一种禽用DNA疫苗组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种禽用DNA疫苗组合物，该组合物由DNA疫苗、抗体、纳米粒子和离子缓冲液组成，所述的DNA疫苗为编码抗原性蛋白的DNA质粒，所述的抗体为相对应的保护性抗体，所述的纳米粒子能包裹抗体起到缓释作用同时包裹DNA提升其细胞转染效率，所述的离子缓冲液能在体液环境中稳定所述抗体的等电点同时稳定所述纳米粒子的疏水性。该DNA疫苗组合物兼具DNA疫苗和抗体治疗的优点，同时规避了二者合用的缺点，兼具治疗与预防的功效，具备机体免疫应答产生快，持续期长，交叉保护广，使用方便等诸多优点。

A DNA Vaccine Composition for Poultry

The invention discloses a DNA vaccine composition for poultry. The composition consists of DNA vaccine, antibody, nanoparticle and ion buffer. The DNA vaccine is a DNA plasmid encoding antigenic protein, and the antibody is a corresponding protective antibody. The nanoparticle can wrap the antibody for slow release and DN at the same time. A enhances the efficiency of cell transfection, and the ion buffer can stabilize the isoelectric point of the antibody and the hydrophobicity of the nanoparticles in the body fluid environment. The DNA vaccine composition has the advantages of both DNA vaccine and antibody therapy, while avoiding the disadvantages of the combination of the two, and has the efficacy of both treatment and prevention. It has many advantages such as fast generation of immune response, long duration, wide cross protection, convenient use and so on.

【技术实现步骤摘要】
一种禽用DNA疫苗组合物
本专利技术属于生物
，尤其是涉及一种禽用生物免疫制剂。
技术介绍
现代工厂化肉禽养殖周期一般为40-60天，由于肉禽生产速度快、养殖密度过大，易反复爆发大规模病毒性传染疾病。抗体治疗能在短时间内起到防治病毒性疾病的效果，成为病毒性疾病爆发期间工厂化肉禽养殖首选和必选的治疗手段，但是抗体存在持续期短(一般为5-7天，此后抗体治疗效果会急剧衰减)、缺乏免疫刺激、在一个病毒性疾病爆发周期内需多次注射等缺点，为工厂化养殖带来高额的医疗成本和繁重的体力劳动。为此，有人提出合用抗体和疫苗，在抗体治疗的同时进行疫苗免疫以期延长治疗周期，但抗体和常规疫苗极易发生抗体抗原结合反应，使二者效果皆无，且常规疫苗免疫要达到完美的防治效果，至少需要在基础免疫的基础上完成一次加强免疫，仍不能显著降低劳动强度。DNA疫苗，又称核酸疫苗或基因疫苗，是指把携带编码外源抗原基因的DNA(通常是质粒)直接导入体内，通过抗原基因表达产物刺激机体产生特异性免疫反应达到预防和治疗目的。其与抗体合用能有效解决抗体抗原结合反应的弊端，且在肉禽养殖周期内无需进行加强免疫就能达到良好的防治效果，但是其刺激机体产生免疫应答的周期较长，一般需要21天左右(此后，DNA疫苗方具备治疗作用)，和抗体合使用时，存在10天左右的免疫空白期为解决上述问题，本专利技术提供一种禽用抗体与DNA疫苗组合物，通过增加免疫刺激物增强并延长了抗体治疗周期的同时，改变组合物辅佐剂，缩短DNA疫苗的免疫应答周期，填补常规抗体与DNA疫苗组合物的防治空档期。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决DNA疫苗与抗体合用存在防治空档期的缺点，提供一种使用方便快捷、安全有效的DNA疫苗组合物，该DNA疫苗组合物兼具DNA疫苗和抗体治疗的优点，同时规避了二者合用的缺点，兼具治疗与预防的功效，具备机体免疫应答产生快，持续期长，交叉保护广，使用方便等诸多优点。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种禽用DNA疫苗组合物，由DNA疫苗、抗体、纳米粒子和离子缓冲液组成；其中所述的DNA疫苗为编码抗原性蛋白的DNA质粒，所述的抗体为相对应的保护性抗体，所述的纳米粒子能包裹抗体起到缓释作用同时包裹DNA提升其细胞转染效率，所述的离子缓冲液能在体液环境中稳定所述抗体的等电点同时稳定所述纳米粒子的疏水性。更进一步的，所述的禽用DNA疫苗组合物是将所述的纳米粒子和离子缓冲液配制成专用缓冲液后，加入处方比例的抗体和DNA疫苗混合均匀后除菌处理得到的。更进一步的，所述的编码抗原性蛋白的DNA质粒上连接有CpG序列。更进一步的，所述的抗体为与编码抗原性蛋白相对应的单克隆抗体、卵黄抗体或阳性血清分离抗体中的一种或多种。更进一步的，所述的抗体优选为与编码抗原性蛋白相对应的卵黄抗体。更进一步的，所述的纳米粒子能作为所述DNA质粒表达产物的免疫刺激物。更进一步的，所述的纳米粒子优选为壳聚糖，所述的离子缓冲液为中性盐溶液，优选为NaCl溶液。更进一步的，所述的壳聚糖的用量占所述禽用DNA疫苗组合物的1％-5％。更进一步的，所述NaCl在所述禽用DNA疫苗组合物中的浓度为0.5-2M。更进一步的，所述的壳聚糖的用量占所述禽用DNA疫苗组合物的2％，所述NaCl在所述禽用DNA疫苗组合物中的浓度为1.2M。采用上述技术方案，本专利技术的作用机理在于：纳米粒子在中性弱偏酸(6.00＜pH＜7.0)的环境中在离子缓冲液的作用下带正电，IgG抗体在该条件下带负电，纳米粒子能与抗体聚集并作为抗体缓释剂，在一定程度上延长抗体的作用时间；同时DNA疫苗由于携带CpG序列，能够刺激并激活机体的免疫系统，从而增强抗体的治疗效果；在合适的离子强度下，DNA疫苗的双螺旋结构由于疏水作用而更为紧密，粒径更小，有利于DNA疫苗进入机体细胞；同时纳米粒子在与抗体蛋白形成聚合物的过程中包覆DNA质粒，由于纳米粒子携带正电，与带负电的机体细胞更易吸附结合，从而有利于DNA质粒进入机体细胞，从而提高DNA质粒的转染效率，缩短DNA疫苗的效应周期；在DNA疫苗成功转染并表达翻译成相应的抗原后，纳米粒子与被翻译的抗原结合的同时作为免疫佐剂，通过破坏溶酶体膜的方式携带抗原进入胞浆，快速引发交叉呈递，从而缩短DNA疫苗的免疫周期；同时DNA质粒携带的CpG序列作为免疫增强剂提高了DNA疫苗的抗体水平。采用上述技术方案，本专利技术的技术优势在于：1)将抗体的有效防治时间由5-7天延长至12-14天；2)将DNA疫苗的效应时间由21天左右缩短至12-16天；3)有效填补常规抗体与DNA疫苗组合物的免疫空白期；4)治疗效果显著提高，保护率提高10-20％。附图说明图1：I群4型禽腺病毒DNA疫苗组合物的免疫效力试验图中：空白对照组为每羽受试鸡肌注1ml生理盐水；DNA疫苗组合物组为每羽受试鸡肌注1mlDNA疫苗组合物；不加专用缓冲液DNA疫苗和抗体组为每羽受试鸡肌注1ml，其中只含有30ugDNA疫苗和含量为1：16的卵黄抗体，无专用缓冲液；DNA疫苗组为每羽受试鸡肌注1mlDNA疫苗，其中DNA疫苗含量为30ug；抗体组为每羽受试鸡肌注1ml效价为AGP＝1:16的卵黄抗体。图2：I群4型禽腺病毒DNA疫苗组合物的治疗试验图中：空白对照组为每羽受试鸡肌注1ml生理盐水；DNA疫苗组合物组为每羽受试鸡肌注1mlDNA疫苗组合物；不加专用缓冲液DNA疫苗和抗体组为每羽受试鸡肌注1ml，其中只含有30ugDNA疫苗和含量为1:16的卵黄抗体，不加专用缓冲液；抗体组为每羽受试鸡肌注1ml效价为AGP＝1:16的卵黄抗体；DNA疫苗组为每羽受试鸡肌注1mlDNA疫苗，其中DNA疫苗含量为30ug；专用缓冲液对照组为每羽受试鸡肌注1ml专用缓冲液。图3：禽流感DNA疫苗组合物的免疫效力试验图中：空白对照组为每羽受试鸡肌注1ml生理盐水；DNA疫苗组合物组为每羽受试鸡肌注1mlDNA疫苗组合物；不加专用缓冲液DNA疫苗和抗体组为每羽受试鸡肌注1ml，其中只含有30ugDNA疫苗和含量为1:256的单克隆抗体，无专用缓冲液；DNA疫苗组为每羽受试鸡肌注1mlDNA疫苗，其中DNA疫苗含量为30ug；抗体组为每羽受试鸡肌注1ml效价为AGP＝1:256的单克隆抗体。图4：小鹅瘟DNA疫苗组合物的免疫效力试验图中：空白对照组为每羽受试鹅肌注1ml生理盐水；DNA疫苗组合物组为每羽受试鹅肌注1mlDNA疫苗组合物；不加专用缓冲液DNA疫苗和抗体组为每羽受试鹅肌注1ml，其中只含有60ugDNA疫苗和含量为1:64的阳性血清抗体，无专用缓冲液；DNA疫苗组为每羽受试鹅肌注1mlDNA疫苗，其中DNA疫苗含量为60ug；抗体组为每羽受试鹅肌注1ml效价为AGP＝1:64的阳性血清抗体。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1I群4型禽腺病毒DNA疫苗组合物制备、安全性检测及免疫效力实验I群4型禽腺病毒DNA疫苗组合物是由DNA疫苗和抗体混合后加入专用缓冲液制备而成，其中DNA疫苗为利用常规生物技术手段制备的携带I群4型禽腺病本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种禽用DNA疫苗组合物，由DNA疫苗、抗体、纳米粒子和离子缓冲液组成，其特征在于：所述的DNA疫苗为编码抗原性蛋白的DNA质粒，所述的抗体为相对应的保护性抗体，所述的纳米粒子能包裹抗体起到缓释作用同时包裹DNA提升其细胞转染效率，所述的离子缓冲液能在体液环境中稳定所述抗体的等电点同时稳定所述纳米粒子的疏水性。

【技术特征摘要】
1.一种禽用DNA疫苗组合物，由DNA疫苗、抗体、纳米粒子和离子缓冲液组成，其特征在于：所述的DNA疫苗为编码抗原性蛋白的DNA质粒，所述的抗体为相对应的保护性抗体，所述的纳米粒子能包裹抗体起到缓释作用同时包裹DNA提升其细胞转染效率，所述的离子缓冲液能在体液环境中稳定所述抗体的等电点同时稳定所述纳米粒子的疏水性。2.根据权利要求1所述的禽用DNA疫苗组合物，其特征在于：所述的禽用DNA疫苗组合物是将所述的纳米粒子和离子缓冲液配制成专用缓冲液后，加入处方比例的抗体和DNA疫苗混合均匀后除菌处理得到的。3.根据权利要求1所述的禽用DNA疫苗组合物，其特征在于：所述的编码抗原性蛋白的DNA质粒上连接有CpG序列。4.根据权利要求1所述的禽用DNA疫苗组合物，其特征在于：所述的抗体为与编码抗原性蛋白相对应的单克隆抗体、卵黄抗体或阳性血清分离抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：李守军，唐荣宏，范莉莉，郭明丽，康亚男，陈冰，张立霞，刘海霞，李蓬飞，蔡天宁，高华义，
申请(专利权)人：天津瑞普生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12