一种金铁锁离体快繁方法技术

本发明专利技术提供了一种金铁锁的离体快繁方法，涉及植物组培技术领域。本发明专利技术所述方法包括以下步骤：1)以消毒后的金铁锁幼嫩组织为外植体，将所述外植体接种于诱导培养基上进行诱导培养，得诱导苗；2)将步骤1)得到的所述诱导苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得丛生苗；3)将从步骤2)得到的所述丛生苗中分离出的单芽接种于生根培养基中进行生根培养，得金铁锁离体快繁苗。本发明专利技术所述方案的外植体诱导率达95％，增殖系数达20～25倍以上，生根率达90％以上，移栽成活率达95％以上，未发现突变株，本发明专利技术方法能最大程度保持母株的优良性状，不仅操作简单，成本低廉，而且生根率高，根系发达，其组培苗移栽成活率高。

【技术实现步骤摘要】
一种金铁锁离体快繁方法
本专利技术属于植物组培
，具体涉及一种金铁锁离体快繁方法。
技术介绍
金铁锁(Psammosilenetunicoides)为石竹科金铁锁属药用植物，是中国西南地区特有单种属植物。金铁锁为中国传统名药“云南白药”的主要成分之一，也是多种知名中成药的主要成分。近年来随着人们对金铁锁药用价值的不断深入认识，需求量与日俱增。但由于受自然环境因素和人为作用的影响，金铁锁野生资源数量急剧下降，目前已作为珍稀濒危物种列入《中国植物红皮书》，属于国家二级重点保护植物，是研究石竹科系统进化非常重要的材料。生产中用金铁锁主要采用种子进行繁殖，但该方法发芽率极低，且不能保证繁育种苗品质的优良性。组织培养技术可以在短时间内获得大量的繁殖体，对解决金铁锁资源紧缺问题具有重要意义。目前国内也有少量有关金铁锁组织培养的文献报道，但多通过诱导愈伤组织进行金铁锁组织培养技术的研究，如陈杰等(2016)、李斌等(2016)、李景滨等(2011)均采用先诱导愈伤组织发生，然后通过诱导愈伤组织分化后获得金铁锁组培苗，该方法不仅操作繁琐其愈伤组织发生变异的概率较高，不能很好的保持母本的优良性状；采用常规的固体培养基诱导金铁锁生根率低，且粘附的固体培养基不易清洗，从而影响组培苗的移栽成活率。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种金铁锁离体快繁方法，突变频率低，能最大程度保持母株的优良性状，不仅操作简单，成本低廉，而且生根率高，根系发达，其组培苗移栽成活率高。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种金铁锁离体快繁方法，包括以下步骤：1)以金铁锁幼嫩组织为外植体，消毒后接种于诱导培养基上进行诱导培养，得诱导苗；所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.3～0.5mg/L的6-BA、0.2～0.5mg/L的NAA、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂；2)将步骤1)得到的所述诱导苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得丛生苗；所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.2～0.3mg/L的BA、0.2～0.4mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP333、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂；3)将从步骤2)得到的所述丛生苗中分离出的单芽接种于生根培养基中进行生根培养，得金铁锁离体快繁苗；所述生根培养基以改良B5培养基为基本培养基，还包括0.4～0.8mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP333和25～36g/L的蔗糖。优选的，步骤1)所述幼嫩组织包括幼嫩茎段。优选的，步骤1)所述消毒包括将所述外植体置于含洗洁精的水溶液中浸泡3～5min，取出后清洗干净；再置于质量浓度为0.1％的升汞溶液中浸泡5～8min，取出，冲洗4～5次。优选的，步骤1)所述诱导培养的光照时间为10～15h/d，光照强度为1500～2000lx，所述诱导培养的温度为23～25℃，所述诱导培养的时间为20～28d。优选的，步骤2)所述增殖培养的光照时间为10～15h/d，光照强度为1500～2000lx，所述增殖培养的温度为23～25℃，所述增殖培养的时间为20～25d。优选的，步骤3)所述生根培养的光照时间为10～15h/d，光照强度为1500～2000lx，所述生根培养的温度为23～25℃，所述生根培养的时间为20～25d。优选的，步骤3)所述生根培养后，还包括炼苗和移栽，得大田苗。优选的，所述炼苗为将离体快繁苗置于温室大棚中炼苗5～7d。优选的，所述移栽为将炼苗后的离体快繁苗移栽入基质中，所述基质包括椰糠和蛭石。优选的，所述椰糠和蛭石的体积比为(1～4)：1。本专利技术提供了一种金铁锁离体快繁方法，外植体直接诱导成苗，突变频率低，能最大程度保持母株的优良性状；利用液体培养基进行生根培养，不仅操作简单，成本低廉，而且生根率高，根系发达，其组培苗移栽成活率高。在本专利技术实施例中，外植体诱导率达95％，增殖系数达20～25倍，生根率达90％以上，移栽成活率达95％以上，未发现变异植株。具体实施方式本专利技术提供了一种金铁锁离体快繁方法，包括以下步骤：1)以金铁锁幼嫩组织为外植体，消毒后接种于诱导培养基上进行诱导培养，得诱导苗；所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.3～0.5mg/L的6-BA、0.2～0.5mg/L的NAA、25～36g/L的蔗糖和3～10g/L的琼脂；2)将步骤1)得到的所述诱导苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得丛生苗；所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.2～0.3mg/L的BA、0.2～0.4mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP333、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂；3)将从步骤2)得到的所述丛生苗中分离出的单芽接种于生根培养基中进行生根培养，得金铁锁离体快繁苗；所述生根培养基以改良B5培养基为基本培养基，还包括0.4～0.8mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP333和25～36g/L的蔗糖。在本专利技术所述金铁锁离体快繁方法中，以消毒后的金铁锁幼嫩组织为外植体，将所述外植体接种于诱导培养基上进行诱导培养，得诱导苗；所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.3～0.5mg/L的6-BA、0.2～0.5mg/L的NAA、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂。本专利技术所述幼嫩组织优选的包括幼嫩茎段，本专利技术对所述幼嫩茎段的来源并没有特殊限定，优选来源于生长健壮、无病虫害的金铁锁植株。本专利技术所述消毒优选包括将所述外植体置于含洗洁精的水溶液中浸泡3～5min，取出后清洗干净；再置于质量浓度为0.1％的升汞溶液中浸泡5～8min，取出，冲洗4～5次。本专利技术对所述含洗洁精的水溶液的浓度并没有特殊限定，利用本领域的常规洗洁精水溶液即可。本专利技术在所述含洗洁精的水溶液中浸泡时，优选包括用软毛刷清洗表面污垢。本专利技术所述升汞溶液浸泡优选在无菌条件下进行，所述无菌条件优选为超净工作台。本专利技术所述诱导培养优选为将所述外植体的生物学下端垂直竖插于诱导培养基中进行诱导培养。本专利技术所述诱导培养基中包含6-BA，所述6-BA在所述诱导培养基中的浓度优选为0.33～0.48mg/L，更优选为0.38～0.42mg/L，最优选为0.4mg/L。本专利技术所述诱导培养基中包含NAA，所述NAA在所述诱导培养基中的浓度优选为0.27～0.45mg/L，更优选为0.3～0.4mg/L，最优选为0.35mg/L。本专利技术所述诱导培养基中包含蔗糖，所述蔗糖在所述诱导培养基中的浓度优选为27～34g/L，更优选为28～32g/L，最优选为30g/L。本专利技术所述诱导培养中包含琼脂，所述琼脂在所述诱导培养基中的浓度优选为4.5～7.8g/L，更优选为5～7g/L，最优选为6g/L。本专利技术对所述诱导培养基中的各原料来源并没有特殊限定，利用本领域的常规试剂即可。本专利技术所述诱导培养的光照时间优选为10～15h/d，更优选为11～13h/d。最优选为12h/d。本专利技术所述诱导培养的光照强度优选为1500～2000lx，更优选为1600～1900lx，最优选为1800lx。本专利技术所述诱导培养的温度优选为23～25℃，更优选为24℃。本专利技术所述诱导培养的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金铁锁离体快繁方法，包括以下步骤：1)以金铁锁幼嫩组织为外植体，消毒后接种于诱导培养基上进行诱导培养，得诱导苗；所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.3～0.5mg/L的6‑BA、0.2～0.5mg/L的NAA、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂；2)将步骤1)得到的所述诱导苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得丛生苗；所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.2～0.3mg/L的BA、0.2～0.4mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP333、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂；3)将从步骤2)得到的所述丛生苗中分离出的单芽接种于生根培养基中进行生根培养，得金铁锁离体快繁苗；所述生根培养基以改良B5培养基为基本培养基，还包括0.4～0.8mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP333和25～36g/L的蔗糖。

【技术特征摘要】
1.一种金铁锁离体快繁方法，包括以下步骤：1)以金铁锁幼嫩组织为外植体，消毒后接种于诱导培养基上进行诱导培养，得诱导苗；所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.3～0.5mg/L的6-BA、0.2～0.5mg/L的NAA、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂；2)将步骤1)得到的所述诱导苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得丛生苗；所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.2～0.3mg/L的BA、0.2～0.4mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP333、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂；3)将从步骤2)得到的所述丛生苗中分离出的单芽接种于生根培养基中进行生根培养，得金铁锁离体快繁苗；所述生根培养基以改良B5培养基为基本培养基，还包括0.4～0.8mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP333和25～36g/L的蔗糖。2.根据权利要求1所述离体快繁方法，其特征在于，步骤1)所述幼嫩组织包括幼嫩茎段。3.根据权利要求1所述离体快繁方法，其特征在于，步骤1)所述消毒包括将所述外植体置于含洗洁精的水溶液中浸泡3～5min，取出后清洗干净；再置于质量浓度为0.1％的升汞溶液中浸...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾文丹，严华兵，曹升，谢向誉，陆柳英，尚小红，肖亮，赖大欣，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：广西,45