The invention discloses a method for quickly observing the structure of embryo sac of Cuizhu bamboo, including sampling, dyeing, transparency, observation and other steps. The invention uses the whole dyeing transparent laser confocal microscopy technology to observe the embryo sac development of Cuizhu quickly. First, the ovary of Cuizhu is transparent in methyl salicylate, so as to observe the embryo sac enclosed in it. Then, the different layers of Cuizhu ovary are imaged by laser scanning confocal microscopy, and the clear fluorescence inside the embryo sac is obtained. It is a convenient and fast technique for observing the structure of bamboo embryo sac. It has the advantages of saving time, simple operation and clear structure. It effectively solves the problem that it is difficult to observe the whole structure of bamboo ovary embryo sac in the process of development. The problems lay a foundation for establishing and enriching the reproductive biology theory of bamboo plants.
【技术实现步骤摘要】
一种快速观察翠竹胚囊结构的方法
本专利技术属于植物结构发育
,具体涉及一种利用整体染色透明激光共聚焦显微技术快速观察翠竹胚囊结构的方法。
技术介绍
翠竹(Pleioblastuspygmaeus)是禾本科(Poaceae)苦竹属(Pleioblastus)的优良地被类观赏植物,其抗逆性强,耐修剪,目前在园林绿化上的应用需求越来越大,其经济价值也越来越高[张春霞,骆仁祥,丁兴萃等.翠竹的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯,2010,46(5):477-478]。翠竹原产日本,于20世纪80年代由南京古林苗圃引入南京林业大学,2015年3月首次在南京开花,5月果实成熟[林树燕,范婷婷,姜明云,等3种(品种)地被竹花器官形态特征及学名订正[J].南京林业大学学报(自然科学版),2017,41(1):189-193]。对胚囊结构和功能的研究一直是植物生殖生物学一个重要的研究内容,但是因为胚囊处于胚珠组织的层层包裹之中,研究工作实施起来十分的困难。常规石蜡切片是研究胚囊的传统方法,但其制片过程复杂、工作量大。激光扫描共聚焦显微镜是近代发展起来用以研究细胞生物学的高科技产品,具有较高的分辨率,能深度识别生物标本中的细微结构,直接地进行形态学观察,对样品各层分别扫描成像,用计算机进行图像处理,建立样品的三维立体结构图。用激光共聚焦显微镜观察拟南芥(Arabidopsisthallana)胚珠的发育过程,取得了理想的效果;张华华[张华华,冯九焕,卢永根,等.利用激光扫描共聚焦显微镜观察水稻胚囊形成与发育的方法.电子显微学报,2003,22(5):380-384 ...
【技术保护点】
1.一种快速观察翠竹胚囊结构的方法,其特征在于,包括以下步骤:1)取不同发育时期的小穗,固定后,转移至酒精中永久保存;2)梯度复水后,曙红溶液染色,蒸馏水水洗,再以梯度酒精脱水,无水乙醇中重复数次;3)将染色好的子房置于水杨酸甲酯和酒精的混合液中过渡,随后转移到纯水杨酸甲酯溶液中透明,最后将样品保存于纯水杨酸甲酯中;4)将样品置于凹玻片之上,在凹玻片上加少许的水杨酸以及中性树脂,用以封片;在激光扫描共聚焦显微镜下进行分层扫描并获取图像,观察出翠竹胚囊结构。
【技术特征摘要】
1.一种快速观察翠竹胚囊结构的方法,其特征在于,包括以下步骤:1)取不同发育时期的小穗,固定后,转移至酒精中永久保存;2)梯度复水后,曙红溶液染色,蒸馏水水洗,再以梯度酒精脱水,无水乙醇中重复数次;3)将染色好的子房置于水杨酸甲酯和酒精的混合液中过渡,随后转移到纯水杨酸甲酯溶液中透明,最后将样品保存于纯水杨酸甲酯中;4)将样品置于凹玻片之上,在凹玻片上加少许的水杨酸以及中性树脂,用以封片;在激光扫描共聚焦显微镜下进行分层扫描并获取图像,观察出翠竹胚囊结构。2.根据权利要求1所述的快速观察翠竹胚囊结构的方法,其特征在于,步骤1)中,取从孢原细胞开始至成熟胚囊的不同发育时期的小花,固定于70%的FAA之中,体视镜下解剖前从FAA中取出,先用50%的酒精冲洗,随后转移至70%的酒精中备用;在体视镜下解剖分离出发育各阶段子房。3.根据权利要求1所述的快速观察翠竹胚囊结构的方法,其特征在于,步骤2)中,经70%酒精-50%酒精-30%酒精-15%酒精-蒸...
【专利技术属性】
技术研发人员:林树燕,范婷婷,王星,傅华君,万雅雯,苏佳露,杨雅运,丁雨龙,
申请(专利权)人:南京林业大学,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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