一种鸭TLR2胞外区多克隆抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种鸭TLR2胞外区多克隆抗体及其制备方法与应用，该方法包括以下步骤：(1)人工合成TLR2胞外区序列；(2)将TLR2胞外区序列构建至表达载体pET28a，筛选后得到重组质粒pET28a‑TLR2；(3)将重组质粒pET28a‑TLR2转化到大肠杆菌BL21，在大肠杆菌BL21中表达TLR2‑His重组蛋白；(4)将TLR2‑His重组蛋白免疫家兔，分离免疫家兔血清，即得。本发明专利技术制备的多克隆抗体的血清效价超过1:50000，具有特异性好、纯度高的特点，能特异性的检测到重组蛋白和组织内源性TLR2，制得的多克隆抗体为进一步研究TLR2的生物学功能提供有利的条件。

A Duck TLR2 Extracellular Domain Polyclonal Antibody and Its Preparation and Application

The invention discloses a duck TLR2 extracellular domain polyclonal antibody and its preparation method and application. The method comprises the following steps: (1) synthesizing the TLR2 extracellular domain sequence artificially; (2) constructing the TLR2 extracellular domain sequence into the expression vector pET28a, and obtaining the recombinant plasmid pET28a TLR2 after screening; (3) transforming the recombinant plasmid pET28a TLR2 into the large intestine rod. Bacteria BL21 expresses TLR2 His recombinant protein in E. coli BL21; (4) Immunize rabbits with TLR2 His recombinant protein and isolate rabbit serum. The prepared polyclonal antibody has a serum titer of more than 1:50000, good specificity and high purity, and can specifically detect recombinant protein and tissue endogenous TLR2. The prepared polyclonal antibody provides favorable conditions for further study of the biological function of TLR2.

【技术实现步骤摘要】
一种鸭TLR2胞外区多克隆抗体及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种抗体的制备方法，具体涉及一种鸭TLR2胞外区多克隆抗体及其制备方法与应用。
技术介绍
TLR2是TLRs家族的重要成员，主要表达在单核巨噬细胞表面，不仅介导对病原分子模式的识别，还能介导对热休克蛋白、透明质酸片段、纤黏连蛋白等内源性非感染抗原的识别，故TLR2不仅是连接天然免疫和获得性免疫的关键分子，而且在非感染性组织损伤及组织修复过程中有重要作用。目前，哺乳动物与非哺乳脊椎动物如人、鼠、牛、猪和鸡等的TLR2结构与功能已有大量研究。现已证明，人、小鼠和牛TLR2基因CDS全长均为2355bp，编码784aa，其中C-端富亮氨酸重复序列(LRRs)54aa，TIR同源区145aa；猪TLR2基因CDS全长2358bp，编码785aa，其中C-端LRRs51aa，TIR同源区145aa。Huang发现鸡TLR2有两种亚型，其中chTLR2-1基因CDS全长2382bp，编码793aa，TIR同源区145aa；chTLR2-2基因CDS全长2346bp，编码781aa，TIR同源区145aa。李国勤报道dTLR2基因编码本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸭TLR2胞外区多克隆抗体的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)根据TLR2的胞外区域的氨基酸序列，合成TLR2胞外区核酸序列，以该序列为模板扩增TLR2胞外区序列；(2)将扩增得到的TLR2胞外区序列构建至表达载体pET28a，筛选含有目的片段的阳性克隆，得到重组质粒pET28a‑TLR2；(3)将重组质粒pET28a‑TLR2转化到大肠杆菌BL21，在大肠杆菌BL21中表达TLR2‑His重组蛋白；(4)将TLR2‑His重组蛋白免疫家兔，分离免疫家兔血清，得到所述鸭TLR2胞外区多克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种鸭TLR2胞外区多克隆抗体的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)根据TLR2的胞外区域的氨基酸序列，合成TLR2胞外区核酸序列，以该序列为模板扩增TLR2胞外区序列；(2)将扩增得到的TLR2胞外区序列构建至表达载体pET28a，筛选含有目的片段的阳性克隆，得到重组质粒pET28a-TLR2；(3)将重组质粒pET28a-TLR2转化到大肠杆菌BL21，在大肠杆菌BL21中表达TLR2-His重组蛋白；(4)将TLR2-His重组蛋白免疫家兔，分离免疫家兔血清，得到所述鸭TLR2胞外区多克隆抗体。2.根据权利要求1所述的鸭TLR2胞外区多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，合成出TLR2胞外区序列如SEQIDNo.1所示。3.根据权利要求1所述的鸭TLR2胞外区多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，扩增所用的上游引物序列如SEQIDNo.2所示，所用下游引物序列如SEQIDNo.3所示。4.根据权利要求3所述的鸭TLR2胞外区多克隆抗体的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱春红，李慧芳，陶志云，徐文娟，宋卫涛，刘宏祥，章双杰，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32