【技术实现步骤摘要】
基于微流控芯片检测总甲状腺素TT4试剂盒及制备和检测方法
本专利技术属于免疫检测领域，尤其是涉及一种基于微流控芯片检测总甲状腺素TT4试剂盒及制备和检测方法。
技术介绍
微流控芯片技术是以微管道网络为结构特征，采用微加工技术在几平方厘米大小的芯片上刻蚀出微管道网络和其它功能单元，从而制备出包含进样、反应、分离、检测于一体的快速、高效、低耗的微型分析装置。微流控芯片在检测平台中具有试剂消耗少，反应时间短，自动化程度高的特点。在目前的研究中，芯片的微型化却给前期样品分离和配套集成带来不少困难，同时在样品固定，洗脱等方面也存在不少问题。微流控芯片检测主要有以下几点优势：1)器件微小且没有对人为操作，试剂消耗量很少；2)通过设计不同微流路实现在同一芯片中不同试剂的混合反应，减少繁琐的生物实验操作缩短检测所需时间；3)微流控芯片可与电路接合实现自动化控制；4)微流控芯片以及配套检测设备体积小巧，易于便携。总甲状腺素(TT4)是一种由甲状腺合成并分泌的激素，也是构成甲状腺、脑垂体和下丘脑参与的负反馈机制的完整性不可缺少的成分。对合成代谢有影响作用，T4有两分子的二碘酪氨酸(D...
【技术保护点】
1.一种基于微流控芯片的总甲状腺素TT4试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)微流控芯片包被：取甲状腺素T4抗体PAB
【技术特征摘要】
1.一种基于微流控芯片的总甲状腺素TT4试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)微流控芯片包被：取甲状腺素T4抗体PAB<T4>SIgG1mg，加50mMpH9.6的CB缓冲液至1mL，按照单个芯片25uL加入微流控芯片反应腔室内，温浴2小时后对芯片进行清洗；(2)荧光微球标记：取总甲状腺素TT4抗原Thyroxine加入至荧光微球溶液中，并涡旋混匀，其中，荧光微球是经过活化处理的，反应结束后，加入终止液对反应进行终止，后离心清洗，加入封闭液进行封闭，封闭后的荧光微球进行离心清洗，使用微球储存液进行保存；(3)微流控芯片组装：向微流控芯片的反应腔室预先进行封闭处理，封闭液添加后在烘箱中进行烘干处理，在封闭后的中层芯片背部反应腔室下部内加入所述步骤(2)中的荧光微球溶液，于真空烘箱中真空干燥，荧光微球在芯片中呈现小液滴形态，不发生扩散；芯片准备完毕后采用超声键合的方式，依据芯片结构依次将滤血垫，加样密封垫，导电橡胶，吸水纸以及密封圈加入芯片内部，将三层芯片按照超声键合线完成合并；(4)定标品的制备：定标品由A组分和B组分构成；根据抗原浓缩液的估算浓度，用定标品稀释液将抗原浓缩液稀释作为定标品抗原母液备用；定标品稀释液即为定标品A组分，浓度为0.5ng/mL，2-8℃保存；定标品B组分：用定标品稀释液将总甲状腺素TT4抗原母液稀释至2ng/mL，2-8℃保存；(5)得基于微流控芯片的总甲状腺素TT4试剂盒。2.根据权利要求1所述的基于微流控芯片的总甲状腺素TT4试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述荧光微球活化处理的方法为：称取EDC使用Mes缓冲液配置成为10mg/mL的溶液，后使用Mes缓冲液进一步稀释成为1mg/mL的溶液，量取1mg羧基荧光微球，微球固型物含量为10mg/mL，体积计算为100μL，置于EP管中，加入0.45mLMes缓冲液稀释，从1mg/mL的EDC活化剂溶液中取5uL迅速加入微球溶液中，涡旋混匀，于超声清洗器中超声10min，后置于滚轴混匀器上震荡反应20min，总反应时间为30min。3.根据权利要求1所述的基于微流控芯片的总甲状腺素TT4试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述封闭液含有2％BSA、0.5％Tween-20、10％海藻糖以及0.2％甘露醇。4.根据权利要求3所述的基于微流控芯片的总甲状腺素TT4试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，封闭处理的方法为：向微流控芯片的反应腔室预先进行封闭处理，其中第二层芯片的背面反应腔室内需要添加6μL+6μL的封闭液进行封闭，第三层正面的反应腔室内，分别需要添加5μL+5μL+5μL的封闭液进行封闭。5.根据权利要求1所述的基于微流控芯片的...
【专利技术属性】
技术研发人员：许行尚，杰弗瑞·陈，朱宗哲，
申请(专利权)人：南京岚煜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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