冰片作为减轻超声靶向微泡破裂技术诱导局灶性脑缺血血脑屏障开放药物活性成分的应用制造技术

本发明专利技术涉及化合物冰片在制药领域的新用途，公开了冰片作为减轻超声靶向微泡破裂技术(UTMD)诱导局灶性脑缺血血脑屏障开放的药物中活性成分的应用。冰片能够减轻UTMD对脑缺血血脑屏障的进一步开放，从而为UTMD作为卒中后辅助性神经保护治疗提供了更安全的策略。

Application of borneol as a drug active ingredient to alleviate ultrasound-targeted microbubble rupture technology-induced blood-brain barrier opening in focal cerebral ischemia

The invention relates to a new use of compound borneol in the pharmaceutical field, and discloses the application of borneol as an active ingredient in drugs to alleviate the opening of blood-brain barrier in focal cerebral ischemia induced by ultrasound targeted microbubble rupture technology (UTMD). Borneol can alleviate the further opening of UTMD to the blood-brain barrier of cerebral ischemia, thus providing a safer strategy for UTMD as an adjuvant neuroprotective therapy after stroke.

【技术实现步骤摘要】
冰片作为减轻超声靶向微泡破裂技术诱导局灶性脑缺血血脑屏障开放药物活性成分的应用
本专利技术涉及化合物冰片在制药领域的新用途，具体来说，是涉及冰片作为减轻超声靶向微泡破裂技术诱导局灶性脑缺血血脑屏障开放的药物中活性成分的应用。
技术介绍
卒中是世界范围内引起死亡的第二大常见原因和获得性残疾的主要原因。经过几十年来对缺血性卒中神经保护剂的研究，迄今也尚未取得成功的成果转化。这是由于血脑屏障是一种高度选择通透性屏障，它将循环血液与中枢神经系统有效分隔开，并在维持大脑内环境稳态中起着关键作用。血脑屏障在脑缺血再灌注过程中出现开放，这在理论上允许了神经保护剂进入受损的脑组织。然而，即使通过脑缺血诱导的血脑屏障的“开放”，靶向递送神经保护剂仍可能受阻。因此，缺血性卒中的神经保护治疗迫切需要能够诱导安全和更进一步的血脑屏障开放的新型治疗策略。来自动物研究的越来越多的证据表明，超声靶向微泡破裂技术(UTMD)通过瞬时打开血脑屏障，从而可以非侵入性和选择性地将治疗药物递送至特定脑区。也有研究报道UTMD对缺血性脑卒中具有直接的保护作用，这一技术越来越被认可成为缺血性卒中有希望的辅助治疗之一。不过当研究人员忙于探究UTMD如何有效地协助神经保护剂治疗中枢神经系统疾病的同时，也有研究报道称UTMD的机械和空化作用会导致正常的脑组织出血。同时，专利技术人的初步实验表明，UTMD的一种开放正常小鼠血脑屏障安全且相对适中的参数加剧缺血性卒中小鼠血脑屏障的开放并导致脑微量出血。这些发现为UTMD作为卒中后辅助性治疗的临床应用提出了一个重要的安全性问题。冰片是我国传统中药“开窍”药的代表药物，是一类小分子脂溶性单萜类物质。冰片的脂溶性活性成分使其成为良好的渗透促进剂，亦能促进药物透过血脑屏障进入脑内。历代医家认为冰片可引药上行，起“佐”、“使”之功所指的就是这种功效。现代研究亦证实冰片可显著提高药物的血药浓度和生物利用度，并对缺血性脑组织具有一定的保护作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足之处，提供冰片作为减轻超声靶向微泡破裂技术诱导局灶性脑缺血血脑屏障开放的药物中活性成分的应用。所述冰片的结构式如下式所示：其中，冰片的有效剂量为200mg/Kg体重。本专利技术涉及的冰片作为制备减轻UTMD诱导局灶性脑缺血血脑屏障开放的药物中活性成分的用途属于首次公开。由于UTMD作用于局灶性脑缺血血脑屏障，诱导了血脑屏障的进一步开放，增大了脑微血管内皮的间隙，增加了血脑屏障的渗漏，从而造成血管外红细胞渗漏，脑组织含水量增加。而冰片所诱导的血脑屏障的“开放”与脑卒中所致的病理性开放有着质的区别，其开放为生理性开放，并不会引起脑组织的病理性损害，相反冰片对脑组织还有一定的保护作用，比如其可发挥抗炎、改善能量代谢和对脑缺血/再灌注损伤的保护作用。故而，我们研究联合冰片与UTMD，发现冰片能够减轻UTMD对脑缺血血脑屏障的进一步开放，从而为UTMD作为卒中后辅助性神经保护治疗提供了更安全的策略，具备了突出的实质性特点，具有显著的进步。附图说明图1为各组小鼠伊文思蓝染料渗漏情况。(a)模型组；(b)模型+冰片组；(c)模型+UTMD组；(d)模型+冰片+UTMD组。(A)各组小鼠脑表面伊文思蓝的渗漏；(B)各组小鼠右侧脑组织伊文思蓝渗漏定量柱状图；(C)各组小鼠脑皮质渗漏伊文思蓝荧光检测；(D)各组小鼠脑皮质渗漏伊文思蓝荧光密度的统计分析。图2为各组小鼠脑皮质毛细血管的透射电镜照片。(A1)模型组；(B1)模型+冰片组；(C1)模型+UTMD组；(D1)模型+冰片+UTMD组。显微图2是显微图1局部的放大图像。EC：内皮细胞；TJ：紧密连接；R：红细胞；CA：小窝。图3A为各组小鼠脑皮质组织形态学。(a)模型组；(b)模型+冰片组；(c)模型+UTMD组；(d)模型+冰片+UTMD组。图3B为各组小鼠脑皮质出血面积大小的统计分析。图4为各组小鼠梗死侧脑组织含水量的定量柱状图。具体实施方式吸取0.5ml吐温80(Tween80)，将其稀释于9ml无菌0.01MPBS溶液中，再定容到10ml，制得5％吐温溶液。取9ml制得的5％吐温溶液，称取200mg冰片粉末溶于9ml的5％吐温溶液，再定容到10ml，配成20mg/ml的母液，4℃冰箱保存。所使用的冰片为右旋冰片，购于毫州市仁者居中药房，其结构式如下式所示：药理实验以下通过药理实验及结果来进一步说明其药物活性。下述实验中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规实验方法。下述实验中所使用的材料、试剂等如无特殊说明，均可以从商业途径得到。依照以下方法制取足够量的溶度为20mg/ml的冰片溶液：吸取0.5ml吐温80(Tween80)，将其稀释于9ml无菌0.01MPBS溶液中，再定容到10ml，制得5％吐温溶液。取9ml制得的5％吐温溶液，称取200mg冰片粉末溶于9ml的5％吐温溶液，再定容到10ml，配成20mg/ml的母液，4℃冰箱保存。所使用的冰片为右旋冰片，其结构式如下式所示：所使用的小鼠：25-30g、雄性、健康清洁级ICR小鼠，购于上海杰思捷实验动物有限公司。ICR小鼠饲养条件：环境温度20-24℃，12小时/12小时明暗交替。实验数据用均数±标准差表示，多组之间比较采用ANOVA，*p<0.05被认为有统计学意义。70只成年雄性ICR小鼠随机分为4组：(1)模型组(n＝16)：给予0.2ml5％吐温溶液，每日1次，连续灌胃3天，末次灌胃30min后行脑缺血再灌注造模。(2)模型+冰片组(n＝18)：按照200mg/Kg体重的剂量给予冰片溶液，每日1次，连续灌胃3天，末次灌胃30分钟后行脑缺血再灌注造模。(3)模型+UTMD组(n＝18)：于脑缺血/再灌注24小时后经颅超声辐照，同时由尾静脉注射声诺维造影剂。(4)模型+冰片+UTMD组(n＝18)：按照200mg/Kg体重的剂量给予冰片溶液，每日1次，连续灌胃3天，末次灌胃30分钟后行脑缺血再灌注造模，再于脑缺血/再灌注24小时后经颅超声辐照，同时由尾静脉注射声诺维造影剂。然后，分别通过脑组织伊文思蓝染料的渗漏及脑皮质伊文思蓝荧光来检测血脑屏障通透性，透射电镜检测脑血管超微结构、HE染色检测组织病理形态学以及脑含水量的测定。其中，脑缺血再灌注模型的构建具体如下：ICR小鼠术前禁食6h，先以5％浓度的异氟烷诱导麻醉小鼠，小鼠麻倒后下调异氟烷浓度到2％以维持麻醉状态。小鼠麻醉后，仰卧位固定于手术板上，调整好解剖显微镜术野，并用75％安尔碘消毒小鼠颈部皮肤。显微镜下颈部正中切开皮肤，切口长约1cm，钝性分离各层组织，找到唾液腺、气管层面，钝性分离，暴露右侧颈总动脉(CCA)，颈内动脉(ICA)和颈外动脉(ECA)，术中仔细分离避免损伤迷走神经和气管。从CCA交叉向下分离，用6-0丝线结扎CCA近心端，并在CCA远心端用丝线打一松结以便线栓插入后固定；然后应用丝线在CCA分叉处打一活结，用一血管钳提起丝线以临时阻断CCA分叉远处血液返流。用显微剪在颈总动脉下方2条丝线之间剪开一个V型小口，将栓线插入，稍系紧CCA远心端松结后然后将CCA分叉处用于临时阻断的丝线解开，再进一步将栓线往里推送直至感到轻微阻力时停止进线，稍微往回抽下线栓本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.冰片作为减轻超声靶向微泡破裂技术诱导局灶性脑缺血血脑屏障开放的药物中活性成分的应用。

【技术特征摘要】
1.冰片作为减轻超声靶向微泡破裂技术诱导局灶性脑缺血血脑屏障开放的药物中活性成分的应用。2.如权利要求1所述的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓光，单畅，岳蕴华，朱晓琼，刘凌云，胡亮，薛杰，
申请(专利权)人：上海市杨浦区中心医院同济大学附属杨浦医院，
类型：发明
国别省市：上海,31