原料还包括有PBS溶液，无水甲醇、丙酮和甲醛依次加入PBS溶液中并搅拌均匀，PBS溶液添加至在固定液中浓度为100-200ml/L。所述原料还包括有去氧胆酸、PBS溶液，无水甲醇、丙酮和甲醛依次加入PBS溶液中并搅拌均匀后，依次加入卵磷脂和去氧胆酸，搅拌至溶解，所形成的固定液中，去氧胆酸浓度为30～70g/L，PBS溶液添加至在固定液中浓度为100-200ml/L。所述原料还包括有去氧胆酸、甲醇、PBS溶液，无水甲醇、甲醇、丙酮和甲醛依次加入PBS溶液中并搅拌均匀后，依次加入卵磷脂和去氧胆酸，搅拌至溶解，所形成的固定液中，去氧胆酸浓度为30～70g/L，甲醇浓度为200-300ml/L，PBS浓度为100-200ml/L。所述原料还包括有去氧胆酸、PBS溶液和美兰，无水甲醇、丙酮和甲醛依次加入PBS溶液中并搅拌均匀后，依次加入卵磷脂、去氧胆酸和美兰，搅拌至溶解，所形成的固定液中，去氧胆酸浓度为30～70g/L，PBS溶液浓度为100-200ml/L，美兰浓度为0.05-0.15g/L。所述原料还包括有去氧胆酸、甲醇、PBS溶液和美兰，无水甲醇、甲醇、丙酮和甲醛依次加入PBS溶液中并搅拌均匀后，依次加入卵磷脂、去氧胆酸和美兰，搅拌至溶解，所形成的固定液中，去氧胆酸浓度为30～70g/L，甲醇浓度为200-300ml/L，PBS溶液浓度为100-200ml/L，美兰浓度为0.05-0.15g/L。更优选的，所述固定液中，各组分浓度分别为：甲醛100ml/L，卵磷脂50g/L，去氧胆酸47.5g/L，无水乙醇250ml/L，甲醇250ml/L，丙酮250ml/L，PBS溶液1×，美兰0.1g/L。上述PBS溶液，是将pbs粉末加入蒸馏水中搅拌溶解而成，或者由7×PBS溶液(浓度为70mmol/L)稀释形成。配制过程中，先称取无水乙醇、丙酮以及甲醛(必要时额外增加甲醇、PBS溶液)搅拌均匀后，加入卵磷脂(必要时增添去氧胆酸、美兰粉末)，搅拌使其溶解，即可。将上述软脂固定液处理标本，其优点主要体现为：(1)在应用于癌症常规根治性手术后的标本解剖与取材时，在有效溶解软化脂肪组织的同时，还保证了淋巴结的及时充分固定。(2)提高了淋巴结的检出数目，精确淋巴结转移阳性率，也减少了病理科医生的解剖取材时间，在当下病理医生极为短缺的现状下，节省人力资源更具重要而现实的意义。(3)为后期病理学科的室外质量控制提供了可能，商品化后在临床广泛推广应用中的作用尤其突出。附图说明图1为本申请所制备软脂固定液处理前后的脂肪组织，其中，A为处理前的新鲜脂肪组织，B为处理后的脂肪；C为转移癌放大40倍，D为微小转移癌放大200倍；图2为乳腺组织采用本申请所制备软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规HE染色及CD10、P63和PR免疫组化染色，×200；图3为甲状腺样本采用本申请所制备软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规HE染色及TTF-1、CD20和CD3免疫组化染色，×200；图4为肺组织标本采用本申请所制备软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规HE染色及CK、P63和TTF-1免疫组化染色，×本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种软脂固定液的制备方法，其特征在于：以甲醛、卵磷脂、无水乙醇和丙酮作为原料，将无水乙醇、甲醛和丙酮搅拌均匀后，加入卵磷脂，搅拌并使其溶解，形成的固定液中上述各原料的浓度分别为：甲醛50~150ml/L，卵磷脂30~70g/L，无水乙醇200~300 ml/L，丙酮200~300ml/L。

【技术特征摘要】
1.一种软脂固定液的制备方法，其特征在于：以甲醛、卵磷脂、无水乙醇和丙酮作为原料，将无水乙醇、甲醛和丙酮搅拌均匀后，加入卵磷脂，搅拌并使其溶解，形成的固定液中上述各原料的浓度分别为：甲醛50~150ml/L，卵磷脂30~70g/L，无水乙醇200~300ml/L，丙酮200~300ml/L。2.如权利要求1所述的一种软脂固定液的制备方法，其特征在于：所述原料还包括有去氧胆酸，卵磷脂添加后加入去氧胆酸并搅拌至溶解，形成的固定液中去氧胆酸浓度为30~70g/L。3.如权利要求1所述的一种软脂固定液的制备方法，其特征在于：所述原料还包括有甲醇，形成的固定液中甲醇浓度为200-300ml/L。4.如权利要求1所述的一种软脂固定液的制备方法，其特征在于：所述原料还包括有美兰，卵磷脂添加后加入美兰粉末并搅拌至溶解，形成的固定液中美兰浓度为0.05-0.15g/L。5.如权利要求1所述的一种软脂固定液的制备方法，其特征在于：所述原料还包括有PBS溶液，无水甲醇、丙酮和甲醛依次加入PBS溶液中并搅拌均匀，PBS溶液添加至在固定液中浓度为100-200ml/L。6.如权利要求1所述的一种软脂固定液的制备方法，其特征在于：所述原料还包括有去氧胆酸、PBS溶液，无水甲醇、丙酮和甲醛依次加入PBS溶液中并搅拌均匀后，依次加入卵磷脂和去氧胆酸，搅拌至溶解，所形成的...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯传玲，蒋雄玲，沈增丽，魏建国，徐峰，孙爱静，
申请(专利权)人：绍兴市人民医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33