一种高含量白藜芦醇植物提取物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高含量白藜芦醇决明子提取物的制备方法，包括以下步骤：A、挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽的决明子，消毒后接种于决明子愈伤组织诱导培养基，诱导出决明子愈伤组织；B、制备高产白藜芦醇决明子干细胞培养液；C、选取步骤A所得的决明子愈伤组织作为种子，装入高产白藜芦醇决明子干细胞培养液中悬浮培养，得决明子干细胞固体粉末；D、将步骤C获得的决明子干细胞固体粉进行破壁处理；E、将步骤D获得的细胞破壁匀浆混合物和无水乙醇按质量比1:（2‑3）混合，过滤，冷冻结晶，分离出柱型结晶，得高含量白藜芦醇决明子提取物。本发明专利技术具有所得白藜芦醇决明子提取物得率高，白藜芦醇决明子提取物中白藜芦醇含量高的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种高含量白藜芦醇植物提取物的制备方法
本专利技术涉及植物干细胞培养
，具体涉及一种高含量白藜芦醇植物提取物的制备方法。
技术介绍
白藜芦醇(resveratrol：trans-3，5，4’-trihydroxystilbene)是一种芪类化合物(stilbenes)，简写为Res，存在于一些药用植物和食用植物中，如决明、藜芦、虎杖、葡萄、花生。白藜芦醇(Res)既是肿瘤疾病的化学预防剂，也是对降低血小板聚集，预防、治疗动脉粥样硬化，心脑血管疾病的化学预防剂，抑制血小板非正常凝聚，预防心肌硬塞、脑栓塞，对缺氧心脏有保护作用，对烧伤或失血性休克引起的心输出量下降有效恢复，并能够扩张动脉血管及改善微循环。除此之外，白藜芦醇(Res)也是一种抗自由基、抗氧化剂，与之相关的功能如下：1、延缓衰老；2、阻止低密度脂蛋白的氧化，具有潜在的防治心血管疾病(动脉粥样硬化和冠心病、缺血性心脏病、高血脂症等)的作用；3、影响脂类及花生四烯酸代谢；4、抗血栓、抗血小板聚集5、抗炎、抗过敏作用。近年来，白藜芦醇(Res)提取物的原料来源是虎杖等植物，这些植物随着白藜芦醇(Res)市场紧俏，虎杖原料的消耗量越来越大，其植物资源日渐匮乏，原料价格逐步攀升，最终使得白藜芦醇(Res)的生产成本也大大提高。为此，从决明子有关成分中制备白藜芦醇(Res)提取物成为了材料稳定、性价比高的有效途径。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种高含量白藜芦醇决明子提取物的制备方法。该方法获得的决明子干细胞固体粉末中白藜芦醇决明子提取物含量较高，白藜芦醇决明子提取物得率高，白藜芦醇决明子提取物中白藜芦醇的含量高的优点。解决上述技术问题的具体技术方案如下：一种高含量白藜芦醇决明子提取物的制备方法，包括如下步骤：A、挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽的决明子，先流水冲洗1-3遍去除杂质、灰尘后，晾干表面水分，经过体积分数70-75％的乙醇消毒30-35s，然后用0.1％HgCl2溶液消毒5-10min，再用无菌水冲洗5-8次，放在无菌滤纸上晾干；在无菌条件下用剪刀将决明子切成小段，接种于决明子愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，得到初级培养决明子愈伤组织；将得到的初级培养决明子愈伤组织再转接至决明子愈伤组织诱导培养基进行继代培养两次，得到增殖后的决明子愈伤组织；B、制备高产白藜芦醇决明子干细胞培养液：按质量比称取40-60％MS培养基、15-30％卡拉胶、2.5-5.5％2,4-二氯苯氧乙酸、1.5-4.2％蔗糖、0.05-0.2％吲哚丁酸、0.05-0.35％N6-呋喃甲基腺嘌呤、0.04-0.1％二氢茉莉酮酸甲酯，在玻璃容器中混合加热至75-82℃，搅拌到完全溶解后冷却到室温，加入适量PBS缓冲液，调节溶液的PH至6.2-6.7；C、选取步骤A所得的决明子愈伤组织作为种子，按接种量为质量比5％的比例,装入含250mL高产白藜芦醇决明子干细胞培养液的500mL培养瓶中悬浮培养，摇床转速控制在100-120rpm，培养温度控制在25±1℃，光照控制在1000-1500lx，每天光照8小时，培养10-12天得到乳白色团簇即决明子干细胞，收获乳白色团簇，用去离子水冲洗干净并冷冻干燥得决明子干细胞固体粉末；D、按质量比1:(1-3)将步骤C获得的决明子干细胞固体粉末与山梨醇混合搅拌均匀，使用高压均质机在25000PSI条件下进行破壁匀浆处理；E、将步骤D获得的细胞破壁匀浆混合物和无水乙醇按质量比1:(2-3)混合，依次通过10微米聚丙烯过滤器、医用活性炭过滤器、0.45微米聚丙烯过滤膜进行过滤，获得清液在-10℃冰箱中静置24小时，下层得无色透明柱型结晶，用分液漏斗分出下层柱型结晶，用无水酒精淋洗干净后真空干燥，得高含量白藜芦醇决明子提取物。优选的，所述步骤A中决明子愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，并添加蔗糖20-25g/L、琼脂3-6g/L、聚乙烯吡咯烷酮1.0-3.0g/L、6-苄氨基腺嘌呤1.5-3.5mg/L、a-萘乙酸0.1-0.5mg/L，pH值5.8。优选的，所述步骤A中诱导培养的培养条件为：培养温度(25±1)℃、湿度60-70％，先暗培养两周，再光培养25-35天，光培养按光照强度1000lx下16h、暗条件下8h交替进行。优选的，所述步骤A中继代培养的培养条件为：培养温度(25±1)℃、湿度60-70％，先暗培养两周，再光培养55-65天，光培养按光照强度1000lx下16h、暗条件下8h交替进行。本专利技术所得高含量白藜芦醇决明子提取物在化妆品中应用，具有美白功效。本专利技术提供一种化妆水，包括如下重量百分比的组分：上述白藜芦醇决明子提取物0.1-5％、海藻糖0.1-1％、1,2-戊二醇1-3％、甘油聚丙烯酸酯0.1-2％、藻酸钠0.1-0.5％、丝氨酸0.1-1％、出芽短梗酶多糖0.1-2％、甘油1-5％、尿素0.1-3％、辛甘醇0.1-0.3％、水余量。本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供了一种高含量白藜芦醇决明子干细胞培养技术，可进行大规模培养获取大量的原材料，采用反相HPLC法测定，白藜芦醇决明子提取物的含量可达决明子干细胞干重的8.5-10.5％，白藜芦醇决明子提取物得率可达7.0-9.5％，白藜芦醇决明子提取物中白藜芦醇的含量大于95％。本专利技术制备的高含量白藜芦醇决明子提取物可用于制备食品、保健品、化妆品以及药品。本专利技术通过采用特定的高产白藜芦醇决明子干细胞培养液，用植物干细胞培养的方法获取富含白藜芦醇的决明子干细胞，培养周期短，可进行大规范生产，所得决明子干细胞固体粉末中白藜芦醇的含量高；白藜芦醇决明子提取物的含量可达决明子干细胞干重的8.5-10.5％，白藜芦醇决明子提取物得率可达7.0-9.5％，白藜芦醇决明子提取物中白藜芦醇的含量大于95％。本专利技术所得高含量白藜芦醇决明子提取物应用在化妆品中，具有美白保湿功效。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施方式作进一步地详细描述，但本专利技术的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数或条件，可参照常规技术进行。本专利技术所述MS培养基采用生产商Sigma-Aldrich，型号M5519。实施例1一种高含量白藜芦醇决明子提取物的制备方法，包括如下步骤：A、挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽的决明子，先流水冲洗1遍去除杂质、灰尘后，晾干表面水分，经过体积分数75％的乙醇消毒30s，然后用0.1％HgCl2溶液消毒5min，再用无菌水冲洗8次，放在无菌滤纸上晾干；在无菌条件下用剪刀将决明子切成小段，接种于决明子愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，培养条件为：培养温度(25±1)℃、湿度60％，先暗培养两周，再光培养35天，光培养按光照强度1000lx下16h、暗条件下8h交替进行，得到初级培养决明子愈伤组织；将得到的初级培养决明子愈伤组织再转接至决明子愈伤组织诱导培养基进行继代培养两次，培养条件为：培养温度(25±1)℃、湿度60％，先暗培养两周，再光培养65天，光培养按光照强度1000lx下16h、暗条件下8h交替进行，得到增殖后的决明子愈伤组织；所述决明子愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，并添加蔗糖25g/L、琼脂3g/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高含量白藜芦醇决明子提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：A、挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽的决明子，先流水冲洗1‑3遍去除杂质、灰尘后，晾干表面水分，经过体积分数70‑75%的乙醇消毒30‑35s，然后用0.1%HgCl2 溶液消毒5‑10min，再用无菌水冲洗5‑8次，放在无菌滤纸上晾干；在无菌条件下用剪刀将决明子切成小段，接种于决明子愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，得到初级培养决明子愈伤组织；将得到的初级培养决明子愈伤组织再转接至决明子愈伤组织诱导培养基进行继代培养两次，得到增殖后的决明子愈伤组织；B、制备高产白藜芦醇决明子干细胞培养液：按质量比称取40‑60% MS培养基、15‑30%卡拉胶、2.5‑5.5% 2,4‑二氯苯氧乙酸、1.5‑4.2%蔗糖、0.05‑0.2%吲哚丁酸、0.05‑0.35% N6‑呋喃甲基腺嘌呤、0.04‑0.1%二氢茉莉酮酸甲酯，在玻璃容器中混合加热至75‑82℃，搅拌到完全溶解后冷却到室温，加入适量PBS缓冲液，调节溶液的PH至6.2‑6.7；C、选取步骤A所得的决明子愈伤组织作为种子，按接种量为质量比5%的比例,装入含250mL高产白藜芦醇决明子干细胞培养液的500mL培养瓶中悬浮培养，摇床转速控制在100‑120rpm，培养温度控制在25±1℃，光照控制在1000‑1500lx，每天光照8小时，培养10‑12天得到乳白色团簇即决明子干细胞，收获乳白色团簇，用去离子水冲洗干净并冷冻干燥得决明子干细胞固体粉末；D、 按质量比1:（1‑3）将步骤C获得的决明子干细胞固体粉末与山梨醇混合搅拌均匀，使用高压均质机在25000PSI条件下进行破壁匀浆处理；E、 将步骤D获得的细胞破壁匀浆混合物和无水乙醇按质量比1:（2‑3）混合，依次通过10微米聚丙烯过滤器、医用活性炭过滤器、0.45微米聚丙烯过滤膜进行过滤，获得清液在‑10℃冰箱中静置24小时，下层得无色透明柱型结晶，用分液漏斗分出下层柱型结晶，用无水酒精淋洗干净后真空干燥，得高含量白藜芦醇决明子提取物。...

【技术特征摘要】
1.一种高含量白藜芦醇决明子提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：A、挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽的决明子，先流水冲洗1-3遍去除杂质、灰尘后，晾干表面水分，经过体积分数70-75%的乙醇消毒30-35s，然后用0.1%HgCl2溶液消毒5-10min，再用无菌水冲洗5-8次，放在无菌滤纸上晾干；在无菌条件下用剪刀将决明子切成小段，接种于决明子愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，得到初级培养决明子愈伤组织；将得到的初级培养决明子愈伤组织再转接至决明子愈伤组织诱导培养基进行继代培养两次，得到增殖后的决明子愈伤组织；B、制备高产白藜芦醇决明子干细胞培养液：按质量比称取40-60%MS培养基、15-30%卡拉胶、2.5-5.5%2,4-二氯苯氧乙酸、1.5-4.2%蔗糖、0.05-0.2%吲哚丁酸、0.05-0.35%N6-呋喃甲基腺嘌呤、0.04-0.1%二氢茉莉酮酸甲酯，在玻璃容器中混合加热至75-82℃，搅拌到完全溶解后冷却到室温，加入适量PBS缓冲液，调节溶液的PH至6.2-6.7；C、选取步骤A所得的决明子愈伤组织作为种子，按接种量为质量比5%的比例,装入含250mL高产白藜芦醇决明子干细胞培养液的500mL培养瓶中悬浮培养，摇床转速控制在100-120rpm，培养温度控制在25±1℃，光照控制在1000-1500lx，每天光照8小时，培养10-12天得到乳白色团簇即决明子干细胞，收获乳白色团簇，用去离子水冲洗干净并冷冻干燥得决明子干细胞固体粉末；D、按质量比1:（1-3）将步骤C获得的决明子干细胞固体粉末与山梨醇混合搅拌均匀，使用高压均质机在25000PSI条件下进行破壁匀浆处理；E、将步骤D获得的细胞破壁匀浆混合物和无水乙醇按质量比1:（2-3）混合，依次通过10微米聚丙烯过滤器、医用活性炭过滤器、0.45微米聚丙烯过滤膜进行过滤，获得清液在-...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：佛山市芊茹化妆品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44