治疗自身性免疫疾病的疫苗佐剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种治疗自身性免疫疾病的疫苗佐剂及其应用，具体公开了聚乳酸‑羟基乙酸共聚物作为疫苗佐剂在制备治疗自身性免疫疾病的药物中的应用。本发明专利技术将聚乳酸‑羟基乙酸共聚物制成微球，并负载胰岛素B链多肽B9‑23作为效应抗原，通过皮下注射，可辅助抗原功能，起到免疫佐剂作用，降低小鼠体内自抗体滴度，从而更有效地辅助抗原激活体内调节性T细胞增殖及其功能，诱导免疫耐受，从而有效防止或延缓1型糖尿病发病；并且，鉴于1型糖尿病属于自身性免疫疾病，聚乳酸‑羟基乙酸共聚物也可作为佐剂，用于其他自身性免疫疾病。

【技术实现步骤摘要】
治疗自身性免疫疾病的疫苗佐剂及其应用
本专利技术涉及自身性免疫疾病药物
，具体涉及一种治疗自身性免疫疾病的疫苗佐剂及其应用。
技术介绍
自身性免疫疾病主要包括类风湿性关节炎、自身免疫性糖尿病(也称为1型糖尿病)、自身免疫性脑脊髓炎(多发性硬化)和红斑狼疮。其具体发病原因至今不明，但通常是机体对于自身正常组织有非正常的免疫排斥反应，即免疫不耐受引发的。如果可以通过一定手段使机体对这些自身抗原产生免疫耐受作用，避免自抗体的生成及T细胞对这些抗原的时别及攻击，就可以纠正免疫细胞对自体含抗原组织的攻击。以1型糖尿病为例，1型糖尿病是由于自身的免疫细胞在自身发育过程中阴性选择时发生障碍，导致自身抗原具有活化自体T细胞的作用，这些被活化的T细胞进而可对自体特异性抗原进行攻击。现被证明有可能触发1型糖尿病的多种自身抗原包括：β细胞释放的胰岛素或者前胰岛素、谷氨酸脱羧酶、一种B细胞特异性的蛋白脱羧酶、热休克蛋白65的P227段多肽、锌转运体Znt8等。1型糖尿病正是一种由自体活化的T细胞对体内分泌胰岛素的胰岛β细胞攻击而导致的自身免疫性疾病。现在治疗1型糖尿病的主要手段是注射外源性胰岛素，然而该方法只能够补充胰岛素的不足，却无法更正体内免疫细胞对胰岛细胞的破坏，因而不能根治或预防1型糖尿病的发生。另外，糖尿病人伤口本来不易愈合，频繁注射胰岛素和血糖监测对机体造成严重损伤，而且胰岛素用量难以精确调整，很容易造成低血糖的风险，且仍不能完全避免血糖升高造成的大血管和微血管并发症的发生。免疫佐剂作为疫苗的重要组成部分，尤其是针对免疫原性较弱的抗原疫苗，其研究需求尤其迫切。佐剂不仅可以增强免疫反应的强度和速度以提高疫苗效率，减少抗原用量，降低疫苗生产成本，还可以使临床疫苗治疗过程简单化，降低患者的治疗费用。目前，将抗原与佐剂同时应用时新型疫苗的发展趋势，例如刚刚被美国FDA(FoodandDrugAdministration)批转的Dynavax公司生产的HEPLISAV-B疫苗是将乙肝表面抗原与Dynavax专有佐剂Toll样受体9(TLR9)激动剂相结合制成的承认乙肝疫苗。葛兰素史克公司的宫颈癌疫苗Cervarix和乙型肝炎疫苗Fendrix则是用新型佐剂系统AS04(含MPL的铝佐剂)制备而成。已有多项研究表明将抗原与多种佐剂及组合佐剂(如免疫刺激复合物ISCOMs、佐剂系统AS或三联佐剂组合体等)联合应用可以大大提高疫苗的疗效，具有免疫协同效应。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)是一种高分子聚合物，是被FDA认可的用于人类治疗的药用辅料，具有生物降解性和生物相容性，PLGA通过两种不同单体羟基乙酸和乳酸的环状二聚体的开环共聚合而合成。研究报道显示PLGA纳米颗粒载体能增强体内的递送和蛋白质保护，体外研究证明其能增加细胞摄取和蛋白质的内化。研究表明基于PLGA的纳米聚合物载体是有效和安全地活性分子进入人的良好的运输候选物。此外，调查其炎症谱结果表明PLGA纳米颗粒在体外和体内具有低的炎症效应。现有1型糖尿病治疗方式，如胰岛移植、体外注射胰岛素，均无法有效的预防糖尿病发病。作为自身性免疫疾病，现有治疗手段采用的治疗药物中没有一种可通过调控免疫系统预防或治疗1型糖尿病发病。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术目的在于提供一种治疗自身性免疫疾病的疫苗佐剂与应用，将聚乳酸-羟基乙酸共聚物制成微球，并负载胰岛素B链多肽B9-23作为效应抗原，通过皮下注射，可辅助抗原功能，起到免疫佐剂作用，降低小鼠体内自抗体滴度，从而更有效地辅助抗原激活体内调节性T细胞增殖及其功能，诱导免疫耐受，从而有效防止或延缓1型糖尿病发病。为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：本专利技术提供一种聚乳酸-羟基乙酸共聚物的药物新用途，即聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)作为疫苗佐剂在制备治疗自身性免疫疾病的药物中的应用。优选地，自身性免疫疾病为糖尿病，优选为1型糖尿病。本专利技术还提供一种负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球，其中的抗原多肽为胰岛素肽段，优选为胰岛素B段肽段，更优选为胰岛素B段9-23肽段。优选地，负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的粒径为500～2000nm。优选地，负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球是采用双乳化法制备而成。本专利技术还保护负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球在制备治疗自身性免疫疾病的药物中的应用。本专利技术还保护负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球在制备治疗糖尿病尤其是1型糖尿病的药物中的应用。本专利技术还提供了负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备方法，包括步骤：S1：将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于二氯甲烷中，得到溶有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液；S2：将抗原多肽溶于水中，得到溶有抗原多肽的水溶液；S3：将溶有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液和溶有抗原多肽的水溶液混合后超声，得到水包油初乳；S4：将水包油初乳和聚乙烯醇水溶液混合后超声，得到水包油包水复乳；S5：将水包油包水复乳搅拌过夜；S6：将搅拌过夜后的产物离心，弃上清，用水重悬，得到负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球。优选地，S1中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量和二氯甲烷的体积的比值为(10～60)mg：(1～10)mL；S2中，抗原多肽的质量和水体积的比值为(0.05～50)mg：(1～100)μL；S3中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物和抗原多肽的质量比为1：(0.10～0.30)；S4中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量和聚乙烯醇水溶液的体积的比值为(10～100)mg：(1～10)mL；S6中，负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球中的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量浓度为0.5％～2.0％。优选地，S2中，水为超纯水；S3中，超声为冰浴超声，超声的功率为20～100W，超声的时间为1～20min；S4中，聚乙烯醇水溶液的质量分数为2％，超声为冰浴超声，超声的功率为20～100W，超声的时间为1～20min；S6中，离心的转速为5000～20000rpm，离心的时间为30～60min，水为超纯水，重悬的次数为多次，优选为3次。需要说明的是，S5优选为将水包油包水复乳移至烧杯中，在通风处室温条件下搅拌挥发过夜。本专利技术提供的技术方案，具有如下的有益效果：(1)本专利技术将PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)制成微球，并负载胰岛素B链多肽B9-23(一种大家熟知的被T细胞所识别的胰岛素表位作为效应抗原)，可辅助抗原功能，起到免疫佐剂作用，降低小鼠体内自抗体滴度，从而更有效地辅助抗原激活体内调节性T细胞增殖及其功能，诱导免疫耐受，防止或延缓1型糖尿病发病；(2)将本专利技术提供的负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球皮下注射治疗自发性1型糖尿病模型小鼠(non-obesediabetic，NOD小鼠)，通过检测小鼠血糖发现，经治疗的小鼠注射30周后，100％小鼠血糖仍保持正常水平，未有糖尿病病发，而只用抗原(裸肽)治疗组小鼠30周后全部血糖升高，糖尿病病发；因此，本专利技术提供的PLGA微球可作为治疗自身免疫性1型糖尿病的新型疫苗佐剂；并且，鉴于1型糖尿病属于自身性免疫疾病，该PLGA微球也可作为佐剂，用于其他自身性免疫疾病；(3)本专利技术提供的负本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种聚乳酸‑羟基乙酸共聚物的药物新用途，其特征在于：聚乳酸‑羟基乙酸共聚物作为疫苗佐剂在制备治疗自身性免疫疾病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种聚乳酸-羟基乙酸共聚物的药物新用途，其特征在于：聚乳酸-羟基乙酸共聚物作为疫苗佐剂在制备治疗自身性免疫疾病的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的药物新用途，其特征在于：所述自身性免疫疾病为糖尿病，优选为1型糖尿病。3.一种负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球，其特征在于：所述抗原多肽为胰岛素肽段，优选为胰岛素B段肽段，更优选为胰岛素B段9-23肽段。4.根据权利要求3所述的负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球，其特征在于：所述负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的粒径为500～2000nm。5.根据权利要求3所述的负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球，其特征在于：所述负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球是采用双乳化法制备而成。6.权利要求3-5任一项所述的负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球在制备治疗自身性免疫疾病的药物中的应用。7.权利要求3-5任一项所述的负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球在制备治疗糖尿病尤其是1型糖尿病的药物中的应用。8.权利要求3-5任一项所述的负载抗原多肽的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备方法，其特征在于，包括步骤：S1：将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于二氯甲烷中，得到溶有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液；S2：将抗原多肽溶于水中，得到溶有抗原多肽的水溶液；S3：将所述溶有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液和所述溶有抗原多肽的水溶液混合后超声，得到水包油初...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宸，杨静宜，冯丹丹，孔德领，
申请(专利权)人：中国医学科学院生物医学工程研究所，
类型：发明
国别省市：天津,12