基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法，属于电致化学发光技术领域。将多肽修饰于玻碳电极表面，然后在蛋白激酶和巯基三磷酸腺苷的作用下，使得多肽发生磷酸化反应，之后加入AuNPs，通过Au‑S键作用将AuNPs连接到多肽的巯基磷酸化位点上，从而拉近了AuNPs与电极表面的距离，AuNPs良好的电子传导性使得Na2S2O8/O2体系的ECL信号大大增强，且ECL增强的强度与蛋白激酶浓度呈正相关，据此可实现蛋白激酶活性的高灵敏和选择性检测，并用于对蛋白激酶抑制剂的筛选。

【技术实现步骤摘要】
基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法
本专利技术涉及一种基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法，属于电致化学发光

技术介绍
蛋白激酶，又称蛋白质磷酸化酶，在蛋白质或多肽磷酸化的过程中发挥催化调节的作用。蛋白质或多肽的磷酸化反应主要发生在苏氨酸、丝氨酸和酪氨酸残基侧链的羟基位点上，不同类型的蛋白激酶能够识别并修饰的蛋白质位点也有所不同。蛋白激酶A(PKA)，是目前所发现的具有最简单的生物结构以及最清楚生化特性的一种激酶，且活化的PKA可以识别蛋白质或多肽的丝氨酸残基侧链的羟基并催化其发生磷酸化，从而改变蛋白质或多肽的特性，最终影响有关基因的表达，而许多疾病以及癌症的发生都与PKA的异常表达有着紧密的联系。目前，蛋白激酶活性的测定方法主要有比色法、放射法、生物素/巯基标记法以及表面等离子共振法等，这些方法虽然能有效检测蛋白激酶的活性，但是存在偶联操作繁琐、标记步骤复杂且耗时等问题。因此，发展简单易行的蛋白激酶活性分析新方法具有重要意义。电致化学发光(ECL)是在反应体系中施加一定的电压，发光试剂在电极表面发生氧化或还本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，包括如下步骤：以AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极为工作电极而构建三电极系统，将三电极系统置于Na2S2O8/O2溶液中，检测AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极的ECL信号，并根据加入的蛋白激酶浓度的对数与Na2S2O8/O2体系的ECL信号的强度之间的线性关系来实现对蛋白激酶活性的高灵敏检测；此外，还可根据加入的蛋白激酶抑制剂浓度与Na2S2O8/O2的ECL信号的强度之间的线性关系来计算出蛋白激酶抑制剂的半抑制浓度，用于评价抑制剂对蛋白激酶活性的抑制效果。

【技术特征摘要】
1.基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，包括如下步骤：以AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极为工作电极而构建三电极系统，将三电极系统置于Na2S2O8/O2溶液中，检测AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极的ECL信号，并根据加入的蛋白激酶浓度的对数与Na2S2O8/O2体系的ECL信号的强度之间的线性关系来实现对蛋白激酶活性的高灵敏检测；此外，还可根据加入的蛋白激酶抑制剂浓度与Na2S2O8/O2的ECL信号的强度之间的线性关系来计算出蛋白激酶抑制剂的半抑制浓度，用于评价抑制剂对蛋白激酶活性的抑制效果。2.如权利要求1所述的基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，所述三电极系统是以AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰玻碳电极作为工作电极、铂丝为对电极和Ag/AgCl电极作为参比电极而构建的三电极系统。3.如权利要求1所述的基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，所述检测AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极的ECL信号是通过MPI-B型多参数化学分析测试系统测试光电倍增管高压为800V时AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰玻碳电极在-1.8～0V电位范围的ECL信号。4.如权利要求1所的述基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，所述的Na2S2O8/O2溶液为含有0.1MNa2S2O8和0.1MKCl的0.1MpH7.4的磷酸盐缓冲溶液。5.如权利要求1所述的基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法，其特征在于，AuNPs/巯基磷酸化多肽修饰电极的制备方法包括如下步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁汝萍，于禄丹，邱建丁，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西,36