一种基于铜纳米簇复合物的比率荧光探针检测胆碱的方法技术

本发明专利技术属于贵金属纳米材料和比率荧光探针的制备技术领域，具体涉及一种基于溶菌酶稳定的铜纳米簇复合物及其比率荧光探针的制备方法。以水合肼为还原剂，溶菌酶为稳定剂制备了铜纳米簇。胆碱氧化酶催化胆碱产生过氧化氢，过氧化氢与辣根过氧化物酶氧化邻苯二胺生成二氨基酚嗪。由于二氨基酚嗪与铜纳米簇之间发生内滤效应，随着胆碱浓度的增加，二氨基酚嗪的荧光逐渐增强，而铜纳米簇的荧光被二氨基酚嗪逐渐猝灭，基于此可构建铜纳米簇与二氨基酚嗪荧光峰强度比率与胆碱浓度之间的线性关系，即制得比率荧光探针。该探针的制备方法简单，成本低，产品灵敏度高，可发展成为一种新颖的比率荧光探针，用于生物样品中胆碱的高效检测。

【技术实现步骤摘要】
一种基于铜纳米簇复合物的比率荧光探针检测胆碱的方法
：本专利技术属于贵金属纳米材料和比率荧光探针的制备
，具体涉及一种基于溶菌酶稳定的铜纳米簇复合物及其比率荧光探针的制备方法，其制备的探针可用于胆碱的高效检测。
技术介绍
：胆碱是哺乳动物必需的营养物质，胆碱衍生物在人类健康的发展中起着重要的作用。胆碱的前体乙酰胆碱是一种神经递质，它对神经系统和全身主要器官的功能至关重要。胆碱还可作为甲基供体甘氨酸甜菜碱的前体，参与单碳代谢。胆碱的缺乏可导致肝损害、神经系统疾病、细胞死亡、以及癌症。奶制品中含有胆碱，婴幼儿的营养摄入量一般仅限于普通牛奶，所以添加胆碱对人体健康非常重要。胆碱的水平异常在阿尔茨海默病和帕金森病等神经退行性疾病中起重要作用。胆碱含量变化对人体健康和疾病造成很大的影响，因此胆碱的定量测定在临床分析中具有重要意义。胆碱的传统检测方法是色谱法，但该方法存在耗时长、操作复杂、条件苛刻、成本高等问题。相比而言，发展基于生物传感器的分析方法可在一定程度上克服色谱法存在的问题。当前，基于生物传感器的胆碱分析方法有电化学法、比色法、荧光法、化学发光法等。文献检索表明，Qin等基于金纳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于铜纳米簇复合物的比率荧光探针检测胆碱的方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：(1)铜纳米簇的制备：将2毫克五水合硫酸铜加入到5毫升二次蒸馏水中，配制成硫酸铜水溶液。在磁力搅拌下，将0.3克溶菌酶溶于10毫升二次蒸馏水，直至其完全溶解，然后将溶菌酶水溶液放置在45摄氏度的恒温水浴中孵化。在磁力搅拌下，将硫酸铜水溶液缓慢加入溶菌酶水溶液中，制备溶菌酶与硫酸铜的混合水溶液，在45摄氏度水浴中搅拌10分钟。向混合水溶液中加入1摩尔/升的氢氧化钠溶液，将pH调至10‑11，滴加质量浓度为50％的水合肼调整混合水溶液的颜色从蓝色变为紫色，然后在45摄氏度水浴中搅拌反应10‑24小时；(2)...

【技术特征摘要】
1.一种基于铜纳米簇复合物的比率荧光探针检测胆碱的方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：(1)铜纳米簇的制备：将2毫克五水合硫酸铜加入到5毫升二次蒸馏水中，配制成硫酸铜水溶液。在磁力搅拌下，将0.3克溶菌酶溶于10毫升二次蒸馏水，直至其完全溶解，然后将溶菌酶水溶液放置在45摄氏度的恒温水浴中孵化。在磁力搅拌下，将硫酸铜水溶液缓慢加入溶菌酶水溶液中，制备溶菌酶与硫酸铜的混合水溶液，在45摄氏度水浴中搅拌10分钟。向混合水溶液中加入1摩尔/升的氢氧化钠溶液，将pH调至10-11，滴加质量浓度为50％的水合肼调整混合水溶液的颜色从蓝色变为紫色，然后在45摄氏度水浴中搅拌反应10-24小时；(2)将制备的铜纳米簇混合水溶液进行高速离心处理，去除不溶物，取上层清液透析5-10小时。透析后取出混合溶液进行旋蒸处理，将混合溶液中90％的水蒸发去除，剩余的溶液放入冷冻干燥箱中进行干燥。将干燥后得到的铜纳米簇分散于磷酸盐水缓冲液(0.2摩尔/升，pH为7.0)中备用；(3)二氨基吩嗪混合溶液的配制：称取162毫克邻苯二胺溶于磷酸盐水缓冲液中，制得3毫摩尔/升的邻苯二胺溶液。量取200微升该邻苯二胺溶液，向其中加入10微升1.5克/升的辣根过氧化物酶和10微升不同浓度的过氧化氢水溶液；(4)铜纳米簇与二氨基吩嗪混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：桂日军，卜祥宁，金辉，付永鑫，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：山东,37