一种用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂制造技术

本发明专利技术属于农作物病害防治领域，公开了一种用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂，选取优质市售脱毒马铃薯；市售枯草芽孢杆菌粉剂；活化枯草芽孢杆菌粉剂：将枯草芽孢杆菌粉剂接种于培养液中，30℃，150r/min摇床培养36h，制得枯草芽孢杆菌粉剂种子液，备用；发酵：将种子液接种于发酵培养基中，在30℃，150r/min条件下发酵7天，得发酵液；测定发酵液活性：将发酵液5000r/min离心5min后过滤，收集处理的发酵液，利用马铃薯晚疫病菌为标靶，测定发酵液的抑菌活性；收集发酵液：发酵液活性检测合格后，收集发酵液，备用。本发明专利技术对环境不会造成任何污染，对马铃薯的晚疫病具有较好的防治效果。

【技术实现步骤摘要】
一种用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂
本专利技术属于农作物病害防治
，尤其涉及一种用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：马铃薯晚疫病由致病疫霉引起，导致马铃薯茎叶死亡和块茎腐烂的一种毁灭性卵菌病害马铃薯晚疫病由致病疫霉引起。叶片染病先在叶尖或叶缘生水浸状绿褐色斑点，病斑周围具浅绿色晕圈，湿度大时病斑迅速扩大，呈褐色，并产生一圈白霉，即孢囊梗和孢子囊，尤以叶背最为明显；干燥时病斑变褐干枯，质脆易裂，不见白霉，且扩展速度减慢。茎部或叶柄染病现褐色条斑。发病严重的叶片萎垂、卷缩，终致全株黑腐，全田一片枯焦，散发出腐败气味。块茎染病初生褐色或紫褐色大块病斑，稍凹陷，病部皮下薯肉亦呈褐色，慢慢向四周扩大或烂掉。目前为止，晚疫病防治主要还是依靠培育抗病品种和化学农药的大量使用。其中培育抗病品种是防治疫病最成功的措施，但是晚疫病菌毒性组成具多变异性特点，导致利用主抗基因育成的抗病品种抗性丧失，而在短时间内筛选并培育出具有抗疫病的新品种是非常困难的。化学农药对农业的发展虽然起着重要的作用，但化学农药的长期使用会带来许多负面影响。使用化学农药不仅缺乏长期的有效性，还出现生态环境被破坏、人畜和有益生物中毒、化学性物质在粮食和饲料中残留量大大超标，影响人畜生存质量等诸多问题。综上所述，现有技术存在的问题是：(1)现有技术中，对于马铃薯晚疫病常常使用化学农药，易残留，无论是前期的工作人员还是后期的食用者，对其身体健康都具有一定的影响；(2)目前多使用化学农药对晚疫病进行防空，但是化学农药的长期使用会带来许多负面影响，对生态环境造成破坏、影响人畜生存质量等诸多问题。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂。本专利技术是这样实现的，一种用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂由枯草芽孢杆菌粉剂发酵而成，其制备方法为：步骤一：选取优质市售脱毒马铃薯；市售枯草芽孢杆菌粉剂；步骤二：活化枯草芽孢杆菌粉剂：将枯草芽孢杆菌粉剂接种于培养液中，30℃，150r/min摇床培养36h，制得枯草芽孢杆菌粉剂种子液，备用；步骤三：发酵：取种子液接种于发酵培养基中，在30℃，150r/min条件下发酵7天，得发酵液；步骤四：测定发酵液活性：将发酵液5000r/min离心5min后过滤，收集处理的发酵液，利用马铃薯晚疫病菌为标靶，测定发酵液的抑菌活性；步骤五：收集发酵液：发酵液活性检测合格后，收集发酵液，备用。进一步，步骤二中培养液配方为：1L蒸馏水、20g葡萄糖、5g蛋白胨、5g氯化钠、0.5g牛肉膏、3g酵母，pH为7.1±1；进一步，步骤三中发酵培养基配方为：可溶性玉米淀粉20g、葡萄糖20g、脱脂奶粉10g、乳糖10g、玉米粉20g、豆饼粉20g、MgSO4·7H2O0.5g、K2HPO40.5g、水1000mL，PH为7.1±1。进一步，所述步骤四中抑菌活性测定采用滤纸片法测定抑菌活性，用打孔器制直径6mm的滤纸片若干，干热灭菌后，在甘松精油中浸泡2h，备用；分别取各种待测菌悬液0.15mL均匀涂布于固体培养基上，制成含菌平板；将浸泡过的滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴3片，另取无菌滤纸作对照37℃培养箱中培养24h，酿酒酵母、木霉置27℃培养箱中培养72h，测定抑菌圈直径mm，重复3次，结果取平均值。进一步，所述培养箱的温度模型在柱坐标系(x，y，t)下，轴对称多温度热化学非平衡流动的无量纲控制方程为：其中，其中，i＝1，2，…，N，N是所考虑的组分方程数，j＝1，2，…，M，M是所考虑的分子组分振动能方程数；ρi是组分i的密度，EVj是分子组分j的振动能量，T和TVj是平动温度和分子组分振动温度；Mi、hi、Di和ci是组分i的摩尔质量、焓、扩散系数和质量分数；Re是Reynolds数，k和kVj实平动和振动热传导系数，wi和wVj实化学飞平衡源项和振动能量源项；初始振动能量方程：得到振动非平衡能量源项：EVj和τVj分别是分子组分j的平衡振动能、非平衡振动能和振动能松弛的特征时间：N0＝6.023×1023mol-1。本专利技术的另一目的在于提供一种用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂的使用方法：在马铃薯幼苗期每间隔7天灌根使用一次，连续使用3次，也可与有机肥混合制成菌肥使用。综上所述，本专利技术的优点及积极效果为：本专利技术工艺简单，易于操作，不需要任何化学药品，对环境不会造成任何污染，对马铃薯的晚疫病具有较好的防治效果；枯草芽孢杆菌粉剂，能在植物表面形成一层保护膜，阻止病原菌侵染作物，并分泌抑菌物质，抑制病菌孢子发芽和菌丝生长。附图说明图1是本专利技术实施例提供的用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂的制备流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下面结合附图对本专利技术的应用原理做详细描述。如图1所示，本专利技术实施例提供的用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂的制备包括以下步骤：S101：选取优质市售脱毒马铃薯；市售枯草芽孢杆菌粉剂；S102：活化枯草芽孢杆菌粉剂：将枯草芽孢杆菌粉剂接种于培养液中，30℃，150r/min摇床培养36h，制得枯草芽孢杆菌粉剂种子液，备用；S103：发酵：取种子液接种于发酵培养基中，在30℃，150r/min条件下发酵7天，得发酵液；S104：测定发酵液活性：将发酵液5000r/min离心5min后过滤，收集处理的发酵液，利用马铃薯晚疫病菌为标靶，测定发酵液的抑菌活性；S105：收集发酵液：发酵液活性检测合格后，收集发酵液，备用。步骤S102中,本专利技术提供的培养液配方为：1L蒸馏水、20g葡萄糖、5g蛋白胨、5g氯化钠、0.5g牛肉膏、3g酵母，pH为7.1±1；步骤S103中,本专利技术提供的酵培养基配方为：可溶性玉米淀粉20g、葡萄糖20g、脱脂奶粉10g、乳糖10g、玉米粉20g、豆饼粉20g、MgSO4·7H2O0.5g、K2HPO40.5g、水1000mL，PH为7.1±1。本专利技术实施例提供的用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂的使用方法为：在马铃薯幼苗期每间隔7天灌根使用一次，连续使用3次，也可与有机肥混合制成菌肥使用。进一步，所述步骤四中抑菌活性测定采用滤纸片法测定抑菌活性，用打孔器制直径6mm的滤纸片若干，干热灭菌后，在甘松精油中浸泡2h，备用；分别取各种待测菌悬液0.15mL均匀涂布于固体培养基上，制成含菌平板；将浸泡过的滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴3片，另取无菌滤纸作对照37℃培养箱中培养24h，酿酒酵母、木霉置27℃培养箱中培养72h，测定抑菌圈直径mm，重复3次，结果取平均值。进一步，所述培养箱的温度模型在柱坐标系(x，y，t)下，轴对称多温度热化学非平衡流动的无量纲控制方程为：其中，其中，i＝1，2，…，N，N是所考虑的组分方程数，j＝1，2，…，M，M是所考虑的分子组分振动能方程数；ρi是组分i的密度，EVj是分子组分j的振动能量，T和TVj是平动温度和分子组分振动温度；Mi，hi，Di和ci是组分i的摩尔质量、焓、扩散系数和质量分数；Re是Reynolds数，k和kVj实平动和振动热传导系数，wi和wVj本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂，其特征在于，所述用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂由枯草芽孢杆菌粉剂发酵而成，制备方法为：步骤一：选取优质市售脱毒马铃薯；市售枯草芽孢杆菌粉剂；步骤二：活化枯草芽孢杆菌粉剂：将枯草芽孢杆菌粉剂接种于培养液中，30℃，150r/min摇床培养36h，制得枯草芽孢杆菌粉剂种子液，备用；步骤三：发酵：将种子液接种于发酵培养基中，在30℃，150r/min条件下发酵7天，得发酵液；步骤四：测定发酵液活性：将发酵液5000r/min离心5min后过滤，收集处理的发酵液，利用马铃薯晚疫病菌为标靶，测定发酵液的抑菌活性；步骤五：收集发酵液：发酵液活性检测合格后，收集发酵液，备用。

【技术特征摘要】
1.一种用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂，其特征在于，所述用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂由枯草芽孢杆菌粉剂发酵而成，制备方法为：步骤一：选取优质市售脱毒马铃薯；市售枯草芽孢杆菌粉剂；步骤二：活化枯草芽孢杆菌粉剂：将枯草芽孢杆菌粉剂接种于培养液中，30℃，150r/min摇床培养36h，制得枯草芽孢杆菌粉剂种子液，备用；步骤三：发酵：将种子液接种于发酵培养基中，在30℃，150r/min条件下发酵7天，得发酵液；步骤四：测定发酵液活性：将发酵液5000r/min离心5min后过滤，收集处理的发酵液，利用马铃薯晚疫病菌为标靶，测定发酵液的抑菌活性；步骤五：收集发酵液：发酵液活性检测合格后，收集发酵液，备用。2.如权利要求1所述的用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂，其特征在于，所述步骤二中培养液为：1L蒸馏水、20g葡萄糖、5g蛋白胨、5g氯化钠、0.5g牛肉膏、3g酵母，pH为7.1±1。3.如权利要求1所述的用于防治马铃薯晚疫病的生防菌剂，其特征在于，所述步骤三中发酵培养基为：可溶性玉米淀粉20g、葡萄糖20g、脱脂奶粉10g、乳糖10g、玉米粉20g、豆饼粉20g、MgSO4·7H2O0.5g、K2HPO40.5g、水1000mL，PH为7.1±1。4.如权利要求1所述的用于防治马铃薯晚疫病的生防...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟巍然，杨明，柯剑鸿，杨波华，焦大春，谢明菊，王卫强，任自明，
申请(专利权)人：重庆市农业科学院，
类型：发明
国别省市：重庆,50